Observación del fotoconducto en Chlamydomonas reinhardtii

La pregunta clave que aborda este método es, si una cepa de Chlamydomonas interesantes conserva la capacidad de comportamientos fotográficos o no. Este método es simple, rápido y fácil de probar si una cepa de interesante exhibe comportamientos fotográficos. Este método puede contribuir a la fotobiología y biología celular de la motilidad ciliar.

Demostrando el procedimiento estará Atsuko Isu, un técnico de laboratorio de mi laboratorio. Para comenzar, agregue de dos a tres mililitros de suspensión celular en una placa de Petri de 3,5 centímetros y coloque el plato en una caja de luz. Agite el plato suavemente para distribuir uniformemente las células y adquiera una imagen antes de la iluminación.

Ilumine el plato desde un lado con un diodo emisor de luz verde o LED en una habitación oscura de escritorio. Dejar el plato durante aproximadamente cinco minutos antes de adquirir imágenes. Para el ensayo de fototaxis utilizando gotas de cultivo celular, coloque 25 microlitros de gotas de suspensión celular directamente sobre una placa de plástico blanco usando una micro pipeta.

Ilumina las gotas de un lado con un LED verde en una habitación oscura de escritorio y déjalas durante tres minutos antes de adquirir imágenes. Coloque 30 microlitros de suspensión celular sobre un portaobjetos de vidrio y coloque un resbalón de cubierta de 18 por 18 milímetros con espaciadores en el lateral. Ilumine las muestras desde un lado del deslizamiento de la cubierta sin un espaciador con un LED verde, y observe las células bajo un microscopio de campo oscuro con una lente de objetivo 10X bajo una luz roja tenue.

Después de la iluminación de la luz, grabe la iluminación de la celda durante 20 segundos con un microscopio equipado con cámara. Para el ensayo de respuesta al fotoamortiguador, coloque 30 microlitros de suspensión celular en un portaobjetos de vidrio y coloque un resbalón de cubierta con espaciadores en la parte superior de la diapositiva. Observe la célula bajo un microscopio con luz roja tenue.

Aplique iluminación de flash con un flash de cámara mientras graba el movimiento de la celda. Aquí se muestra un ejemplo representativo de fototaxis negativa en Chlamydomonas reinhardtii después de cinco minutos de iluminación lateral. La mayoría de las células se acumularon en el lado opuesto de la fuente de luz.

En el ensayo de respuesta de fotoshock, casi todas las células exhibieron la respuesta de photoshock. Las células nadaron hacia atrás durante un corto período y se recuperaron nadando hacia adelante. Para realizar este procedimiento, use células de aridimigudolfase y expóngalas a la luz roja antes del ensayo.

Si no se expone a la luz roja, las células se volverán insensibles a la luz. Esta técnica aísla a varios mutantes con fototaxis anormales de respuestas de fotoshock. Además, se han identificado varios factores intracelulares y extracelulares que influyen en los comportamientos fotográficos.