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Genome-wide Screen for miRNA Targets Using the MISSION Target ID Library

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MISSION LentiPlex Pooled shRNA Library Screening in Mammalian Cells

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Sigma-Aldrich

&#x6211;&#x4EEC;&#x5148;&#x524D;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E;&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x5927;&#x9F20;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE; UMR 106-01 c fos &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x9700;&#x8981;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; cAMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (CREB) &#x5728;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 133&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x6B64;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x4E0D;&#x662F;&#x8DB3;&#x591F;&#x4E3A; UMR &#x7EC6;&#x80DE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 129&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; II &#x7F51;&#x7AD9; &#xFF08;serines 108&#x3001; 111&#x3001; 114&#x3001; 117&#x3001; 121&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x6709;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x7684; CREB &#x6D3B;&#x5316;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E00;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x65B0;&#x9648;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6807;&#x7B7E;&#x6807;&#x8BB0;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x7684; CREB&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x9664;&#x4E86;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 133&#xFF0C;&#x5176;&#x4ED6;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x78F7;&#x9178;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; GAL4 CREB &#x8BB0;&#x8005;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7A81;&#x53D8;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; serines 129 &#x548C; 133 &#x90FD;&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x800C;&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; II &#x7F51;&#x7AD9;&#x4E0D;&#x662F;&#x6240;&#x9700;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x672A;&#x80FD;&#x4FC3;&#x4F7F; GAL4 CREB &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; PTH &#x6CBB;&#x7597;&#x91D1;&#x96C0;&#x5F02;&#x9EC4;&#x7D20;&#xFF0C;&#x4E00;&#x822C;&#x5DF2;&#x77E5;&#x6291;&#x5236;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;-3 (GSK-3&#xFF09; &#x6D3B;&#x52A8;&#x6216;&#x6C2F;&#x5316;&#x9502;&#xFF0C;&#x6700;&#x5177;&#x4F53;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3 &#x6291;&#x5236;&#x4EE3;&#x7406;&#x5DF2;&#x77E5;&#xFF0C;&#x5F3A;&#x70C8;&#x7275;&#x8FDE;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3beta &#x5728;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x67D3;&#x6599;&#x6728;&#x9EC4;&#x916E;&#x548C;&#x6C2F;&#x5316;&#x9502;&#x6291;&#x5236;&#x845B;&#x5170;&#x7D20;&#x53F2;&#x514B; 3beta &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x65E2;&#x4E0D;&#x963B;&#x6B62;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 133 PTH &#x6240;&#x81F4;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5F53;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 129 &#x5C06;&#x88AB;&#x66FF;&#x6362;&#x4E3A;&#x8D1F;&#x7535;&#x8377;&#x7684;&#x5929;&#x95E8;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x6C2F;&#x5316;&#x9502;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x8D77; CREB PTH &#x8BF1;&#x5BFC;&#x53CD;&#x5F0F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; GSK 3beta &#x5728;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 129 phosphorylates CREB&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; CREB PTH &#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;

&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; cAMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x9700;&#x8981;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 129 &#x7AD9;&#x70B9;&#x548C;&#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;-3 &#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;&#x4E8C;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;

We have previously shown that PTH induction of c-fos expression in the rat osteoblastic cell line UMR 106-01 requires the phosphorylation of cAMP response element-binding protein (CREB) at serine 133. Here we show that this event is not sufficient for induced transcriptional activity in UMR cells. Serine 129, but not the casein kinase II sites (serines 108, 111, 114, 117, and 121), also plays a role in the activation of CREB. First, by metabolically labeling an epitope-tagged CREB, we determined that, in addition to serine 133, other residues are phosphorylated in vivo. Using mutational analysis of a GAL4-CREB reporter system we demonstrate that serines 129 and 133 are both required for PTH-induced transcriptional activity, whereas the casein kinase II sites are not. Furthermore, PTH failed to induce transcriptional activity of GAL4-CREB in cells treated with genistein, a general tyrosine kinase inhibitor known to inhibit glycogen synthase kinase-3 (GSK-3) activity, or LiCl, the most specific GSK-3-inhibiting agent known, strongly implicating GSK-3beta in this process. Importantly, although genistein and LiCl each inhibit GSK-3beta activity, neither prevented the phosphorylation of serine 133 induced by PTH. Lastly, when serine 129 is replaced with a negatively charged aspartic acid, LiCl has no effect on the PTH-induced trans-activation of CREB. We propose that GSK-3beta phosphorylates CREB at serine 129 and thus is required for the increased transcriptional activity of CREB in response to PTH.

PTH induction of transcriptional activity of the cAMP response element-binding protein requires the serine 129 site and glycogen synthase kinase-3 activity, but not casein kinase II sites.

Nous avons pr&#xE9;c&#xE9;demment montr&#xE9; que l&#x26;#39;induction de PTH de c-fos expression chez le rat de la lign&#xE9;e cellulaire ost&#xE9;oblastique UMR 106-01 exige la phosphorylation de la r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;AMPc &#xE9;l&#xE9;ment-binding protein (CREB) &#xE0; s&#xE9;rine 133. Ici, nous montrons que cet &#xE9;v&#xE9;nement n&#x26;#39;est pas suffisante pour une activit&#xE9; transcriptionnelle induite dans les cellules UMR. Serine 129, mais pas les sites de la cas&#xE9;ine kinase II (s&#xE9;rines 108, 111, 114, 117 et 121), joue &#xE9;galement un r&#xF4;le dans l&#x26;#39;activation de la prot&#xE9;ine CREB. Premi&#xE8;re, par marquage d&#x26;#39;un &#xE9;pitope m&#xE9;taboliquement-marqu&#xE9; CREB, on a d&#xE9;termin&#xE9; que, en plus de la s&#xE9;rine 133, r&#xE9;sidus d&#x26;#39;autres sont phosphoryl&#xE9;s in vivo. En utilisant l&#x26;#39;analyse mutationnelle d&#x26;#39;un syst&#xE8;me rapporteur GAL4-CREB, nous d&#xE9;montrons que s&#xE9;rines 129 et 133 sont tous deux n&#xE9;cessaires pour la PTH induite par l&#x26;#39;activit&#xE9; transcriptionnelle, alors que les sites de la cas&#xE9;ine kinase II ne sont pas. En outre, la PTH pas induire l&#x26;#39;activit&#xE9; transcriptionnelle de GAL4-CREB dans les cellules trait&#xE9;es avec la g&#xE9;nist&#xE9;ine, un inhibiteur de kinase tyrosine g&#xE9;n&#xE9;rale connu pour inhiber la glycog&#xE8;ne synthase kinase-3 (GSK-3) une activit&#xE9;, ou LiCl, le plus sp&#xE9;cifique de la GSK-3-agent inhibiteur connue, impliquant fortement la GSK-3beta dans ce processus. Il est important, bien que la g&#xE9;nist&#xE9;ine et LiCl chaque inhiber GSK-3beta activit&#xE9;, ni emp&#xEA;ch&#xE9; la phosphorylation de la s&#xE9;rine 133 induite par la PTH. Enfin, lorsque la s&#xE9;rine 129 est remplac&#xE9; par un acide aspartique charg&#xE9; n&#xE9;gativement, LiCl est sans effet sur la PTH induite trans-activation de CREB. Nous proposons que la GSK-3beta phosphoryle CREB &#xE0; s&#xE9;rine 129 et n&#x26;#39;est donc n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;augmentation de l&#x26;#39;activit&#xE9; transcriptionnelle de CREB en r&#xE9;ponse &#xE0; la PTH.

Induction PTH de l&#x26;#39;activit&#xE9; transcriptionnelle de la r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;AMPc &#xE9;l&#xE9;ment-binding protein N&#xE9;cessite le site s&#xE9;rine 129 et la glycog&#xE8;ne synthase kinase-3 Activit&#xE9;, mais non de la cas&#xE9;ine kinase II Sites

PTH Induktion der Transkriptionsaktivit&#xE4;t des cAMP response element binding protein-setzen die Serin 129 Ort und Glycogensynthasekinase-3-Aktivit&#xE4;t, aber nicht Casein-Kinase II-.

