Nossa técnica dinâmica de coleta contínua de sangue de um coração de rato é muito importante para analisar os componentes sanguíneos, contribuindo para a compreensão da doença cardiovascular e sua doença relacionada. Em comparação com os métodos tradicionais de amostragem, esta técnica tem as vantagens de in vivo, em tempo real, dinâmica e não invasiva, sem micromoleculares biológicos e pré-processo de titulação de amostra para um teste estranho. Esta técnica não é apenas aplicável a doenças cardiovasculares, mas também deve funcionar para o diagnóstico e tratamento de doenças, detectando biomarcadores sanguíneos combinados com cromatografia líquida de alta fase e espectrometria de massa.
Esse método pode ser utilizado na investigação de doenças cardiovasculares como infarto do miocárdio, apneia e aterosclerose. Além disso, também se aplica ao edema pulmonar cardiogênico e embolia pulmonar e cerebral. Depois de fazer o preparo experimental, conecte a entrada da sonda da unidade de diálise com a agulha da seringa, o adaptador de tubulação e a tubulação de FEP.
Verifique a patência do sistema de tubulação de microdiálise perfundindo solução anticoagulante citrato dextrose no sistema de tubulação. Fazer uma incisão para expor a veia jugular direita por dissecção romba de tecidos moles e fáscia perivascular. Usando uma sutura cirúrgica 4-0, faça um nó de deslizamento destacável na veia jugular direita na extremidade distal do coração para bloquear o fluxo sanguíneo temporariamente.
Em seguida, faça uma incisão na veia jugular direita perto do coração. Insira um estilete de cateter em forma de agulha na veia jugular direita em direção à extremidade proximal do coração do rato. Inserir a sonda de microdiálise sanguínea em um cateter e implantá-la com pinça oftálmica ao longo da incisão oblíqua do estilete do cateter.
Remova o estilete do cateter guiado e mergulhe totalmente a membrana semipermeável da sonda na veia jugular direita. Desvende o nó deslizante destacável na extremidade distal do coração para restaurar o fluxo sanguíneo na veia jugular direita. Em seguida, utilizar suturas cirúrgicas 4-0 para ligar a sonda com a veia jugular direita.
Coloque o rato acordado em um tanque de movimento livre e conecte a sonda ao sistema de microdiálise. Em seguida, irrigar a solução anticoagulante citrato dextrose a uma taxa de dois microlitros por minuto durante uma hora para equilibrar a membrana de diálise da sonda. Coletar amostras de sangue de microdiálise e mantê-las temporariamente em um recipiente fracionado de quatro graus Celsius.
Para reconfirmar que a sonda está na veia jugular direita, disseque o rato. Retire a sonda de microdiálise da veia jugular direita e coloque-a em água ultrapura. Conecte a sonda à tubulação e enxágue durante a noite com água ultrapura para lavar completamente o sal residual na tubulação e na sonda.
As amostras de sangue normais apareceram em vermelho vivo, enquanto potenciais coágulos sanguíneos foram observados em amostras hipóxicas. As amostras obtidas pela técnica de microdiálise sanguínea eram incolores, límpidas e transparentes. Para evitar a destruição da membrana e a sonda de deslizamento ou deslocamento, devemos prestar atenção quando estamos colocando e imergindo a sonda na veia jugular do rato.
As amostras de sangue obtidas através da técnica de microdiálise podem ser utilizadas para analisar os biomarcadores de diferentes doenças e a distribuição sanguínea de fármacos e metabólitos raros.
