El dispositivo de evaluación del dolor orofacial, u OPAD, es una herramienta valiosa para la investigación preclínica del dolor, ya que utiliza un paradigma de conflicto de recompensa operante. Esto abarca la nocicepción, el aprendizaje y la motivación, que son importantes en la experiencia del dolor humano y la mejora de la validez traslacional. Una ventaja significativa del OPAD sobre los ensayos tradicionales basados en reflejos es que está totalmente automatizado, lo que elimina la necesidad de restringir a los animales evitando los efectos relacionados con el estrés, y también reduce el sesgo del experimentador.
Demostrando la cirugía CCI del nervio infraorbitario estará Darrice Montgomery, un técnico de laboratorio de mi laboratorio. Comience con la configuración del dispositivo de evaluación del dolor orofacial, u OPAD, colocando las bandejas de goteo de leche, las jaulas de plexiglás y las rejillas metálicas para pisos. Conecte el cableado a las jaulas y deslice el soporte de la botella en el poste de metal en la parte posterior del dispositivo.
Luego, coloque las botellas de leche de recompensa en el soporte de la botella de manera que el animal pueda alcanzar el pico. Apriete la perilla del lado izquierdo del soporte para asegurar la botella en su lugar. Luego, encienda el panel frontal y encienda las jaulas.
Para configurar el protocolo, abra el software, ingrese la contraseña y haga clic en Iniciar sesión o presione Entrar. Haga clic en Nuevo experimento vacío y en el menú Protocolo. En Aparato, haga clic en Protocolo sin nombre y seleccione el modo que utilizará este protocolo.
En Modos específicos del equipo, seleccione Modo de jaula mecánica OPAD y asigne un nombre al protocolo. Después de asegurarse de que todas las jaulas estén encendidas, agregue las jaulas OPAD haciendo clic en Aparato y Agregar elemento en la parte superior del panel de protocolo, luego seleccione Nueva jaula OPAD y Agregar todas las jaulas OPAD conectadas. Para agregar las etapas de prueba del experimento, vaya a la pestaña Prueba para seleccionar las etapas, y las pestañas Primera etapa y, a continuación, asigne un nombre a la etapa.
Agregue 10 minutos como duración de la prueba. Agregue más etapas haciendo clic en la pestaña Agregar elemento, seguido de Nueva etapa. A continuación, asigne los grupos haciendo clic en Información adicional y Grupos de tratamiento.
Marque los grupos de tratamiento utilizados seguidos de la selección de la opción El usuario asignará manualmente los animales a sus grupos. Asigne identificaciones de animales haciendo clic en el menú Protocolo. En Información adicional, haga clic en ID de animal y marque la opción Usar mis identificaciones para referir animales.
Para establecer el experimento, escriba el título del experimento antes de hacer clic en Ver tratamientos y escribir los nombres del tratamiento. Agregue animales y asigne los tratamientos y las identificaciones de animales haciendo clic en Ver animales y Agregar animales. Introduzca el número de animales que se van a probar, seguido de Aceptar.
Una vez que aparezca la lista de animales, agregue la identificación del animal y el tratamiento para cada rata. Guarde el protocolo haciendo clic en el menú Protocolo seguido de Guardar protocolo. Introduzca el nombre de archivo y la contraseña del software y haga clic en Guardar.
Luego, guarde el archivo del experimento haciendo clic en el archivo, luego Guardar, escribiendo la contraseña del software y haciendo clic en la pestaña Guardar. Después de encender las jaulas, busque la luz verde en la jaula que indica que la jaula está lista para probar. Abra el archivo de experimento guardado con un doble clic.
Ingrese la contraseña, haga clic en Iniciar sesión o presione Entrar. En el lado izquierdo de la pantalla, anote el número de animales y la jaula correspondiente, la etapa que se ejecuta ese día y el estado de la prueba. Observe la identificación del animal de prueba en la pantalla de la jaula.
Coloque la rata en la jaula y presione el botón en la jaula correspondiente. Tenga en cuenta que la luz verde se convierte en una luz naranja una vez que comienza la prueba. Asegúrese de que el animal pueda acceder a la botella de recompensa mientras hace suficiente contacto con los picos mecánicos.
En el lado derecho de la pantalla, observe la tabla de cada animal que muestra el número de lamidos y contactos. Se escucha un sonido de advertencia cuando finaliza la sesión de prueba. Coloque la rata anestesiada en un banco de trabajo quirúrgico y conténgala.
Mantenga la temperatura corporal a 37 grados centígrados usando una almohadilla térmica. Aplique ungüento oftálmico en los ojos para evitar que se sequen. Use la hoja de bisturí 15 para hacer una pequeña incisión entre la encía dorsal y el labio.
Retire el tejido blando con la hoja de bisturí y revele la rama de los nervios infraorbitarios, o ION. Con la ayuda de una aguja de jeringa doblada roma, coloque dos ligaduras intestinales crómicas 5-O alrededor del ION, luego cierre la herida con adhesivo tisular. Aquí se presentan los intentos de contacto y los datos de lamido de una sola rata operada con CCI ION y Sham durante la sesión de prueba estándar de 10 minutos al inicio del estudio, y dos semanas, cuatro semanas y seis semanas después de la cirugía.
El modelo reveló que durante los períodos no nocivos las ratas tienen largas sesiones de bebida. Después de la lesión, el animal no puede mantener contacto facial con las barras con púas durante mucho tiempo, lo que resulta en una disminución del número de lamidos. En el grupo Sham, no se observaron cambios significativos para el período de bebida.
El número medio de lamidos entre CCI ION y ratas operadas con Sham al inicio del estudio no mostró diferencias significativas. Sin embargo, CCI ION redujo significativamente el número de lamidos hasta cuatro semanas después de la cirugía y aumentó la latencia para el primer lamido durante la semana posterior a la cirugía y una semana después de la lesión nerviosa, lo que indica hiperalgesia mecánica. No hubo cambios significativos en las ratas operadas por Sham.
Mientras usa el OPAD, optimice la distancia de la botella de leche y el ancho de los picos. Es importante mantener esto consistente para reducir los errores durante la recopilación de datos.