Abbiamo precedentemente dimostrato che induzione PTH di espressione di c-fos nella linea di cellule osteoblastiche ratto UMR 106-01 richiede la fosforilazione di cAMP response element-binding protein (CREB) a serina 133. Qui vi mostriamo che questo evento non &egrave; sufficiente per l&#39;attivit&agrave; trascrizionale indotta in cellule UMR. Serina 129, ma non il caseina chinasi II siti (serines 108, 111, 114, 117 e 121), gioca anche un ruolo nell&#39;attivazione del CREB. In primo luogo, etichettando metabolicamente un epitopo-etichettato CREB, abbiamo determinato che, oltre a serina 133, altri residui sono fosforilati in vivo. Utilizzando l&#39;analisi mutazionale di un sistema di reporter GAL4-CREB dimostriamo che serines 129 e 133 sono entrambi necessari per l&#39;attivit&agrave; trascrizionale indotta dal PTH, considerando che il caseina chinasi II siti non sono. Inoltre, PTH non &egrave; riuscito a indurre attivit&agrave; transcriptional di GAL4-CREB nelle cellule trattate con genisteina, un generale inibitore tirosina chinasi conosciuto per inibire l&#39;attivit&agrave; di glicogeno sintasi chinasi 3 (GSK-3), o LiCl, pi&ugrave; specifica GSK-3-inibendo agente noto, implicando fortemente GSK-3beta in questo processo. Importante, anche se ogni genisteina e LiCl inibire l&#39;attivit&agrave; di GSK-3beta, n&eacute; impedito la fosforilazione della serina 133 indotta dal PTH. Infine, quando serina 129 &egrave; sostituito con un acido aspartico caricato negativamente, LiCl non ha effetto su trans-attivazione PTH-indotta di CREB. Proponiamo che GSK-3beta tirosine CREB a serina 129 e cos&igrave; &egrave; richiesto per la maggiore attivit&agrave; trascrizionale di CREB in risposta al PTH.

Induzione di PTH dell&#39;attivit&agrave; trascrizionale della proteina cAMP response element binding richiede il sito serina 129 e attivit&agrave; di glicogeno sintasi chinasi-3, ma non caseina chinasi II siti.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;c-fos&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;PTH&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;UMR 106&#x304B;&#x3089;01&#x307E;&#x3067;&#x306F;133&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;cAMP&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;CREB&#xFF09;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;UMR&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;II&#x90E8;&#x4F4D;&#xFF08;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;108&#x3001;111&#x3001;114&#x3001;117&#x3001;121&#xFF09;129&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3082;&#x3001;CREB&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x200B;&#x200B;&#x306B;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305A;&#x3001;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x7684;&#x306B;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x30BF;&#x30B0;CREB&#x3092;&#x6A19;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;133&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;in vivo&#x3067;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x3068;&#x5224;&#x65AD;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;II&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;129&#x304A;&#x3088;&#x3073;133&#x306F;&#x3001;PTH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;GAL4-CREB&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;PTH&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;-3&#xFF08;GSK-3&#xFF09;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;LiCl&#x3092;&#x3001;&#x6700;&#x3082;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;GSK-3&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;&#x30B2;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;GAL4-CREB&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x5F37;&#x304F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;GSK-3&#x3B2;&#x306E;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3001;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x30B2;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;LiCl&#x5404;GSK-3&#x3B2;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;PTH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;133&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x3044;&#x3060;&#x3093;&#x3082;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;129&#x304C;&#x8CA0;&#x306B;&#x5E2F;&#x96FB;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x3067;&#x7F6E;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x5869;&#x5316;&#x30EA;&#x30C1;&#x30A6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;CREB&#x306E;PTH&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;GSK-3&#x3B2;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;129&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CREB&#x3068;&#x306F;PTH&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;CREB&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

cAMP&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;PTH&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;129&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;-3&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;II&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC950; osteoblastic &#xC140; &#xB77C;&#xC778; UMR 106-01&#xC5D0;&#xC11C; c-fos &#xD45C;&#xD604;&#xC758; PTH &#xC720;&#xB3C4; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 133&#xC5D0;&#xC11C; &#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CREB)&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00;&#xC774; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; UMR &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 129, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC548; &#xCE74; &#xC138; &#xC778; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 2 &#xCC28; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (serines 108, 111, 114, 117, &#xBC0F; 121), CREB&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xCCAB;&#xC9F8;, metabolically &#xD53C;&#xD1A0; &#xD504; &#xD0DC;&#xADF8; CREB&#xC758; &#xB77C;&#xBCA8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 133, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; phosphorylated &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Serines 129&#xC640; 133 &#xB458; &#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; GAL4 CREB &#xAE30;&#xC790; &#xC81C;&#xB3C4;&#xC758; mutational &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE74; &#xC138; &#xC778; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 2 &#xCC28; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; PTH &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC140;&#xC5D0; GAL4-CREB&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC2E4;&#xD328; &#xD558;&#xB294; PTH tyrosine kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; glycogen synthase &#xB2C8; 3 (GSK-3) &#xD65C;&#xB3D9;, LiCl, &#xAC00;&#xC7A5; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; GSK 3 &#xC5B5;&#xC81C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;, &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C;&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; GSK-3beta &#xC5F0;&#xB8E8;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; genistein, &#xC77C;&#xBC18; &#xCDE8;&#xAE09;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;, genistein&#xC640; LiCl GSK 3beta &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;, &#xBE44;&#xB85D; &#xB458; &#xB2E4; PTH&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 133&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xBC29;&#xC9C0;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 129 &#xBD80;&#xC815; &#xCCAD;&#xAD6C; aspartic &#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xB00C;&#xBA74; Licl&#xB294; PTH &#xC720;&#xB3C4; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;-&#xD65C;&#xC131;&#xD654; CREB&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; GSK-3beta CREB &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 129&#xC5D0;&#xC11C; phosphorylates &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; PTH&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; CREB&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xB294;.

&#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; PTH &#xC720;&#xB3C4; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 129 &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; glycogen synthase &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 3 &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xCE74; &#xC138; &#xC778; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 2 &#xCC28; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD544;&#xC694;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hemos demostrado anteriormente que la inducci&#xF3;n de la PTH expresi&#xF3;n c-fos en la rata UMR l&#xED;nea celular osteobl&#xE1;stica 106-01 requiere la fosforilaci&#xF3;n de la respuesta de cAMP elemento vinculante prote&#xED;na (CREB) de la serina 133. Aqu&#xED; nos muestran que este evento no es suficiente para la actividad inducida por la transcripci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas UMR. La serina 129, pero no las case&#xED;na quinasa II (sitios serinas 108, 111, 114, 117, y 121), tambi&#xE9;n juega un papel en la activaci&#xF3;n de CREB. En primer lugar, por metab&#xF3;licamente etiquetado un ep&#xED;topo de etiquetado CREB, se determin&#xF3; que, adem&#xE1;s de serina 133, otros residuos son fosforilados in vivo. Mediante el an&#xE1;lisis mutacional de un sistema reportero GAL4-CREB se demuestra que las serinas 129 y 133 ambos son necesarios para la PTH inducida por la actividad transcripcional, mientras que los sitios de la case&#xED;na quinasa II no lo son. Adem&#xE1;s, la PTH no para inducir la actividad transcripcional de GAL4-CREB en las c&#xE9;lulas tratadas con geniste&#xED;na, un inhibidor de la tirosina cinasa en general se sabe que inhibe la gluc&#xF3;geno sintasa quinasa-3 (GSK-3) la actividad, o LiCl, el m&#xE1;s espec&#xED;fico de GSK-3-agente inhibidor conocida, que implican fuertemente la GSK-3beta en este proceso. Es importante destacar que, aunque la geniste&#xED;na y LiCl cada inhibir GSK-3beta actividad, ni impide la fosforilaci&#xF3;n de la serina 133 inducida por PTH. Por &#xFA;ltimo, cuando la serina 129 se sustituye con un &#xE1;cido asp&#xE1;rtico cargado negativamente, LiCl no tiene ning&#xFA;n efecto sobre la PTH inducida por trans-activaci&#xF3;n de CREB. Proponemos que GSK-3beta fosforila CREB en serina 129 y por lo tanto se requiere para el aumento de la actividad transcripcional de CREB en respuesta a la PTH.

