Fertilization of <em>Xenopus oocytes</em> using the Host Transfer Method

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

University of Iowa

Spo11 &#x662F;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x86CB;&#x767D;&#x5177;&#x6709;&#x6839;&#x672C;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x662F;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x771F;&#x83CC;&#x3001; &#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x690D;&#x7269;&#x5728;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x91CD;&#x7EC4;&#x542F;&#x52A8;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7684; transesterase&#x3002;Spo11 &#x662F;&#x540C;&#x6E90;&#x5230; archaebacterial (Top6A) &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x7684;&#x62D3;&#x6251;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x548C;&#x5176;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x5927;&#x81F4;&#x5206;&#x5E03;&#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5177;&#x6709;&#x591A;&#x4E2A;&#x540C;&#x6E90;&#x7684;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x5173;&#x7CFB;&#x4E0D;&#x660E;&#x786E;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x662F;&#x5426;&#x771F;&#x6838;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x8D77;&#x6E90;&#x7684;&#x6A2A;&#x5411;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x4E00;&#x4E9B;&#x8FA9;&#x8BBA;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x5E76;&#x63CF;&#x8FF0;&#x79CD; Spo11 &#x540C;&#x6E90;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (PCR) &#x548C;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x548C;&#x5E8F;&#x5217;&#x4ECE;&#x516C;&#x5171;&#x6570;&#x636E;&#x5E93;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A; Spo11 &#x540C;&#x6E90;&#x8FDB;&#x5316;&#x800C;&#x6765;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x53E4;&#x4EE3;&#x771F;&#x6838;&#x57FA;&#x56E0;&#x91CD;&#x590D;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x524D;&#x6700;&#x540E;&#x7684;&#x5171;&#x540C;&#x7956;&#x5148;&#x73B0;&#x5B58;&#x7684;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x4E09;&#x4E2A;&#x771F;&#x6838; paralogs&#xFF1A; Spo11-1&#x3001; Spo11-2 &#x548C; Spo11-3&#x3002;Spo11-1 orthologs &#x7F16;&#x7801;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; Spo11-1 &#x867D;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x4E4B;&#x95F4;&#x771F;&#x6838;&#x8C31;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5206;&#x53D1;&#x4ECE;&#x4E00;&#x4E9B;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x3002;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4E0D;&#x8C0B;&#x800C;&#x5408;&#x7684; Spo11-2 orthologs&#xFF0C;&#x662F;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E2D;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#x3001; &#x7EA2;&#x85FB;&#x548C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x771F;&#x83CC;&#x4E2D;&#x3002;Spo11-3 &#x5C06;&#x7F16;&#x7801; Top6A &#x4E9A;&#x57FA;&#x4E0E;&#x62D3;&#x6251;&#x5F02;&#x6784;&#x9176; VIB &#x4EA4;&#x4E92;&#x4E9A;&#x57FA; (Top6B)&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E00;&#x8D77;&#x5728;&#x8425;&#x517B;&#x751F;&#x957F;&#x5728;&#x62DF;&#x5357;&#x82A5;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A; Spo11-3 (Top6A) &#x53CA; Top6B &#x540C;&#x6E90;&#x690D;&#x7269;&#x3001; &#x7EA2;&#x85FB;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5206;&#x5E03;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x5176;&#x53EF;&#x80FD;&#x5782;&#x76F4;&#x540E;&#x88D4;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7279;&#x5B9A;&#x635F;&#x5931;&#x3002;

&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7684; Spo11 &#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x62D3;&#x6251;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x7B2C;&#x516D;&#x79CD;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x63ED;&#x793A;&#x57FA;&#x56E0;&#x91CD;&#x590D;&#x548C;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7279;&#x5B9A;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x8FDB;&#x5316;&#x5386;&#x53F2;&#x3002;

