Nuestra técnica dinámica de recolección continua de sangre del corazón de una rata es muy importante para analizar los componentes sanguíneos, contribuyendo a comprender las enfermedades cardiovasculares y sus enfermedades relacionadas. En comparación con los métodos de muestreo tradicionales, esta técnica tiene las ventajas de in vivo, en tiempo real, dinámica y no invasiva, sin micromoléculas biológicas y preproceso de muestra de título para una prueba extranjera. Esta técnica no solo es aplicable a las enfermedades cardiovasculares, sino que también debe funcionar para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades mediante la detección de biomarcadores sanguíneos combinados con cromatografía líquida de alta fase y espectrometría de masas.
Este método se puede utilizar para investigar enfermedades cardiovasculares como el infarto de miocardio, la apnea y la aterosclerosis. Además, también se aplica al edema pulmonar cardiogénico y a la embolia pulmonar y cerebral. Después de hacer la preparación experimental, conecte la entrada de la sonda de la unidad de diálisis con la aguja de la jeringa, el adaptador de tubo y el tubo FEP.
Verifique la permeabilidad del sistema de tuberías de microdiálisis perfundiendo una solución anticoagulante de citrato dextrosa en el sistema de tuberías. Haga una incisión para exponer la vena yugular derecha mediante la disección roma de tejido blando y fascia perivascular. Usando una sutura quirúrgica 4-0, haga un nudo deslizante desmontable en la vena yugular derecha en el extremo distal del corazón para bloquear el flujo sanguíneo temporalmente.
Luego haga una incisión en la vena yugular derecha cerca del corazón. Inserte un estilete de catéter en forma de aguja en la vena yugular derecha hacia el extremo proximal del corazón de la rata. Inserte la sonda de microdiálisis sanguínea en un catéter e implante la sonda con fórceps oftálmicos a lo largo de la incisión oblicua del estilete del catéter.
Retire el estilete del catéter guiado y sumerja completamente la membrana semipermeable de la sonda en la vena yugular derecha. Desenrede el nudo deslizante desmontable en el extremo distal del corazón para restaurar el flujo sanguíneo en la vena yugular derecha. Luego use suturas quirúrgicas 4-0 para ligar la sonda con la vena yugular derecha.
Coloque la rata despierta en un tanque de movimiento libre y conecte la sonda al sistema de microdiálisis. Luego irrigar la solución de dextrosa de citrato anticoagulante a una velocidad de dos microlitros por minuto durante una hora para equilibrar la membrana de diálisis de la sonda. Recoja muestras de sangre de microdiálisis y guárdelas temporalmente en un recipiente fraccional de cuatro grados centígrados.
Para reconfirmar que la sonda está en la vena yugular derecha, disecciona la rata. Retire la sonda de microdiálisis de la vena yugular derecha y colóquela en agua ultrapura. Conecte la sonda a la tubería y enjuague durante la noche con agua ultrapura para lavar completamente la sal residual en la tubería y la sonda.
Las muestras de sangre normales aparecieron de color rojo brillante, mientras que se observaron posibles coágulos de sangre en muestras hipóxicas. Las muestras obtenidas mediante la técnica de microdiálisis sanguínea fueron incoloras, claras y transparentes. Para evitar la destrucción de la membrana y la sonda de deslizamiento o desplazamiento, debemos prestar atención cuando estamos colocando y sumergiendo la sonda en la vena yugular de rata.
Las muestras de sangre obtenidas mediante la técnica de microdiálisis se pueden utilizar para analizar los biomarcadores de diferentes enfermedades y la distribución sanguínea de fármacos y metabolitos raros.