Inducci&#xF3;n de la PTH de la actividad transcripcional de la respuesta del CAMP elemento de uni&#xF3;n de prote&#xED;nas requiere el sitio serina 129 y actividad de la gluc&#xF3;geno sintasa quinasa-3, pero no case&#xED;na quinasa II Sitios

&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x7D20; (PTH) &#x662F;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E3B;&#x8981;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x7684;&#x9AA8;&#x91CD;&#x5EFA;&#x548C;&#x9499;&#x7A33;&#x6001;&#x57FA;&#x672C;&#x8C03;&#x8282;&#x5668; 84-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x6FC0;&#x7D20;&#x3002;&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x548C;&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D; (PTHrP) &#x95F4;&#x63A5;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7834;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x9AA8;&#x5438;&#x6536;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;PTH &#x66F4;&#x6539;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x4E2D;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6307;&#x5BFC;&#x9AA8;&#x5438;&#x6536;&#x7684;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x89E3;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;PTH &#x5DF2;&#x8868;&#x660E;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x662F;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x5176;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#xFF0C;PTH &#x4EE5;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x9AA8;&#x8D28;&#x758F;&#x677E;&#xFF0C;&#x6F5C;&#x5728;&#x533B;&#x7597;&#x5E94;&#x7528; PTH &#x7684;&#x95F4;&#x6B47;&#x5F53;&#x5C40;&#x523A;&#x6FC0;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; PTH &#x7ED3;&#x679C;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x523A;&#x6FC0;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x7834;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x964D;&#x89E3;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x4E2D;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53D8;&#x5316; PTH &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x662F;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;-1 &#x5BB6;&#x5EAD;&#x3001; RUNX2 &#x548C; cAMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (CREB) &#x7B49;&#x3002;&#x5F88;&#x591A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684; PTH &#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x662F;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#xFF08;PKA&#xFF09; &#x7684;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; PKA &#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x8BB8;&#x591A;&#x6267;&#x5BFC; PTH &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;PKA &#x6FC0;&#x6D3B;&#x8868;&#x660E;&#x6291;&#x5236;&#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (MAPK) &#x548C;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;&#x73B0;&#x5728;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x7684; MAPK &#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x548C;&#x589E;&#x6B96;&#x7684; PTH &#x5728;&#x4F4E;&#x6D53;&#x5EA6;&#x662F;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; C (PKC)-&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65E2;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x5B9E; PTH &#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x6761;&#x4F8B;&#x662F;&#x5426;&#x8981;&#x6C42; PKC &#x548C;/&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x6FC0;&#x9176;&#x6216; PTH &#x662F;&#x5426;&#x80FD;&#x591F;&#x523A;&#x6FC0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x53EF;&#x80FD;&#x523A;&#x6FC0; PTH &#x7684;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x72EC;&#x7279;&#x6A21;&#x5F0F;&#x9020;&#x6210;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x80BE;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x4F8B;&#x5B50;&#x90FD;&#x8FD8;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x4E4B;&#x6570;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5BA1;&#x67E5;&#x5C06;&#x4FA7;&#x91CD;&#x4E8E;&#x6240;&#x77E5;&#x7684; PTH &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F20;&#x9012;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x6216;&#x5047;&#x5B9A; PTH &#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x4E0E;&#x5206;&#x89E3;&#x4EE3;&#x8C22; (&#x9AD8;) &#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x7684;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6216;&#x6FC0;&#x7D20;&#x7684;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187; (&#x4F4E;) &#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;

&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x8C03;&#x63A7;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;

Parathyroid hormone (PTH) is an 84-amino-acid polypeptide hormone functioning as a major mediator of bone remodeling and as an essential regulator of calcium homeostasis. PTH and PTH-related protein (PTHrP) indirectly activate osteoclasts resulting in increased bone resorption. During this process, PTH changes the phenotype of the osteoblast from a cell involved in bone formation to one directing bone resorption. In addition to these catabolic effects, PTH has been demonstrated to be an anabolic factor in skeletal tissue and in vitro. As a result, PTH has potential medical application to the treatment of osteoporosis, since intermittent administration of PTH stimulates bone formation. Activation of osteoblasts by PTH results in expression of genes important for the degradation of the extracellular matrix, production of growth factors, and stimulation and recruitment of osteoclasts. The ability of PTH to drive changes in gene expression is dependent upon activation of transcription factors such as the activator protein-1 family, RUNX2, and cAMP response element binding protein (CREB). Much of the regulation of these processes by PTH is protein kinase A (PKA)-dependent. However, while PKA is linked to many of the changes in gene expression directed by PTH, PKA activation has been shown to inhibit mitogen-activated protein kinase (MAPK) and proliferation of osteoblasts. It is now known that stimulation of MAPK and proliferation by PTH at low concentrations is protein kinase C (PKC)-dependent in both osteoblastic and kidney cells. Furthermore, PTH has been demonstrated to regulate components of the cell cycle. However, whether this regulation requires PKC and/or extracellular signal-regulated kinases or whether PTH is able to stimulate other components of the cell cycle is unknown. It is possible that stimulation of this signaling pathway by PTH mediates a unique pattern of gene expression resulting in proliferation in osteoblastic and kidney cells; however, specific examples of this are still unknown. This review will focus on what is known about PTH-mediated cell signaling, and discuss the established or putative PTH-regulated pattern of gene expression in osteoblastic cells following treatment with catabolic (high) or anabolic (low) concentrations of the hormone.

Parathyroid hormone-dependent signaling pathways regulating genes in bone cells.

L&#x26;#39;hormone parathyro&#xEF;dienne (PTH) est un fonctionnement de 84 amino-acides hormone polypeptidique comme un m&#xE9;diateur majeur du remodelage osseux et comme un r&#xE9;gulateur essentiel de l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie calcique. PTH et de la PTH-related protein (PTHrP) indirectement activer les ost&#xE9;oclastes r&#xE9;sultant de la r&#xE9;sorption osseuse accrue. Au cours de ce processus, la PTH le ph&#xE9;notype de l&#x26;#39;ost&#xE9;oblaste &#xE0; partir d&#x26;#39;une cellule impliqu&#xE9;e dans la formation osseuse &#xE0; l&#x26;#39;une r&#xE9;sorption osseuse. Diriger En plus de ces effets cataboliques, la PTH a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; &#xEA;tre un facteur anabolique dans le tissu squelettique et in vitro. En cons&#xE9;quence, la PTH a un potentiel d&#x26;#39;application m&#xE9;dicale pour le traitement de l&#x26;#39;ost&#xE9;oporose, car l&#x26;#39;administration intermittente de la PTH stimule la formation osseuse. Activation des ost&#xE9;oblastes par les r&#xE9;sultats de PTH dans l&#x26;#39;expression de g&#xE8;nes importants pour la d&#xE9;gradation de la matrice extracellulaire, la production de facteurs de croissance, et la stimulation et le recrutement des ost&#xE9;oclastes. La capacit&#xE9; de la PTH &#xE0; &#x200B;&#x200B;conduire des changements dans l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes d&#xE9;pend de l&#x26;#39;activation de facteurs de transcription comme la famille la prot&#xE9;ine activatrice-1, RUNX2, et la prot&#xE9;ine AMPc &#xE9;l&#xE9;ment de r&#xE9;ponse liant (CREB). Une grande partie de la r&#xE9;glementation de ces processus par la PTH est la prot&#xE9;ine kinase A (PKA)-d&#xE9;pendante. Cependant, alors que la PKA est li&#xE9;e &#xE0; bon nombre des changements dans l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes r&#xE9;alis&#xE9; par la PTH, activation de la PKA a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour emp&#xEA;cher la prot&#xE9;ine kinase activ&#xE9;e par des mitog&#xE8;nes (MAPK) et la prolif&#xE9;ration des ost&#xE9;oblastes. On sait maintenant que la stimulation de la MAPK et de la prolif&#xE9;ration par la PTH &#xE0; &#x200B;&#x200B;de faibles concentrations est la prot&#xE9;ine kinase C (PKC)-d&#xE9;pendante &#xE0; la fois dans ost&#xE9;oblastique et les cellules r&#xE9;nales. En outre, la PTH a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9;e pour r&#xE9;glementer les composantes du cycle cellulaire. Toutefois, si le pr&#xE9;sent r&#xE8;glement exige la PKC et / ou extracellular signal-regulated kinases ou si la PTH est capable de stimuler d&#x26;#39;autres composantes du cycle cellulaire est inconnue. Il est possible que la stimulation de cette voie de signalisation par la PTH m&#xE9;diatise un mod&#xE8;le unique de l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique r&#xE9;sultant de la prolif&#xE9;ration dans les cellules ost&#xE9;oblastiques et les reins; cependant, des exemples pr&#xE9;cis de cette situation sont encore inconnues. Cet examen portera sur ce qui est connu au sujet de la signalisation cellulaire m&#xE9;di&#xE9;es par la PTH, et de discuter de l&#x26;#39;&#xE9;tabli ou putatif PTH-r&#xE9;glement&#xE9; mod&#xE8;le de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes dans les cellules ost&#xE9;oblastiques apr&#xE8;s le traitement avec des concentrations cataboliques (&#xE9;lev&#xE9;) ou anabolisant (faible) de l&#x26;#39;hormone.