Spo11 is a meiotic protein of fundamental importance as it is a conserved meiosis-specific transesterase required for meiotic recombination initiation in fungi, animals, and plants. Spo11 is homologous to the archaebacterial topoisomerase VIA (Top6A) gene, and its homologs are broadly distributed among eukaryotes, with some eukaryotes having more than one homolog. However, the evolutionary relationships among these genes are unclear, with some debate as to whether eukaryotic homologs originated by lateral gene transfer. We have identified and characterized protist Spo11 homologs by degenerate polymerase chain reaction (PCR) and sequencing and by analyses of sequences from public databases. Our phylogenetic analyses show that Spo11 homologs evolved by two ancient eukaryotic gene duplication events prior to the last common ancestor of extant eukaryotes, resulting in three eukaryotic paralogs: Spo11-1, Spo11-2, and Spo11-3. Spo11-1 orthologs encode meiosis-specific proteins and are distributed broadly among eukaryotic lineages, though Spo11-1 is absent from some protists. This absence coincides with the presence of Spo11-2 orthologs, which are meiosis-specific in Arabidopsis and are found in plants, red algae, and some protists but absent in animals and fungi. Spo11-3 encodes a Top6A subunit that interacts with topoisomerase VIB (Top6B) subunits, which together play a role in vegetative growth in Arabidopsis. We identified Spo11-3 (Top6A) and Top6B homologs in plants, red algae, and a few protists, establishing a broader distribution of these genes among eukaryotes, indicating their likely vertical descent followed by lineage-specific loss.

Protist homologs of the meiotic Spo11 gene and topoisomerase VI reveal an evolutionary history of gene duplication and lineage-specific loss.

Spo11 est une prot&eacute;ine m&eacute;iotique d&#39;une importance fondamentale, car c&#39;est un transesterase sp&eacute;cifiques &agrave; la m&eacute;iose conserv&eacute;e, requis pour l&#39;initiation de la recombinaison m&eacute;iotique dans les champignons, les animaux et les plantes. Spo11 est homologue &agrave; la topoisom&eacute;rase archaebact&eacute;ries VIA g&egrave;ne (Top6A), et ses homologues sont largement r&eacute;pandus chez les eucaryotes, avec certains eucaryotes ayant plus d&#39;un homologue. Cependant, les relations &eacute;volutives entre ces g&egrave;nes sont peu claires, avec un d&eacute;bat quant &agrave; si transf&eacute;rer des homologues chez les eucaryotes &eacute;mis par g&eacute;niques lat&eacute;raux. Nous avons identifi&eacute; et caract&eacute;ris&eacute; les homologues de Spo11 protist par d&eacute;g&eacute;n&eacute;r&eacute;s polymerase chain reaction (PCR) et de s&eacute;quen&ccedil;age et par l&#39;analyse des s&eacute;quences de bases de donn&eacute;es publiques. Nos analyses phylog&eacute;n&eacute;tiques montrent que les homologues Spo11 &eacute;volu&eacute; par deux &eacute;v&egrave;nements de duplication des g&egrave;nes eucaryotes antique avant le dernier anc&ecirc;tre commun des eucaryotes existantes, entra&icirc;nant trois paralogues eucaryotes : Spo11-1 Spo11-2 et Spo11-3. Spo11-1 orthologues codent pour des prot&eacute;ines sp&eacute;cifiques &agrave; la m&eacute;iose et sont distribu&eacute;es largement parmi les lign&eacute;es eucaryotes, mais Spo11-1 est absent de certains protistes. Cette absence co&iuml;ncide avec la pr&eacute;sence des orthologues Spo11-2, qui sont sp&eacute;cifiques &agrave; la m&eacute;iose chez Arabidopsis et sont trouvent dans les plantes, les algues rouges et quelques protistes, mais absent chez les animaux et les champignons. Spo11-3 code une sous-unit&eacute; de Top6A qui interagit avec la topoisom&eacute;rase VIB sous-unit&eacute;s (Top6B), qui ensemble jouent un r&ocirc;le dans la croissance v&eacute;g&eacute;tative chez Arabidopsis. Nous avons identifi&eacute; Spo11-3 (Top6A) et Top6B homologues dans les plantes, les algues rouges et quelques protistes, &eacute;tablissant une distribution plus large de ces g&egrave;nes chez les eucaryotes, indiquant leur probable descente verticale suivie de la perte de lign&eacute;e sp&eacute;cifique.

Homologues de protiste de la m&eacute;iose Spo11 g&egrave;ne et topoisom&eacute;rase VI r&eacute;v&egrave;lent une histoire &eacute;volutionnaire de la duplication de g&egrave;nes et de la perte de la lign&eacute;e sp&eacute;cifique.

