Es la primera vez que se muestra una recaída inducida por el estrés a la heroína después de la abstinencia impuesta por el castigo. Estos métodos podrían ayudarnos a comprender el mecanismo neuronal subyacente a la recaída inducida por el estrés en humanos después de la abstinencia voluntaria. Al utilizar la privación de alimentos y la abstinencia impuesta por el castigo, estamos imitando más de cerca la condición humana y aportando validez ecológica a los modelos animales de recaída.
Comience por configurar las cámaras de condicionamiento operantes como se describe en el manuscrito. Después de la recuperación de la cirugía, habitúe a la rata en la cámara de entrenamiento operante durante 24 horas antes de iniciar el protocolo sin unir la rata al resorte metálico. Coloque la rata alojada en las cámaras operantes durante todo el experimento.
A continuación, conecte el conector 5up al tubo Tygon y al resorte metálico. Comience la sesión de entrenamiento al inicio de la fase oscura del ciclo de luz invertida. Para la autoadministración de heroína, la palanca de toma debe estar disponible bajo proporción fija uno, o FR uno.
Programe cada prueba para comenzar con la inserción de la palanca de toma y el encendido de la luz de la casa. Una vez que la rata presione la palanca de toma una vez, retraiga la palanca de toma, encienda la luz de señal sobre la palanca y tone durante un período de tiempo de espera de 20 segundos. Apague la luz de la casa y permita la entrega de 0.13 mililitros de infusión de heroína a una dosis de 0.1 miligramos por kilogramo.
Luego programe un intervalo intertrial de 30 segundos en el que no se presenten señales, se apague la luz de la casa y se retraiga la palanca. Para la próxima prueba, inserte la palanca de toma y encienda la luz de la casa. Para la autoadministración con la cadena de toma de búsqueda bajo FR uno, programe el sistema de entrenamiento operante para insertar solo la palanca de búsqueda y encienda la luz de la casa para señalar el comienzo de la sesión con la palanca de toma en un estado retraído.
Una vez que la rata presiona una vez la palanca de búsqueda, el programa retrae la palanca de búsqueda e inserta la palanca de toma. Una pulsación en la palanca de toma retrae la palanca de toma e inicia el procedimiento de encender la luz de señal, y un intervalo intertrial de 30 segundos, como se demostró anteriormente. Después del intervalo entre juicios, programe el sistema de entrenamiento operante para insertar la palanca de búsqueda y encienda la luz de la casa para indicar el comienzo de la próxima prueba.
A continuación, programe todos los pasos para la autoadministración con una cadena de toma de búsqueda bajo una proporción fija uno, como se demostró anteriormente con la introducción de un intervalo variable de cinco durante tres días como el nuevo programa de refuerzo en la palanca de búsqueda. Configure el software para permitir que la primera pulsación en la palanca de búsqueda active el intervalo variable cinco horarios. Permita que el software seleccione aleatoriamente un tiempo de intervalo de una lista de 0.1, cinco y 10 segundos, lo que resulta en un intervalo promedio de cinco segundos.
Una vez transcurrido el intervalo seleccionado, la primera presión de la palanca de búsqueda retrae la palanca de búsqueda y extiende la palanca de toma. Después de seguir los pasos para la palanca de toma, y cuando termine la prueba, entrene a la rata durante cinco días bajo el intervalo variable 30 para el enlace de búsqueda. Para hacerlo, permita que el software seleccione aleatoriamente un tiempo de una lista de 15, 30 y 45 segundos durante un promedio de 30 segundos.
Luego, entrene ratas durante tres días bajo intervalos variables 60 horarios, lo que permite que el software seleccione aleatoriamente un tiempo de una lista de 45, 60 y 75 segundos. Para la abstinencia impuesta por el castigo, realice sesiones de castigo durante ocho días con supervisión regular para garantizar que las ratas no muestren signos de dolor anormal o problemas de salud. Comience las sesiones de castigo con la inserción de la palanca de búsqueda y encendiendo la luz de la casa.
Programe el sistema de entrenamiento operante para que después de completar el enlace de búsqueda en el intervalo variable 60, la palanca de búsqueda se retraiga, la luz de la casa se apague y se administre un leve golpe de pie a la rata en el 30% de los eslabones de búsqueda completados en lugar de insertar la palanca de toma. La palanca de toma se extiende en el otro 70% de los enlaces de búsqueda completados como en el ensayo regular de autoadministración. Después de programar un intervalo entre pruebas de siete minutos, establezca la intensidad del choque del pie en 0.2 miliamperios y aumente en 0.1 miliamperios por día de castigo hasta 1.0 miliamperios.
Una vez que la rata presiona la palanca de toma, repita la proporción fija un paso para la retracción de la palanca, la administración de la infusión de heroína y la presentación de las señales seguidas de un intervalo intertrial de siete minutos. Después del último día de la abstinencia impuesta por el castigo, retire las tolvas de alimentos de las cámaras para las ratas que se someten a una prueba de recaída inducida por privación de alimentos, y mantenga las tolvas de alimentos para el grupo saciado. Proporcionar acceso ilimitado al agua en ambos grupos y supervisar la salud de los animales.
Después de 24 horas de privación de alimentos, proceda a una prueba de búsqueda de heroína inducida por privación de alimentos de tres horas bajo un intervalo variable 60 con un intervalo entre juicios de siete minutos sin descargas ni infusiones de heroína. Después de la sesión, devuelva las tolvas de alimentos a las ratas privadas de alimentos. Al día siguiente, retire las tolvas de alimentos de las cámaras de las ratas que estaban saciadas en la primera prueba de recaída.
Permita que las ratas previamente privadas de alimentos tengan acceso ilimitado a los alimentos antes y durante la prueba. Después de 24 horas de privación de alimentos, realice una prueba de búsqueda de heroína de tres horas, como se demostró anteriormente. En el estudio, las ratas macho demostraron un aumento en las prensas de palanca de búsqueda a medida que aumentaba el programa de refuerzo.
Se observó un número confiable y constante de infusiones de heroína durante los días de entrenamiento. Durante el castigo, las ratas disminuyeron el número de prensas de palanca de búsqueda e infusiones con el aumento de la intensidad del choque del pie durante ocho días de castigo. En la prueba de búsqueda de heroína, la condición de privación de alimentos aumentó significativamente la búsqueda de heroína después de la abstinencia impuesta por el castigo, y no se observó ningún efecto estadísticamente significativo para el tiempo ni para la búsqueda de drogas a lo largo del tiempo a través de las condiciones de alimentación.
Sin este paso, los animales no podrán avanzar en los experimentos. Después de implementar el modelo, ahora podemos diseñar experimentos que analicen la neurobiología de la recaída inducida por el estrés después de la abstinencia voluntaria.