Pathways parathyro&#xEF;des signalisation hormonale-d&#xE9;pendants r&#xE9;gulation des g&#xE8;nes dans les cellules osseuses

Parathormon-abh&#xE4;ngige Signalwege reguliert Gene, die in Knochenzellen.

L&#39;ormone paratiroideo (PTH) &egrave; un ormone polipeptide di 84 aminoacidi funzionamento come un importante mediatore del rimodellamento osseo e un regolatore essenziale dell&#39;omeostasi del calcio. PTH e PTH-related protein (PTHrP) indirettamente attivano gli osteoclasti, con conseguente aumento del riassorbimento. Durante questo processo, PTH cambia il fenotipo del osteoblast da una cellula coinvolta nella formazione del tessuto osseo a dirigere un riassorbimento. Oltre a questi effetti catabolici, PTH &egrave; stato dimostrato essere un fattore anabolizzante nel tessuto scheletrico e in vitro. Di conseguenza, PTH ha potenziale applicazione medica per il trattamento dell&#39;osteoporosi, dal momento che la somministrazione intermittente di PTH stimola la formazione ossea. Attivazione degli osteoblasti di PTH risultati nell&#39;espressione di geni importanti per la degradazione della matrice extracellulare, produzione di fattori di crescita e la stimolazione e il reclutamento di osteoclasti. La capacit&agrave; di PTH ai cambiamenti di unit&agrave; di espressione genica dipende dall&#39;attivazione dei fattori di trascrizione come l&#39;activator protein-1 famiglia, RUNX2 e cAMP response element binding protein (CREB). Gran parte del regolamento di questi processi di PTH &egrave; proteina chinasi A (PKA)-dipendente. Tuttavia, mentre PKA &egrave; legato a molti dei cambiamenti nell&#39;espressione genica regia di PTH, attivazione di PKA ha dimostrato di inibire la chinasi di proteina mitogene-attivata (MAPK) e la proliferazione degli osteoblasti. &Egrave; ormai noto che la stimolazione di MAPK e la proliferazione del PTH a basse concentrazioni &egrave; protein chinasi C (PKC)-dipendente in entrambi osteoblastica e cellule renali. Inoltre, il PTH &egrave; stata dimostrata per regolare i componenti del ciclo cellulare. Tuttavia, se il presente regolamento richiede PKC e/o chinasi segnale-regolata extracellulare o se &egrave; in grado di stimolare le altre componenti del ciclo cellulare PTH &egrave; sconosciuto. &Egrave; possibile che la stimolazione di questa via di segnalazione di PTH da intermediario un modello unico di espressione del gene con conseguente proliferazione in osteoblastica e cellule renali; Tuttavia, specifici esempi di questo sono ancora sconosciuti. Questa recensione sar&agrave; concentrarsi su ci&ograve; che &egrave; noto circa la segnalazione delle cellule mediata dal PTH e discutere il modello PTH-regolamentato stabilito o putativo di espressione genica in cellule osteoblastiche dopo il trattamento con catabolico (alta) o anabolizzanti (Bassi) concentrazioni dell&#39;ormone.

L&#39;ormone paratiroideo-dipendente segnalazione percorsi che regolano i geni nelle cellule ossee.

&#x526F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#xFF08;PTH&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;84&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002; PTH&#x53CA;&#x3073;PTH&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;PTHrP&#x306F;&#xFF09;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x9AA8;&#x5438;&#x53CE;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x7834;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x4E2D;&#x306B;&#x3001;PTH&#x306F;1&#x6307;&#x793A;&#x9AA8;&#x5438;&#x53CE;&#x3001;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7570;&#x5316;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;PTH&#x306F;&#x9AA8;&#x7D44;&#x7E54;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vitro&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x540C;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PTH&#x306E;&#x9593;&#x6B20;&#x6295;&#x4E0E;&#x304C;&#x9AA8;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;PTH&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x7C97;&#x3057;&#x3087;&#x3046;&#x75C7;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x533B;&#x7642;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3001;&#x7834;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3068;&#x52DF;&#x96C6;&#x306E;PTH&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;PTH&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-1&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;RUNX2&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;cAMP&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;CREB&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;PTH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x306F;&#x3001;A&#xFF08;PKA&#xFF09;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; PKA&#x306F;&#x3001;PTH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6307;&#x793A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;PKA&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;MAPK&#xFF09;&#x3068;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;&#x4F4E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;PTH&#x306B;&#x3088;&#x308B;MAPK&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;C&#xFF08;PKC&#xFF09;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;PTH&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306F;PKC&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;PTH&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x3001;PTH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306F;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x814E;&#x81D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306E;&#x5177;&#x4F53;&#x4F8B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;PTH&#x4ECB;&#x5728;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3001;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#xFF08;&#x4F4E;&#x3044;&#xFF09;&#x7570;&#x5316;&#xFF08;&#x9AD8;&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x540C;&#x5316;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;PTH-&#x898F;&#x5236;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x526F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;

&#xBD80; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; (PTH) &#xBF08; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xB85C; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC758; &#xD544;&#xC218; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC791;&#xB3D9; 84 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; polypeptide &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC774;&#xB2E4;. PTH&#xC640; PTH &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (PTHrP) &#xC9C1;&#xC811; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0; osteoclasts &#xC99D;&#xAC00; &#xBF08; &#xC7AC;&#xD761;&#xC218;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C;. &#xC774; &#xACFC;&#xC815; &#xB3D9;&#xC548;, PTH&#xB294; osteoblast phenotype &#xBF08; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xB3C5; &#xD55C; &#xBF08; &#xC7AC;&#xD761;&#xC218; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; catabolic &#xD6A8;&#xACFC; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xACE8;&#xACA9; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31; &#xC694;&#xC778;&#xC77C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD558; &#xACE0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; PTH &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC;, PTH&#xC740; &#xBF08; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; PTH&#xC758; &#xAC04;&#xD5D0;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xB9AC; &#xACE8;&#xB2E4;&#xACF5;&#xC99D;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC758;&#xB8CC; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;. PTH&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; osteoblasts&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xAE30;&#xC9C8;, &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;, &#xBC0F; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xACFC; osteoclasts &#xBAA8;&#xC9D1;&#xC758; &#xC800;&#xD558;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xACB0;&#xACFC;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC6B4;&#xC804; &#xD558;&#xB294; PTH&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC740; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xD65C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 1 &#xAC00;&#xC871;, RUNX2, &#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CREB) &#xB4F1;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; PTH&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A (PKA)-&#xC885;&#xC18D;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, PKA PTH &#xAC10;&#xB3C5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xB9CE;&#xC774; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; PKA &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (MAPK)&#xC640; osteoblasts&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. MAPK&#xC758; &#xC790;&#xADF9; &#xBC0F; &#xB0AE;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; PTH&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC0B0;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; C (PKC) &#xC9C0;&#xAE08; &#xC54C;&#xB824;&#xC838;-osteoblastic &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;. &#xB610;&#xD55C;, PTH &#xCEF4;&#xD3EC;&#xB10C;&#xD2B8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xADDC;&#xC815; &#xD544;&#xC694; PKC &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638; &#xADDC;&#xC81C; kinases PTH &#xC140; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xC218; &#xC778;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. PTH&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;&#xC774; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC790;&#xADF9; &#xC911;&#xC7AC; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC138;&#xD3EC;; osteoblastic&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xD328;&#xD134; &#xAC00;&#xB2A5; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774;&#xC758; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; &#xC608;&#xB294; &#xC544;&#xC9C1; &#xC54C;. &#xC774; &#xAC80;&#xD1A0; PTH &#xC911;&#xC7AC; &#xC140; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBB34;&#xC5C7;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xD558; &#xACE0; &#xB17C;&#xC758; catabolic (&#xB192;&#xC74C;)&#xC640; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; osteoblastic &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC124;&#xB9BD; &#xB610;&#xB294; &#xC0C1; PTH &#xADDC;&#xC81C; &#xD328;&#xD134; &#xB610;&#xB294; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;&#xC758; &#xADFC;&#xC721; (&#xB0AE;&#xC740;) &#xB18D;&#xB3C4;.