Spo11 ist ein meiotischen Protein von grundlegender Bedeutung, da es eine konservierte Meiose-spezifische Transesterase f&uuml;r meiotischen Rekombination Einleitung in Pilze, Tiere und Pflanzen erforderlich ist. Spo11 ist Homolog zu der Archaebacterial Topoisomerase VIA (Top6A)-Gen und seine UCP1 sind Eukaryoten, mit einigen Eukaryoten haben mehr als ein homologes breit verteilt. Die evolution&auml;ren Beziehungen zwischen dieser Gene sind jedoch unklar, mit einige Diskussionen dar&uuml;ber, ob eukaryotischen UCP1 stammt von lateral Gene transfer. Wir haben erkannt und gekennzeichnet Protisten Spo11 UCP1 degenerierte Polymerase-Kettenreaktion (PCR) und Sequenzierung sowie Analysen von Sequenzen aus &ouml;ffentlichen Datenbanken. Unsere phylogenetischen Analysen zeigen, dass Spo11 UCP1 durch zwei antike eukaryotischen Gens Vervielf&auml;ltigung Ereignisse vor den letzten gemeinsamen Vorfahren der erhaltenen Eukaryoten, was zu drei eukaryotischen Paralogs entwickelt: Spo11-1, Spo11-2 und Spo11-3. Spo11-1 Orthologen Meiose-spezifische Proteine codieren und sind im gro&szlig;en und ganzen eukaryotischen Linien verteilt, wenn Spo11-1 nicht angezeigt wird von einigen Einzellern. Diese Abwesenheit f&auml;llt zusammen mit der Anwesenheit von Spo11-2 Orthologen, die Meiose-spezifische in Arabidopsis und sind in Pflanzen, Rotalgen und einige Einzeller gefunden, aber abwesend in Tieren und Pilzen. Spo11-3 kodiert eine Top6A-Untereinheit, die mit Topoisomerase VIB interagiert (Top6B)-Untereinheiten, die zusammen im vegetativen Wachstums in Arabidopsis eine Rolle spielen. Wir identifiziert Spo11-3 (Top6A) und Top6B UCP1 in einigen Einzellern, Pflanzen und Rotalgen, &uuml;ber eine breitere Verteilung dieser Gene unter Eukaryoten angibt, ihre wahrscheinlich vertikalen Abstieg, gefolgt von Herkunfts-spezifischen Verlust.

Protisten UCP1 des meiotischen Spo11 gen und Topoisomerase VI enth&uuml;llen eine evolution&auml;re Geschichte der Genduplikation und Herkunfts-spezifischen Verlust.

Spo11 &egrave; una proteina meiotic di fondamentale importanza in quanto &egrave; un conservato transesterase meiosi specifici richiesti per l&#39;iniziazione di ricombinazione meiotic in funghi, animali e piante. Spo11 &egrave; omologa alla topoisomerasi archaebacterial VIA gene (Top6A), e suoi omologhi sono largamente distribuiti tra gli eucarioti, con alcuni eucarioti avendo pi&ugrave; di un omologo. Tuttavia, le relazioni evolutive tra questi geni non sono chiare, con qualche dibattito se trasferimento omologhi eucariotiche ha provenuti dal gene laterale. Abbiamo identificato e caratterizzato omologhi di Spo11 protista degenerato polymerase chain reaction (PCR) e sequenziamento e analisi delle sequenze da banche dati pubbliche. La nostra analisi filogenetiche mostrano che Spo11 omologhi si sono evoluti da due eventi di duplicazione genica eucariotica antica prima dell&#39;ultimo antenato comune di eucarioti esistenti, con conseguente paralogs eucariotica tre: Spo11-1, Spo11-2 e 3 di Spo11. Spo11-1 orthologs codificano proteine specifiche di meiosi e sono distribuiti ampiamente tra i lignaggi eucariotiche, sebbene Spo11-1 &egrave; assente da alcuni protisti. Questa assenza coincide con la presenza di Spo11-2 orthologs, che sono specifici di meiosi in Arabidopsis e sono trovati in piante, alghe rosse e alcuni protisti, ma assente negli animali e nei funghi. Spo11-3 codifica per una subunit&agrave; Top6A che interagisce con topoisomerasi VIB subunit&agrave; (Top6B), che insieme hanno un ruolo nella crescita vegetativa in Arabidopsis. Abbiamo identificato Spo11-3 (Top6A) e Top6B omologhi in piante, alghe rosse e alcuni protisti, stabilire una pi&ugrave; ampia distribuzione di questi geni tra gli eucarioti, indicando loro probabile discesa verticale seguita da perdita di lineage-specifici.

