Para modelar la enfermedad pulmonar en ratones, los agentes experimentales a menudo se administran mediante inyección intratraqueal. Este enfoque, sin embargo, no puede apuntar selectivamente a un pulmón, y la distribución puede ser asimétrica entre los pulmones. Al cannular un pulmón individual en un ratón anestesiado, podemos administrar unilateralmente agentes experimentales.
Con la modificación, este enfoque se puede utilizar bilateralmente, mejorando la simetría de la deposición a través de ambos pulmones. La preparación del catéter, incluyendo pulido, ligera angulación y etiquetado, es un elemento clave para el éxito. Por supuesto, la práctica de esta técnica también es necesaria.
Demostrando el procedimiento estará Sumei Liao, una asistente de investigación profesional de mi laboratorio. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco de los dedos de los dedos de los dedos, suspenda un ratón C57-Black/6 anestesado de ocho a 10 semanas de edad de los incisivos en una línea de sutura cubierta en una orientación supina. Asegure el ratón con dos o tres piezas de gancho y coloque la cinta en bucle, evitando la restricción de ventilación, y encienda un iluminador de fibra óptica de diodo emisor de luz.
Coloque el operador detrás de la plataforma, dorsal al ratón. Oriente el cuello de cisne del iluminador de dos a tres centímetros de distancia del ratón para que encienda el área de la laringe a través de la piel. Usando fórceps estériles en la mano dominante, saque la lengua de la cavidad oral.
Utilice la mano nonteminante y el depresor estéril para aplanar la raíz de la lengua para exponer ampliamente la orofaringe. Después de liberar los fórceps, utilice la mano dominante para intubar el catéter extendido en la tráquea a través de la cavidad oral. Confirme la colocación observando si la burbuja de la jeringa se mueve hacia arriba y hacia abajo con cada respiración.
Para la canulación selectiva de lobar del pulmón derecho distal, después de la intubación intratraqueal, gire la placa de plástico 30 grados, y guíe el cubo del catéter en paralelo a la línea media del ratón a la profundidad adecuada basada en el peso, como se indica en la tabla. Con una punta de carga de gel, entregue 20 microlitros de 0.3%Evans de tinte azul en el catéter, seguido de una a dos alícuotas de 100 microlitros de aire por cuentagotas de vidrio. Luego, retire el catéter y mantenga el ratón en posición durante 30 segundos antes de colocar el animal en una manta de calentamiento, con monitoreo hasta la recuperación completa.
Para la cannulación selectiva de lobar del pulmón izquierdo distal, después de la intubación intratraqueal, gire la placa de plástico menos 74 grados, y avance suavemente el catéter hacia el bronquio del tronco principal izquierdo mientras coloca una presión modesta 90 grados hacia abajo y hacia el final del libro. Después de cánular los segmentos pulmonares inferiores izquierdos, gire la placa de plástico menos 30 grados y entregue 40 microlitros de 0.3% de colorante azul Evans con una punta de carga de gel. A continuación, entregue de una a dos alícuotas de aire de 100 a 300 microlitros a través del gotero de vidrio, y retire el catéter para permitir que el ratón se recupere, como se ha demostrado.
Para la administración pulmonar completa derecha, después de la intubación intratraqueal, gire la placa de plástico 30 grados, y guíe el catéter en paralelo a la línea media del ratón, llegando a las profundidades necesarias para la canulación de lobar distal del lado derecho. Confirme la apariencia del signo de taquipnea y gire el ratón menos 74 grados para permitir la asistencia por gravedad para la entrega del agente. Retire el catéter a una posición que corresponda al despegue del bronquio del tronco principal derecho y asegúrese de que el bisel del catéter mire hacia abajo.
Entregue 30 microlitros de 0.3%Evans de tinte azul al pulmón derecho, seguido de una a dos alícuotas de 100 a 300 microlitros de aire. Luego, retire el catéter y deje que el ratón se recupere. Para la administración pulmonar completa izquierda, después de la cánula intratraqueal, gire la placa de plástico menos 74 grados, y avance suavemente el catéter hacia el bronquio del tronco principal izquierdo mientras coloca una presión modesta tanto 90 grados hacia abajo como hacia el final de la reserva.
Confirme el signo de no taquipnea y gire el ratón 86 grados para permitir la asistencia por gravedad con la administración del agente. Retire el catéter hacia el bronquio del tronco central izquierdo y gire el bisel del catéter hacia abajo. Entregue 30 microlitros de 0.3%Evans de tinte azul con una punta de carga de gel al pulmón izquierdo, seguido de una a dos alícuotas de 100 a 300 microlitros de aire.
Luego, retire el catéter, para permitir que el ratón se recupere, como se ha demostrado. La administración bilateral de FITC-dextran por administración intratraqueal y simétrica intrabronquial conduce a fluorescencia FITC parénquima pulmonar asimétrica con mayores concentraciones relativas observadas en el pulmón izquierdo. Esto sugiere que la administración pulmonar asimétrica de agentes experimentales después de la administración intratraqueal no es una consecuencia de la presentación asimétrica de estos agentes a cada bronquio del tronco principal, pero que la entrega igual de troncos principales se diluye por diferencias en el peso pulmonar y la masa.
La administración intrabronquial ajustada por dosis mejora la simetría de la administración del agente parénquima pulmonar. A pesar de esta corrección, sin embargo, la heterogeneidad persistente todavía se observa dentro de los diferentes lóbulos del pulmón derecho. 21 días después de la lesión pulmonar fibrosa inducida por bleomicina intratraqueal, la inflamación se observa predominantemente en el pulmón izquierdo, con menos lesiones notables en el pulmón derecho.
Por el contrario, la administración de bleomicina intrabronquincial ajustada por dosis da como resultado una ligera disminución de la lesión en el pulmón izquierdo y un aumento de la lesión en el pulmón derecho, con la mayor lesión evidente en los lóbulos medio y superior. Durante toda la administración pulmonar, no olvide retirar el catéter y cuidar el bisel del catéter boca abajo.