&#xBD80; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xBF08; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La hormona paratiroidea (PTH) es un funcionamiento 84-amino-&#xE1;cido hormona polipept&#xED;dica como un mediador importante de la remodelaci&#xF3;n &#xF3;sea y como un regulador esencial de la homeostasis del calcio. PTH y la prote&#xED;na relacionada con HPT (PTHrP) indirectamente activan a los osteoclastos que resulta en aumento de la resorci&#xF3;n &#xF3;sea. Durante este proceso, PTH cambia el fenotipo de los osteoblastos de una c&#xE9;lula implicada en la formaci&#xF3;n de hueso a una direcci&#xF3;n de la resorci&#xF3;n &#xF3;sea. Adem&#xE1;s de estos efectos catab&#xF3;licos, la PTH ha demostrado ser un factor anab&#xF3;lico en el tejido &#xF3;seo e in vitro. Como resultado, la PTH tiene aplicaci&#xF3;n m&#xE9;dica potencial para el tratamiento de la osteoporosis, ya que la administraci&#xF3;n intermitente de PTH estimula la formaci&#xF3;n de hueso. La activaci&#xF3;n de los osteoblastos por los resultados de PTH en la expresi&#xF3;n de genes importantes para la degradaci&#xF3;n de la matriz extracelular, la producci&#xF3;n de factores de crecimiento, y la estimulaci&#xF3;n y el reclutamiento de los osteoclastos. La capacidad de la PTH para impulsar cambios en la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica depende de la activaci&#xF3;n de factores de transcripci&#xF3;n como la familia de la prote&#xED;na activadora-1, RUNX2, y la respuesta de cAMP elemento de enlace de la prote&#xED;na (CREB). Gran parte de la regulaci&#xF3;n de estos procesos a trav&#xE9;s de la PTH es la prote&#xED;na quinasa A (PKA)-dependiente. Sin embargo, mientras que PKA est&#xE1; vinculada a muchos de los cambios en la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica dirigida por la PTH, la activaci&#xF3;n de PKA se ha demostrado que inhibe activada por mit&#xF3;genos prote&#xED;na quinasa (MAPK) y la proliferaci&#xF3;n de los osteoblastos. Ahora se sabe que la estimulaci&#xF3;n de la proliferaci&#xF3;n MAPK y por la PTH en concentraciones bajas es la prote&#xED;na quinasa C (PKC)-dependiente en tanto osteobl&#xE1;stica y c&#xE9;lulas de ri&#xF1;&#xF3;n. Adem&#xE1;s, la PTH se ha demostrado para regular los componentes del ciclo celular. Sin embargo, si esta regulaci&#xF3;n requiere PKC y / o extracelular regulados se&#xF1;al-quinasas o si la PTH es capaz de estimular otros componentes del ciclo celular es desconocida. Es posible que la estimulaci&#xF3;n de esta v&#xED;a de se&#xF1;alizaci&#xF3;n por la PTH media en un patr&#xF3;n &#xFA;nico de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica que resulta en la proliferaci&#xF3;n en c&#xE9;lulas osteobl&#xE1;sticas y el ri&#xF1;&#xF3;n, sin embargo, los ejemplos espec&#xED;ficos de esto son todav&#xED;a desconocida. Esta revisi&#xF3;n se centrar&#xE1; en lo que se sabe acerca de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n celular mediada por PTH, y discutir la establecida o supuesta de PTH regulada por el patr&#xF3;n de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en las c&#xE9;lulas osteobl&#xE1;sticas despu&#xE9;s del tratamiento con concentraciones catab&#xF3;licas (alto) o anab&#xF3;licos (baja) de la hormona.

Dependientes de hormonas paratiroides v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n que regulan los genes en las c&#xE9;lulas &#xF3;seas

&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; PTH &#x6CBB;&#x7597;&#x542F;&#x52A8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6FC0;&#x6D3B; PKA &#x548C; PKC &#x7684;&#x53CC;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6805;&#x3002;&#x5B83;&#x8868;&#x660E; PTH &#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x6216;&#x6839;&#x636E;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x6FC0;&#x7D20; &#xFF1B; &#x523A;&#x6FC0; ERKs&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;PTH &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x6765;&#x8C03;&#x8282; MAPK &#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x6210;&#x5458;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x8FD9;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3001; c-&#x541B;-NH 2 &#x7EC8;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x9176; (JNK&#xFF09;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x540D;&#x6210;&#x5458;&#x4F18;&#x5148;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F3A;&#x8C03;&#x548C;&#x8C03;&#x8282;&#x5404;&#x79CD;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x5177;&#x6709;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5F85;&#x9047;&#x7684; UMR 106-01 &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5927;&#x9F20;&#x9885;&#x9AA8;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E; PTH (10(-8) M)&#xFF0C;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x6FC0;&#x6D3B; PKA &#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x80BD;&#x7684; PTH &#x6216; 8-&#x6EB4;-&#x8425;&#x5730; &#xFF08;&#x6FC0;&#x6D3B; PKA&#xFF09; &#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4ECE;&#x9AD8;&#x57FA;&#x5E95;&#x6C34;&#x5E73; JNK &#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E0A;&#x6E38;&#x6210;&#x5458; JNK &#x68AF;&#x7EA7;&#x7684;&#x68C0;&#x67E5;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E0E; PTH (10(-8) M) &#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x4E5F;&#x6291;&#x5236;&#x5E94;&#x6FC0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176;/&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x76F8;&#x5173;&#x6FC0;&#x9176; 1/MAPK &#x6FC0;&#x9176; 4 &#x5728;&#x4E0E; MAPK/&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x76F8;&#x5173;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176; 1 &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x4E0E; PTH &#x7684;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x6291;&#x5236; JNK &#x6D3B;&#x6027;&#x9AD8;&#x57FA;&#x5E95;&#x6240;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7EA7;&#x8054;&#x7684; pka &#x503C;&#x3002;

&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x5927;&#x9F20;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE; c C-jun &#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#x4F9D;&#x8D56;&#x901A;&#x8DEF;&#x3002;

Treatment of osteoblastic cells with PTH initiates dual signaling cascades resulting in activation of both PKA and PKC. It has been shown that PTH either inhibits or stimulates ERKs depending on dose of the hormone; nevertheless, the ability of PTH to regulate other members of the MAPK family is unknown. Another member of this family, c-Jun-NH(2)-terminal kinase (JNK), is preferentially activated by cytokines and cellular stresses and plays a key role in regulating the activity of various transcription factors. We demonstrate that treatment of UMR 106-01 cells and rat calvarial osteoblasts with PTH (10(-8) M), N-terminal peptides of PTH that selectively activate PKA, or 8-bromo-cAMP (activates PKA) results in the inhibition of JNK activity from high basal levels. Examination of the upstream members of the JNK cascade revealed that both stress-activated protein kinase/extracellular signal-related kinase kinase 1/MAPK kinase 4 and MAPK/extracellular signal-related kinase kinase kinase 1 activities were also inhibited after treatment with PTH (10(-8) M). We conclude that treatment of osteoblastic cells with PTH is sufficient to inhibit high basal JNK activity by activation of the PKA signaling cascade.