Omologhi protista del meiotic Spo11 gene e topoisomerasi VI rivelano una storia evolutiva di duplicazione genica e lineage-specifici di perdita.

&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x83CC;&#x985E;&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x56FA;&#x6709; transesterase &#x3068;&#x3057;&#x3066; Spo11 &#x306E;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Spo11 &#x59CB;&#x539F;&#x30C8;&#x30DD;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; (Top6A) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x3001;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306F; 1 &#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x7269;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x5E83;&#x304F;&#x914D;&#x5E03;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x7684;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6C34;&#x5E73;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3068;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x8B58;&#x5225;&#x3001;&#x539F;&#x751F; Spo11 &#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306E;&#x516C;&#x5171;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x7E2E;&#x9000;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC; (PCR) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Spo11 &#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x53E4;&#x4EE3;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x91CD;&#x8907;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067; 3 &#x3064;&#x306E;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x30D1;&#x30E9;&#x30ED;&#x30B0;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x5171;&#x901A;&#x7956;&#x5148;&#x73FE;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x9032;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x5F53;&#x793E;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x8868;&#x793A;: Spo11 1&#x3001;Spo11 2&#x3001;Spo11 3&#x3002;Spo11 1 &#x30AA;&#x30EB;&#x30BD;&#x30ED;&#x30B0;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7279;&#x7570;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7B26;&#x53F7;&#x5316;&#x3057;&#x3066; Spo11 1 &#x306F;&#x6B20;&#x5E2D;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x5E83;&#x304F;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x9593;&#x3067;&#x914D;&#x5E03;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x539F;&#x751F;&#x751F;&#x7269;&#x304B;&#x3089;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306F;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x56FA;&#x6709;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x3001;&#x7D05;&#x85FB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x539F;&#x751F;&#x751F;&#x7269;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x6B20;&#x5E2D; Spo11 2 &#x30AA;&#x30EB;&#x30BD;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x52D5;&#x7269;&#x3068;&#x83CC;&#x985E;&#x3002;Spo11 3 &#x30C8;&#x30DD;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; VIB &#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30B7;&#x30ED;&#x30A4;&#x30CC;&#x30CA;&#x30BA;&#x30CA;&#x306E;&#x751F;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059; (Top6B) &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; Top6A &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Spo11 3 (Top6A) &#x3068; Top6B &#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x690D;&#x7269;&#x3001;&#x7D05;&#x85FB;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x539F;&#x751F;&#x751F;&#x7269;&#x7CFB;&#x7D71;&#x56FA;&#x6709;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x5F7C;&#x3089;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x306E;&#x5782;&#x76F4;&#x964D;&#x4E0B;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x8B58;&#x5225;&#x3002;

