Prepare el ratón para la cirugía. Afeitar los cuadrantes inferiores del abdomen con una maquinilla de afeitar y desinfectar la zona con yodo. Coloque el ratón sobre una superficie de trabajo limpia en su espalda con la cabeza apuntando lejos del operador.
Haga una incisión longitudinal de la piel de aproximadamente medio centímetro de largo en la parte inferior izquierda del abdomen. Tenga cuidado de no penetrar la cavidad peritoneal. Utilice tijeras pequeñas para extender la incisión de uno a dos centímetros.
Haga una incisión intramuscular para acceder a la cavidad peritoneal. En la mayoría de los casos, el cecum está en el lado izquierdo del abdomen. Aísle el cecum.
Usando fórceps anatómicos y contundentes, exponga suavemente y cuidadosamente el cecum a través de la incisión. El paso cuatro es la ligadura. La posición de la ligadura en el cecum determina el nivel de gravedad de la sepsis.
La ligadura de aproximadamente el 75% del cecum induce sepsis grave. La ligando el 50% del cecum induce sepsis de nivel medio. Mientras que ligar el 25% o menos del cecum dará lugar a una sepsis menor.
Ligar el cecum en la posición designada. Asegúrese de no ligar la válvula ileocecal. El paso cinco es perforar el cecum.
Usando una aguja, perforar el cecum con un solo paso y a través de la punción a mitad de camino entre la ligadura y la punta del cecum. Asegúrese de no perforar ningún vaso sanguíneo. Para asegurarse de que hubo una punción completa, extruya una pequeña gota de heces de ambos orificios de aguja.
Sustituya cuidadosamente el cecum en la cavidad abdominal. Cierre la musculatura abdominal aplicando suturas simples y cierrando la piel. Limpie la piel con yodo.
Inyecte el ratón con una solución salina precale calentada para reanimar. Coloque el ratón de nuevo en la jaula con acceso ilimitado a alimentos y agua. Después de unos tres días desde la ligadura cecal y la punción o el procedimiento de CLP, sometemos al ratón a un segundo golpe con una infección intranasal para estimular la neumonía que a menudo ocurre en la sepsis.
Acércate al cuello del ratón por detrás, suavemente y suavemente. El pulgar y el dedo índice de la mano izquierda forman una posición en forma de U. Sostenga el cuello inmediatamente detrás de las orejas para que la cabeza del ratón esté completamente restringida.
Introducir la infección intranasal. Usando una pipeta de 100 microlitros, inculcar la cepa estafiloco aureus por vía intranasal. Sosteniendo el ratón en posición vertical, deje caer lentamente de dos a tres microlitros de la solución bacteriana en ambas fosas nasales del ratón.
Levante el ratón hacia arriba y hacia abajo con la cabeza hacia arriba y hacia abajo para ayudar a la solución bacteriana a entrar en la tráquea. Levante el ratón rápidamente mientras lo baja suavemente y lentamente. Repita la instilación 15 veces o hasta que se infunda toda la solución bacteriana.
El último paso es finalizar el procedimiento. Poner el ratón sobre la ropa de cama en ángulo en un ángulo de aproximadamente 35 grados para recuperar. Asegúrese de que el ratón está detrás con la cabeza puesta.
Observe el ratón para asegurarse de que está completamente recuperado de la anestesia y el procedimiento. Después de aplanar la ropa de cama, coloque el ratón de nuevo en la jaula con acceso ilimitado a alimentos y agua. Los ratones comenzaron a morir alrededor de las 12 horas después de la inducción de la peritonitis.
La mortalidad fue mucho mayor para los ratones con TPC antes de una neumonía. Tres días después de la cirugía, los ratones con CLP tuvieron más mortalidad con una administración intranasal de estafilococo aureus. Los niveles de citoquinas proinflamatorias séricas aumentaron significativamente a las 24 horas después de la instilación bacteriana en ratones con sepsis en comparación con los ratones que tenían CLP solos o los Sham operaban ratones con un segundo golpe.
Sin embargo, los ratones de doble impacto mostraron una disminución significativa en los niveles de citoquinas de líquido BAL en comparación con la cirugía SA y Sham más ratones SA. Por lo tanto, clP afecta la defensa del huésped y aumenta la susceptibilidad a la infección. Este modelo de doble impacto es una herramienta valiosa para entender los mecanismos moleculares para la interacción huésped-patógeno, que pueden abrir la vía para desarrollar nuevos fármacos eficaces y otras terapias para las infecciones por soberbios.