Parathyroid hormone inhibits c-Jun N-terminal kinase activity in rat osteoblastic cells by a protein kinase A-dependent pathway.

Le traitement des cellules ost&#xE9;oblastiques avec la RPGC no lance deux cascades de signalisation r&#xE9;sultant de l&#x26;#39;activation de la PKA et la PKC &#xE0; la fois. Il a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; que la PTH inhibe ou stimule soit ERK fonction de la dose de l&#x26;#39;hormone, et pourtant, la capacit&#xE9; de la PTH &#xE0; &#x200B;&#x200B;r&#xE9;glementer d&#x26;#39;autres membres de la famille des MAPK est inconnue. Un autre membre de cette famille, c-Jun-NH (2)-terminal kinase (JNK), est pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement activ&#xE9; par des cytokines et des contraintes cellulaires et joue un r&#xF4;le cl&#xE9; dans la r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;activit&#xE9; des facteurs de transcription diff&#xE9;rents. Nous d&#xE9;montrons que le traitement de l&#x26;#39;UMR 106-01 cellules et les ost&#xE9;oblastes de rat cr&#xE2;nienne avec la PTH (10 (-8) M), N-terminales des peptides de la PTH qui activent de mani&#xE8;re s&#xE9;lective la PKA, ou 8-bromo-AMPc (PKA active) se traduit par l&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;activit&#xE9; JNK &#xE0; partir des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de base. L&#x26;#39;examen des membres en amont de la cascade JNK a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la prot&#xE9;ine kinase &#xE0; la fois le stress-activated / extracellular signal li&#xE9;e kinase kinase kinase 1/MAPK 4 et MAPK / signal extracellulaire li&#xE9; kinase kinase kinase 1 activit&#xE9;s ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; inhib&#xE9;e apr&#xE8;s traitement avec la PTH (10 (-8) M). Nous concluons que le traitement des cellules ost&#xE9;oblastiques avec la PTH est suffisante pour inhiber une forte activit&#xE9; basale JNK par l&#x26;#39;activation de la cascade de signalisation PKA.

Hormone parathyro&#xEF;dienne Inhibe C-Jun activit&#xE9; de la kinase N-terminale dans les cellules ost&#xE9;oblastiques de rat par une prot&#xE9;ine kinase d&#xE9;pendante de A Pathway

Parathormon inhibiert c-Jun N-terminale Kinase-Aktivit&#xE4;t in Ratten Osteoblasten durch eine Proteinkinase A-abh&#xE4;ngigen Weg.

Trattamento di cellule osteoblastiche con PTH avvia duale cascate di segnalazione con conseguente attivazione di PKA e PKC. &Egrave; stato dimostrato che PTH inibisce o stimola ERKs a seconda della dose dell&#39;ormone; Tuttavia, la capacit&agrave; di PTH di regolare altri membri della famiglia MAPK &egrave; sconosciuta. Un altro membro di questa famiglia, c-Jun-NH (2)-terminale chinasi (JNK), preferenzialmente &egrave; attivato dalle citochine e cellulare sottolinea e svolge un ruolo chiave nella regolazione dell&#39;attivit&agrave; dei vari fattori della trascrizione. Ci dimostrano che il trattamento dell&#39;UMR 01 106 cellule e ratto cuoio capelluti osteoblasti con PTH (10(-8) M), peptidi N-terminale del PTH che attivano selettivamente PKA, o 8-bromo-cAMP (attiva la PKA) provoca l&#39;inibizione dell&#39;attivit&agrave; JNK da elevati livelli basali. Esame dei membri a monte della cascata della JNK ha rivelato che sia attivato lo stress chinasi/extracellulare segnale relativi chinasi chinasi 1/MAPK chinasi di proteina 4 e MAPK/extracellulare attivit&agrave; di chinasi 1 della chinasi della chinasi segnale-correlati sono state inibite anche dopo trattamento con PTH (10(-8) M). Possiamo concludere che il trattamento di cellule osteoblastiche con PTH &egrave; sufficiente a inibire l&#39;alta attivit&agrave; JNK basali mediante l&#39;attivazione della PKA cascata di segnalazione.

Ormone paratiroideo inibisce l&#39;attivit&agrave; della chinasi c-Jun N-terminal in cellule osteoblastiche di topo con un sentiero di proteina chinasi dipendente A.

PTH&#x3068;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3001;PKA&#x3068;PKC&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x4E8C;&#x91CD;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;PTH&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x6295;&#x4E0E;&#x91CF;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3001;ERK&#x306F;&#x3092;&#x523A;&#x200B;&#x200B;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;MAPK&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;PTH&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x5225;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3001;c-Jun&#x306E;-NH&#xFF08;2&#xFF09;-&#x672B;&#x7AEF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;JNK&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;UMR 106&#x304B;&#x3089;01&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x982D;&#x84CB;&#x51A0;&#x306E;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;PTH&#xFF08;10&#xFF08;-8&#xFF09;M&#xFF09;&#x3001;PTH&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3068;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;PKA&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;8  - &#x30D6;&#x30ED;&#x30E2;-cAMP&#x306E;&#xFF08;PKA&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#xFF09;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x9AD8;&#x3044;&#x57FA;&#x5E95;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304B;&#x3089;JNK&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002; JNK&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x5BE9;&#x67FB;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;/&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x95A2;&#x9023;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;1/MAPK&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;4&#x3068;MAPK /&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x95A2;&#x9023;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;1&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x307E;&#x305F;PTH&#xFF08;10&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x306B;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#xFF08;-8&#xFF09;M&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;PTH&#x3068;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;PKA&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x57FA;&#x790E;JNK&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3059;&#x308B;&#x3002;

&#x526F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;c-Jun N&#x672B;&#x7AEF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;

PTH&#xC640; osteoblastic &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xC2E0;&#xD638; &#xACC4;&#xACE1; PKA &#xBC0F; PKC&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. PTH &#xB610;&#xB294; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;;&#xC758; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; ERKs &#xC790;&#xADF9; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, MAPK &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; PTH&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC00;&#xC871;, c-6 &#xC6D4;-&#xB274; &#xD584;&#xD504;&#xC154; (2)-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD0A4; (JNK)&#xC758; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xBA64;&#xBC84; cytokines&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418; &#xACE0; &#xD734;&#xB300; &#xAC15;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xC5EC; UMR&#xC758; &#xADF8; &#xCE58;&#xB8CC; 106-01 &#xC140; &#xC950;&#xC640; PTH (10(-8) M), &#xD3A9; &#xD2F0; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB4DC; PTH&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; PKA&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; calvarial osteoblasts &#xB610;&#xB294; 8-&#xBE0C;&#xB85C; &#xBAA8;-&#xCEA0;&#xD504; (PKA&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;) &#xACB0;&#xACFC; &#xC0C1;&#xBD80; &#xAE30;&#xC800;&#xC5D0;&#xC11C; JNK &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC800;&#xD574;. JNK &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC;&#xC758; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC758; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C;/&#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638; &#xAD00;&#xB828; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 1/MAPK &#xB2C8; 4&#xC640; MAPK/&#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638; &#xAD00;&#xB828; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 1 &#xD65C;&#xB3D9; PTH (10(-8) M)&#xACFC; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; &#xC800;&#xD574;&#xB3C4; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCE58;&#xB8CC; PTH&#xC640; osteoblastic &#xC140;&#xC758; &#xCE90;&#xC2A4;&#xCF00;&#xC774;&#xB4DC; &#xC2E0;&#xD638; PKA&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xB192;&#xC740; &#xAE30;&#xC800; JNK &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xACB0;&#xB860;.

&#xBD80; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A &#xC885;&#xC18D; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xC950; osteoblastic &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; c 6 &#xC6D4; N &#xB9E8;&#xB05D; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;.