&#x539F;&#x751F;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306F;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E; Spo11 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C8;&#x30DD;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; VI &#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x53F2;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x91CD;&#x8907;&#x3068;&#x7CFB;&#x7D71;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Spo11&#xB294; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC758; meiotic &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; meiotic &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xACF0; &#xD321;&#xC774;, &#xB3D9;&#xBB3C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; meiosis &#xD2B9;&#xC815; transesterase &#xC774;&#xB2E4;. Spo11 (Top6A) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; archaebacterial topoisomerase &#xB3D9;&#xC885; &#xC774;&#xBA70; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xCCB4; &#xB370; &#xC77C;&#xBD80; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xC0B0; &#xB418;&#xC5B4; &#xADF8; homologs. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAC04;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xAD00;&#xACC4; &#xCE21;&#xBA74; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC9C4; &#xD575; homologs&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xC5EC;&#xBD80;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB17C;&#xC7C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xC6D0;&#xC0DD;&#xC0DD;&#xBB3C; Spo11 homologs &#xD0C0;&#xB77D; &#xD55C; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (PCR)&#xACFC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xD558; &#xACE0; &#xACF5;&#xC6A9; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; phylogenetic &#xBD84;&#xC11D; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; Spo11 homologs &#xC138; &#xC9C4; &#xD575; paralogs&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xD604;&#xC874; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; &#xACF5;&#xD1B5; &#xC870;&#xC0C1; &#xC774;&#xC804; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xACE0; &#xB300; &#xC9C4; &#xD575; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C4;&#xD654;: Spo11 1, Spo11 2, Spo11 3. Spo11-1 orthologs &#xC778;&#xCF54;&#xB529; meiosis &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; Spo11-1&#xC740; &#xACB0; &#xC11D; &#xC9C4; &#xD575; &#xACC4;&#xBCF4; &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD84;&#xC0B0; &#xB418;&#xC5B4; &#xC77C;&#xBD80; protists&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC774; &#xBD80;&#xC7AC;&#xB294; Arabidopsis&#xC758; meiosis &#xD2B9;&#xC815; &#xACE0; &#xBD89;&#xC740; &#xC870;&#xB958; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xACFC; &#xC77C;&#xBD80; protists&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xACB0; &#xC11D; Spo11 2 orthologs&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xACFC; &#xADE0; &#xB958;&#xC5D0;&#xC11C;. Spo11-3 &#xD568;&#xAED8; Arabidopsis &#xC2DD;&#xBB3C; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; (Top6B) subunits topoisomerase VIB&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; Top6A &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Spo11-3 (Top6A)&#xACFC; &#xC2DD;&#xBB3C;, &#xBD89;&#xC740; &#xC870;&#xB958; &#xBC0F; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; protists Top6B homologs &#xC5B4; &#xB9AC;&#xB2C8;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB828; &#xC190;&#xC2E4;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC218;&#xC9C1; &#xAC15;&#xD558;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;, &#xC911;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBC30;&#xD3EC; &#xC124;&#xC815; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC6D0;&#xC0DD;&#xC0DD;&#xBB3C; homologs meiotic Spo11 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; topoisomerase VI&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC911;&#xBCF5; &#xBC0F; &#xACC4;&#xBCF4; &#xAD00;&#xB828; &#xC190;&#xC2E4;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xC5ED;&#xC0AC;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Spo11 es una prote&iacute;na mei&oacute;tica de fundamental importancia ya que es un conservado transesterase meiosis espec&iacute;ficos necesario para la iniciaci&oacute;n de la recombinaci&oacute;n mei&oacute;tica en hongos, animales y plantas. Spo11 es hom&oacute;loga a la topoisomerasa archaebacterial VIA gene (Top6A), y sus hom&oacute;logos se distribuyen ampliamente entre eucariotas, con algunos eucariotas tener m&aacute;s de un hom&oacute;logo. Sin embargo, las relaciones evolutivas entre estos genes son claros, con cierto debate sobre si transferencia hom&oacute;logos eucariotas originados por gene lateral. Hemos identificado y caracterizado hom&oacute;logos de Spo11 Protista por reacci&oacute;n en cadena degenerado de la polimerasa (PCR) y secuenciaci&oacute;n y an&aacute;lisis de secuencias de bases de datos p&uacute;blicas. Nuestros an&aacute;lisis filogen&eacute;ticos muestran que Spo11 hom&oacute;logos desarrollado por dos eventos de duplicaci&oacute;n de genes eucari&oacute;ticos antigua antes del &uacute;ltimo antepasado com&uacute;n de los eucariotas existentes, dando lugar a tres paralogs eucariotas: Spo11-1 Spo11-2 y Spo11-3. Spo11-1 ort&oacute;logos codifican prote&iacute;nas espec&iacute;ficas de la meiosis y se distribuyen ampliamente entre linajes de eucariotas, aunque Spo11-1 est&aacute; ausente de algunos protistas. Esta ausencia coincide con la presencia de Spo11-2 ort&oacute;logos, que son espec&iacute;ficos de la meiosis en Arabidopsis y se encuentran en plantas, algas rojas y algunos protistas pero ausente en animales y hongos. Spo11-3 codifica una subunidad Top6A que interact&uacute;a con la topoisomerasa VIB subunidades (Top6B), que juntos desempe&ntilde;an un papel en el crecimiento vegetativo en Arabidopsis. Se identificaron Spo11-3 (Top6A) y Top6B hom&oacute;logos en plantas, algas rojas y algunos protistas, establecer una distribuci&oacute;n m&aacute;s amplia de estos genes entre eucariotas, lo que indica su probable descenso vertical seguido de p&eacute;rdida de linaje espec&iacute;fico.