El tratamiento de las c&#xE9;lulas osteobl&#xE1;sticas con PTH inicia dos cascadas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n que resultan en la activaci&#xF3;n de PKA y PKC. Se ha demostrado que la PTH sea inhibe o estimula ERKs dependiendo de la dosis de la hormona, sin embargo, la capacidad de la PTH para regular otros miembros de la familia MAPK es desconocido. Otro miembro de esta familia, c-Jun-NH (2)-terminal quinasa (JNK), es preferentemente activada por las citocinas y el estr&#xE9;s celular y juega un papel clave en la regulaci&#xF3;n de la actividad de los diversos factores de transcripci&#xF3;n. Se demuestra que el tratamiento de la UMR 106-01 c&#xE9;lulas y los osteoblastos de rata calota con PTH (10 (-8) M), N-terminal de p&#xE9;ptidos de la PTH que activan selectivamente, o PKA 8-bromo-cAMP (activa a la PKA) resultados en la inhibici&#xF3;n de la actividad de JNK de los altos niveles basales. El examen de los miembros aguas arriba de la cascada de JNK revel&#xF3; que tanto el estr&#xE9;s activa la prote&#xED;na quinasa / se&#xF1;al extracelular relacionada con quinasa quinasa quinasa 1/MAPK 4 y MAPK / se&#xF1;al extracelular relacionada con quinasa quinasa quinasa 1 actividades tambi&#xE9;n fueron inhibidos despu&#xE9;s del tratamiento con PTH (10 (-8) M). Se concluye que el tratamiento de las c&#xE9;lulas osteobl&#xE1;sticas con PTH es suficiente para inhibir la actividad de alta JNK basal por la activaci&#xF3;n de la cascada de se&#xF1;alizaci&#xF3;n PKA.

Inhibe la hormona paratiroidea C-Jun N-terminal de la actividad quinasa en las c&#xE9;lulas osteobl&#xE1;sticas de rata de una prote&#xED;na quinasa A-dependen de la v&#xED;a

&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E;&#x7684;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7; &#xFF08;cAMP&#xFF09; &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (CREB) &#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20; &#xFF08;PTH&#xFF09; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x9700;&#x8981;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 129 (S129) &#x548C;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 133 &#xFF08;S133&#xFF09; &#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x9AA8;&#x8089;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE; UMR 106-01 &#xFF08;UMR)&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5728; S133&#x3001; &#x7CD6;&#x539F;&#x5408;&#x9176;&#x6FC0;&#x9176; 3beta &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; A &#xFF08;PKA&#xFF09; &#x867D;&#x9700; (GSK 3beta) &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5728; S129 CREB &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; GAL4 CREB &#x8BB0;&#x8005;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; (EGF) &#x53EF;&#x4EE5;&#x6FC0;&#x6D3B; CREB &#x9664;&#x4E86; PTH UMR &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;UMR &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x7D20;&#x548C;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7597;&#x7ED3;&#x679C;&#x5927;&#x4E8E;&#x7684; CREB &#x6DFB;&#x52A0;&#x5242;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7A81;&#x53D8;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A; S129 &#x548C; S133 &#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5305;&#x62EC; p38 &#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176; (ERKs) &#x7684; MAPK &#x5BB6;&#x65CF;&#x6210;&#x5458;&#x548C; UMR &#x6CBB;&#x7597;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x4EFB;&#x4E00; p38 &#x6291;&#x5236; &#xFF08;SB203580&#xFF09; &#x6216; MEK &#x6291;&#x5236;&#x5242; (PD98059) &#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; CREB &#x5728; S133 &#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x6C89;&#x3002;&#x4E0E; SB203580 &#x6216; PD98059 &#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x5355;&#x72EC;&#x6216;&#x5171;&#x540C;&#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236; CREB &#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; PTH&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x8C03;&#x8282; CREB &#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7; p38 &#x548C; ERKs &#x53CA;&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x7D20;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0D;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x66F4;&#x4E0D;&#x662F;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5242;&#x7684; CREB &#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x548C;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236;&#x7531; PKA &#x6291;&#x5236; H 89 &#x6216;&#x4E0E; SB203580 &#x548C; PD98059 cotreatment&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x5728;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x96C6;&#x4E2D;&#x548C;&#x8C03;&#x8282; CREB &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684;&#x4EE3;&#x7406;&#xFF0C;&#x5982;&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x548C;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4EE5;&#x97F3;&#x4E50;&#x4F1A;&#x65BD;&#x52A0;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7531;&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x548C;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x5728;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;

Previously, we have shown that parathyroid hormone (PTH) transactivation of cyclic adenosine monophosphate (cAMP) response element binding protein (CREB) requires both serine 129 (S129) and serine 133 (S133) in rat osteosarcoma cells UMR 106-01 (UMR) cells. Furthermore, although protein kinase A (PKA) is responsible for phosphorylation at S133, glycogen synthase kinase 3beta (GSK-3beta) activity is required and may be responsible for phosphorylation of CREB at S129. Here, we show, using the GAL4-CREB reporter system, that epidermal growth factor (EGF) can transactivate CREB in UMR cells in addition to PTH. Additionally, treatment of UMR cells with both PTH and EGF results in greater than additive transactivation of CREB. Furthermore, using mutational analysis we show that S129 and S133 are required for EGF-induced transcriptional activity. EGF activates members of the MAPK family including p38 and extracellular signal-activated kinases (ERKs), and treatment of UMR cells with either the p38 inhibitor (SB203580) or the MEK inhibitor (PD98059) prevents phosphorylation of CREB at S133 by EGF but not by PTH. Treatment of cells with either SB203580 or PD98059 alone or together significantly inhibits transactivation of CREB by EGF but not by PTH, indicating that EGF regulates CREB phosphorylation and transactivation through p38 and ERKs and PTH does not. Finally, the greater than additive transactivation of CREB by PTH and EGF is significantly inhibited by the PKA inhibitor H-89 or by cotreatment with SB203580 and PD98059. Thus, several different signaling pathways in osteoblastic cells can converge on and regulate CREB activity. This suggests, in vivo, that circulating agents such as PTH and EGF are acting in concert to exert their effects.

Induction of transcriptional activity of the cyclic adenosine monophosphate response element binding protein by parathyroid hormone and epidermal growth factor in osteoblastic cells.

Auparavant, nous avons montr&#xE9; que l&#x26;#39;hormone parathyro&#xEF;dienne (PTH) de transactivation de l&#x26;#39;ad&#xE9;nosine monophosphate cyclique (AMPc) des prot&#xE9;ines de liaison &#xE9;l&#xE9;ment de r&#xE9;ponse (CREB) exige &#xE0; la fois la s&#xE9;rine (S129) 129 et la s&#xE9;rine 133 (S133) dans les cellules d&#x26;#39;ost&#xE9;osarcome de rat UMR 106-01 (UMR) cellules. En outre, bien que la prot&#xE9;ine kinase A (PKA) est responsable de la phosphorylation au S133, la glycog&#xE8;ne synthase kinase 3beta (GSK-3beta) l&#x26;#39;activit&#xE9; est n&#xE9;cessaire et peut &#xEA;tre responsable de la phosphorylation de CREB au S129. Ici, nous montrons, en utilisant le syst&#xE8;me rapporteur GAL4-CREB, ce facteur de croissance &#xE9;pidermique (EGF) peut transactiver CREB dans les cellules UMR en plus &#xE0; la PTH. En outre, le traitement des cellules avec deux UMR PTH et les r&#xE9;sultats du FEM en plus de transactivation de la prot&#xE9;ine CREB additif. En outre, en utilisant une analyse mutationnelle, nous montrons que S129 et S133 sont n&#xE9;cessaires pour induite par EGF activit&#xE9; transcriptionnelle. EGF active des membres de la famille des MAPK p38 et y compris par des signaux extracellulaires (ERK kinases activ&#xE9;es) et le traitement des cellules avec l&#x26;#39;UMR, soit l&#x26;#39;inhibiteur de la p38 (SB203580) ou l&#x26;#39;inhibiteur de MEK (PD98059) emp&#xEA;che la phosphorylation de CREB au S133 par EGF, mais pas par PTH. Le traitement des cellules avec soit SB203580 ou PD98059 seuls ou ensemble inhibe de mani&#xE8;re significative la transactivation de la prot&#xE9;ine CREB par EGF mais pas par la PTH, ce qui indique que l&#x26;#39;EGF r&#xE9;gule la phosphorylation de CREB et la transactivation par p38 et ERK et la PTH ne fonctionne pas. Enfin, la transactivation sup&#xE9;rieure &#xE0; additif de CREB par la PTH et de l&#x26;#39;EGF est significativement inhib&#xE9;e par l&#x26;#39;inhibiteur de la PKA H-89 ou par co-traitement avec SB203580 et PD98059. Ainsi, plusieurs diff&#xE9;rentes voies de signalisation dans les cellules ost&#xE9;oblastiques et peuvent converger sur de r&#xE9;guler l&#x26;#39;activit&#xE9; de CREB. Cela donne &#xE0; penser, in vivo, que les agents de circulation tels que la PTH et l&#x26;#39;EGF agissent de concert pour exercer leurs effets.