Hom&oacute;logos Protista del mei&oacute;tica Spo11 gene y topoisomerasa VI revelan una historia evolutiva de la duplicaci&oacute;n del gene y p&eacute;rdida de linaje espec&iacute;fico.

&#x80FD;&#x529B;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x751F;&#x6210;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x4E3B;&#x673A;&#x5973;&#x6027;&#x53D7;&#x5B55;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5DF2;&#x8FC5;&#x901F;&#x5B9A;&#x6027;&#x4EA7;&#x5987;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x53D1;&#x80B2;&#x4E2D;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x4EA7;&#x5987;&#x5206;&#x6CCC;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x67AF;&#x7AED;&#x4F7F;&#x7528;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; H &#x6D3B;&#x6027;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x53CD;&#x4E49; deoxyoligonucleotides (&#x770B;)&#x3002;&#x81EA;&#x53CD;&#x4E49;&#x8BD5;&#x5242;&#x6216;&#x5206;&#x6CCC;&#x6CE8;&#x5C04;&#x9E21;&#x86CB;&#x65BD;&#x80A5;&#x5F80;&#x5F80;&#x672A;&#x80FD;&#x5F71;&#x54CD;&#x5230;&#x4EA7;&#x5987;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;mRNA &#x8017;&#x5C3D;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x540E;&#x7279;&#x522B;&#x9002;&#x5408;&#x7528;&#x6765;&#x8BC4;&#x4F30;&#x4EA7;&#x5987;&#x7684;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x6B21;&#x5BA1;&#x67E5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x53CD;&#x4E49;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x7A81;&#x51FA;&#x548C;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x9009;&#x62E9;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x770B;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x603B;&#x7ED3;&#x65BD;&#x80A5;&#x4E3B;&#x673A;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x548C;&#x89E3;&#x91CA;&#x7684;&#x53CD;&#x4E49;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x6280;&#x672F;&#x4E0A;&#x8981;&#x6C42;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x5728;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x53CD;&#x4E49;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x89E3;&#x51B3;&#x751F;&#x7269;&#x662F;&#x5176;&#x4ED6;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E2D;&#x68D8;&#x624B;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

&#x53CD;&#x4E49;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5728;&#x975E;&#x6D32;&#x722A;&#x87FE;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

The ability to manipulate gene expression in Xenopus oocytes and then generate fertilized embryos by transfer into host females has made it possible to rapidly characterize maternal signaling pathways in vertebrate development. Maternal mRNAs in particular can be efficiently depleted using antisense deoxyoligonucleotides (oligos), mediated by endogenous RNase-H activity. Since the microinjection of antisense reagents or mRNAs into eggs after fertilization often fails to affect maternal signaling pathways, mRNA depletion in the Xenopus oocyte is uniquely suited to assessing maternal functions. In this review, we highlight the advantages of using antisense in Xenopus oocytes and describe basic methods for designing and choosing effective oligos. We also summarize the procedures for fertilizing cultured oocytes by host-transfer and interpreting the specificity of antisense effects. Although these methods can be technically demanding, the use of antisense in oocytes can be used to address biological questions that are intractable in other experimental settings.

The use of antisense oligonucleotides in Xenopus oocytes.

La capacit&#xE9; de manipuler l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes dans les ovocytes de Xenopus, puis g&#xE9;n&#xE9;rer des embryons f&#xE9;cond&#xE9;s par transfert dans des femelles d&#x26;#39;accueil a permis de caract&#xE9;riser rapidement maternels voies de signalisation dans le d&#xE9;veloppement des vert&#xE9;br&#xE9;s. ARNm maternels en particulier, peuvent &#xEA;tre efficacement appauvri en utilisant d&#xE9;soxyoligonucl&#xE9;otides antisens (oligos), sous la m&#xE9;diation endog&#xE8;ne RNase-H activit&#xE9;. Depuis la micro-injection de r&#xE9;actifs antisens ou ARNm dans des &#x153;ufs apr&#xE8;s la f&#xE9;condation &#xE9;choue souvent &#xE0; affecter maternels voies de signalisation, l&#x26;#39;appauvrissement de l&#x26;#39;ARNm dans l&#x26;#39;ovocyte de Xenopus est particuli&#xE8;rement bien adapt&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;valuation des fonctions maternelles. Dans cette revue, nous mettons en &#xE9;vidence les avantages de l&#x26;#39;utilisation antisens dans les ovocytes de Xenopus et d&#xE9;crire les m&#xE9;thodes de base pour la conception et le choix des oligos efficaces. Nous r&#xE9;sumons &#xE9;galement les proc&#xE9;dures de fertilisation des ovocytes en culture par l&#x26;#39;h&#xF4;te de transfert et l&#x26;#39;interpr&#xE9;tation de la sp&#xE9;cificit&#xE9; des effets antisens. Bien que ces m&#xE9;thodes peuvent &#xEA;tre techniquement difficile, l&#x26;#39;utilisation de antisens dans les ovocytes peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour r&#xE9;pondre &#xE0; des questions biologiques qui sont insolubles dans d&#x26;#39;autres contextes exp&#xE9;rimentaux.

L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;oligonucl&#xE9;otides antisens dans les ovocytes de Xenopus

Genexpression in Xenopus Oocytes zu manipulieren und anschlie&szlig;end generieren befruchtete Embryonen durch &Uuml;bertragung in Host Frauen machte es m&ouml;glich, m&uuml;tterliche Signalwege in vertebrate Entwicklung rasch zu charakterisieren. M&uuml;tterliche mRNAs k&ouml;nnen besonders effizient mit antisense Deoxyoligonucleotides (Oligos), vermittelt durch endogene RNase H-Aktivit&auml;t ersch&ouml;pft sein. Seit dem Microinjection der antisense Reagenzien oder mRNAs in Eier nach Befruchtung oft nicht m&uuml;tterlichen Signalwege beeinflussen eignet mRNA Ersch&ouml;pfung in der Eizelle Xenopus eindeutig zur Bewertung der m&uuml;tterlicher Funktionen. In diesem Bericht wir markieren die Vorteile der Verwendung von &quot;Antisense&quot; in Xenopus Oocytes und beschreiben die grundlegende Methoden f&uuml;r die Gestaltung und effektive Oligos ausw&auml;hlen. Wir fassen auch die Verfahren zur D&uuml;ngung kultivierten Eizellen von Host-Transfer und Spezifit&auml;t der antisense-Effekte zu interpretieren. Obwohl diese Methoden technisch anspruchsvoll sein k&ouml;nnen, kann die Verwendung von &quot;Antisense&quot; in Eizellen, biologische Fragen behandeln, die auf dem anderen experimentellen therapieresistente sind verwendet werden.

Die Verwendung von antisense Oligonucleotides in Xenopus Oocytes.

La capacit&agrave; di manipolare l&#39;espressione genica in ovociti di Xenopus e quindi generare embrioni fecondati dal trasferimento in femmine host ha reso possibile caratterizzare rapidamente materne segnalazione percorsi nello sviluppo vertebrato. Materna mRNAs in particolare pu&ograve; essere efficientemente impoverito utilizzando deoxyoligonucleotides antisenso (oligos), mediato da attivit&agrave; endogena di RNAsi H. Poich&eacute; la microiniezione di reagenti antisenso o mRNAs in uova dopo fecondazione spesso non riesce a incidere materna signaling pathways, deplezione di mRNA in ovocita Xenopus &egrave; univocamente adatta a valutare le funzioni materne. In questa recensione, abbiamo evidenziare i vantaggi dell&#39;utilizzo di antisenso in ovociti di Xenopus e descrivere i metodi di base per la progettazione e scegliendo i oligos efficaci. Abbiamo anche riassumere le procedure per fecondare gli ovociti colti da host-trasferimento e interpretare la specificit&agrave; degli effetti antisenso. Sebbene questi metodi possono essere tecnicamente impegnative, l&#39;uso di antisenso di ovociti pu&ograve; essere utilizzato per affrontare questioni biologiche che sono intrattabile in altre impostazioni sperimentali.

L&#39;uso di oligonucleotidi antisenso in ovociti di Xenopus.

&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x96CC;&#x3078;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53D7;&#x7CBE;&#x80DA;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x3067;&#x6BCD;&#x65B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x6BCD;&#x6027;mRNA&#x304C;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;RNase H&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#xFF08;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x67AF;&#x6E07;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x53D7;&#x7CBE;&#x5F8C;&#x306E;&#x5375;&#x306B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A66;&#x85AC;&#x3084;mRNA&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x6BCD;&#x89AA;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x3066;&#x4EE5;&#x6765;&#x3001;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x304C;&#x4E00;&#x610F;&#x306B;&#x6BCD;&#x4F53;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x306E;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x8EE2;&#x9001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x57F9;&#x990A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5375;&#x5B50;&#x3092;&#x53D7;&#x7CBE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x89E3;&#x91C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306F;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306B;&#x53B3;&#x3057;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3067;&#x306F;&#x96E3;&#x6CBB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30D5;&#x30EA;&#x30AB;&#x30C4;&#x30E1;&#x30AC;&#x30A8;&#x30EB;&#x5375;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C1;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;

Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC744; &#xC870;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xC804;&#xC1A1; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC5EC;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC815; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xBAA8;&#xC131; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xCC99;&#xCD94; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xC131; mRNAs &#xD2B9;&#xD788; &#xC218; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE0;&#xAC08; &#xB420; &#xC13C;&#xC2A4; deoxyoligonucleotides (oligos) &#xC0DD; RNase H &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xACC4;&#xB780;&#xC5D0; &#xC13C;&#xC2A4; &#xC2DC; &#xC57D; &#xB610;&#xB294; Mrnas&#xC758; microinjection &#xC774;&#xD6C4; &#xBAA8;&#xC131; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC885;&#xC885; &#xC218;&#xC815; &#xC2E4;&#xD328; &#xD55C; &#xD6C4; Xenopus oocyte&#xC5D0;&#xC11C; mRNA &#xACE0;&#xAC08; &#xACE0;&#xC720; &#xD558; &#xAC8C; &#xBAA8;&#xC131; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD3C9;&#xAC00;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; &#xC6B0;&#xB9AC; Xenopus oocytes&#xC5D0;&#xC11C; antisense&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; oligos&#xB97C; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; oocytes&#xB97C; &#xBE44; &#xC625; &#xD558; &#xACE0; &#xC13C;&#xC2A4; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xD574;&#xC11D; &#xC808;&#xCC28; &#xC694;&#xC57D;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAE30;&#xC220;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC694;&#xAD6C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xACF5; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC9C8;&#xBB38; antisense oocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Xenopus oocytes &#xC13C;&#xC2A4; oligonucleotides &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La capacidad de manipular la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en ovocitos de Xenopus y luego generar embriones fecundados mediante la transferencia de las hembras de acogida ha permitido caracterizar con rapidez materna v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en el desarrollo de los vertebrados. MRNAs maternos, en particular, pueden ser eficientemente agotado con desoxioligonucle&#xF3;tidos antisentido (oligos), mediadas por el sistema end&#xF3;geno de RNasa H actividad. Dado que la microinyecci&#xF3;n de ARNm antisentido o reactivos en los huevos despu&#xE9;s de la fecundaci&#xF3;n no suele afectar a la madre las v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n, el agotamiento de ARNm en el ovocito de Xenopus es especialmente adecuado para la evaluaci&#xF3;n de las funciones maternas. En esta revisi&#xF3;n, se destacan las ventajas de utilizar antisentido en ovocitos de Xenopus y describir los m&#xE9;todos b&#xE1;sicos para el dise&#xF1;o y la elecci&#xF3;n de oligos eficaces. Tambi&#xE9;n se resumen los procedimientos de fertilizaci&#xF3;n de ovocitos cultivados por el anfitri&#xF3;n de transferencia y la interpretaci&#xF3;n de la especificidad de los efectos antisentido. Aunque estos m&#xE9;todos pueden ser t&#xE9;cnicamente exigentes, el uso de antisentido en oocitos se puede utilizar para tratar cuestiones biol&#xF3;gicas que son insolubles en otros par&#xE1;metros experimentales.

Alissa M. Hulstrand

Department of Biology

University of Iowa

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Alissa M. Hulstrand

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biology

University of Iowa

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Department of Biology