Induction de l&#x26;#39;activit&#xE9; transcriptionnelle de la prot&#xE9;ine ad&#xE9;nosine monophosphate cyclique Response Element Binding par l&#x26;#39;hormone parathyro&#xEF;dienne et facteur de croissance &#xE9;pidermique dans les cellules ost&#xE9;oblastiques

Die Induktion der Transkriptionsaktivit&#xE4;t von dem cyclischen Adenosinmonophosphat Response-Element-Bindungsprotein von Parathormon und epidermale Wachstumsfaktor in Osteoblasten.

In precedenza, abbiamo dimostrato che l&#39;ormone paratiroideo (PTH) transactivation di adenosina monofosfato ciclico (cAMP) response element binding protein (CREB) richiede entrambi serina 129 (S129) e serina 133 (S133) in osteosarcoma ratto UMR 106-01 (UMR) cellule. Inoltre, sebbene la chinasi di proteina A (PKA) &egrave; responsabile della fosforilazione a S133, glicogeno sintasi chinasi 3beta (GSK-3beta) attivit&agrave; &egrave; obbligatorio e pu&ograve; essere responsabile della fosforilazione di CREB presso S129. Qui, vi mostriamo, utilizzando il sistema GAL4-CREB reporter, tale fattore di crescita epidermico (EGF) pu&ograve; transactivate CREB nelle cellule UMR oltre al PTH. Inoltre, trattamento delle cellule UMR sia con PTH ed EGF si traduce in maggiore di transattivazione additivo di CREB. Inoltre, utilizzando l&#39;analisi mutazionale mostriamo che S129 e S133 sono necessari per l&#39;attivit&agrave; trascrizionale indotta da EGF. EGF attiva i membri della famiglia MAPK p38 e chinasi attivato dal segnale extracellulare (ERKs) e trattamento dell&#39;UMR cellule sia con l&#39;inibitore della p38 (SB203580) o l&#39;inibitore MEK (PD98059) impedisce la fosforilazione di CREB presso S133 da EGF ma non da PTH. Trattamento delle cellule con SB203580 o PD98059 da solo o insieme significativamente inibisce la transattivazione di CREB da EGF, ma non di PTH, indicando che EGF regola la fosforilazione di CREB e transactivation attraverso p38 ed ERKs e PTH non. Infine, la maggiore di transattivazione additivo di CREB di PTH ed EGF &egrave; significativamente inibita da inibitore PKA H-89 o da cotreatment con SB203580 e PD98059. Cos&igrave;, diversi percorsi di segnalazione differenti in cellule osteoblastiche possono convergere su e regolare attivit&agrave; CREB. Questo suggerisce, in vivo, che gli agenti circolanti come PTH ed EGF sono che agiscono di concerto per esercitare i loro effetti.

Induzione dell&#39;attivit&agrave; trascrizionale della proteina dell&#39;adenosina monofosfato ciclico risposta elemento vincolante di ormone paratiroideo e fattore di crescita epidermico in cellule osteoblastiche.

&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x74B0;&#x72B6;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;cAMP&#xFF09;&#x5FDC;&#x7B54;&#x914D;&#x5217;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;CREB&#xFF09;&#x306E;&#x526F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#xFF08;PTH&#xFF09;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x9AA8;&#x8089;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;129&#xFF08;S129&#xFF09;&#x3068;133&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;S133&#xFF09;UMR 106&#x304B;&#x3089;01&#xFF08;UMR&#xFF09;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PKA&#xFF09;&#x306F;&#x3001;S133&#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;3beta&#xFF08;GSK-3&#x3B2;&#xFF09;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3001;S129&#x3067;CREB&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;GAL4-CREB&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8868;&#x793A;&#x200B;&#x200B;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;EGF&#xFF09;&#x306F;PTH&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;UMR&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;CREB&#x3092;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;PTH&#x3068;CREB&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x306E;EGF&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x6301;&#x3064;UMR&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;S129&#x3068;S133&#x306F;EGF&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; EGF&#x306F;&#x3001;p38&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;ERK&#x306F;&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x306E;MAPK&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;p38&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#xFF08;SB203580&#xFF09;&#x307E;&#x305F;&#x306F;MEK&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#xFF08;PD98059&#xFF09;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;UMR&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3001;EGF&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;S133&#x3067;CREB&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;PTH&#x3002; SB203580&#x5358;&#x72EC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;PD98059&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;EGF&#x304C;p38&#x3068;ERK&#x306F;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;CREB&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3001;PTH&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;PTH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;EGF&#x306B;&#x3088;&#x308B;CREB&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;PTH&#x304A;&#x3088;&#x3073;EGF&#x306B;&#x3088;&#x308B;CREB&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5264;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;PKA&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;H-89&#x307E;&#x305F;&#x306F;SB203580&#x304A;&#x3088;&#x3073;PD98059&#x3068;cotreatment&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x306B;&#x53CE;&#x675F;&#x3059;&#x308B;&#x3068;CREB&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;PTH&#x304A;&#x3088;&#x3073;EGF&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x5FAA;&#x74B0;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x3001;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x526F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x3068;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E0A;&#x76AE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x74B0;&#x72B6;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E00;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;

&#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; monophosphate (&#xCEA0;&#xD504;) &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (CREB)&#xC758; &#xBD80; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; (PTH) transactivation &#xD544;&#xC694; &#xB450; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 129 (S129)&#xC640; &#xC950; &#xB2E4;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 133 (S133) &#xC138;&#xD3EC; UMR 106-01 (UMR) &#xC140; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; A (PKA)&#xB294; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; S133, glycogen synthase &#xB2C8; 3beta&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; (GSK-3beta) &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; s129&#xC5D0; CREB&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC744; &#xC9C8; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xAE30; GAL4 CREB &#xAE30;&#xC790; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xADF8; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (EGF) &#xC218; transactivate CREB PTH &#xC678;&#xC5D0; UMR &#xC140;&#xC5D0;. &#xB610;&#xD55C;, CREB&#xC758; &#xCCA8;&#xAC00;&#xC81C; transactivation &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; &#xC788;&#xB294; PTH&#xC640; EGF UMR &#xC140;&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC; &#xACB0;&#xACFC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; s129&#xC640; S133 EGF &#xC720;&#xB3C4; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; mutational &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. EGF &#xD65C;&#xC131;&#xD654; p38 &#xB4F1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xC2E0;&#xD638; &#xD65C;&#xC131; kinases (ERKs) MAPK &#xAC00;&#xC871; &#xCE58;&#xB8CC; UMR&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xAC00; &#xD558;&#xB098; p38 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (SB203580) &#xB610;&#xB294; MEK &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; (PD98059)&#xC5D0;&#xC11C; PTH &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; EGF&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; S133 CREB&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0;. SB203580 &#xB610;&#xB294; PD98059 &#xC140;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; &#xB2E8;&#xB3C5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xD568;&#xAED8; &#xD06C;&#xAC8C; CREB PTH, CREB &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; EGF&#xC640; p38&#xC640; ERKs PTH&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; transactivation &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; EGF&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; transactivation&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB354; &#xD070; H 89 PKA &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; SB203580 &#xBC0F; pd98059&#xC640; cotreatment&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; PTH&#xC640; EGF, CREB&#xC758; &#xCCA8;&#xAC00;&#xC81C; transactivation &#xC800;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C;&#xAC00; &#xBCF4;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, osteoblastic &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xC218;&#xB834; &#xD558; &#xACE0; CREB&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; in vivo, PTH EGF &#xB4F1; &#xC21C;&#xD658; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBC1C;&#xD718; &#xD558;&#xB294; &#xC5F0;&#xC8FC;&#xD68C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD589;&#xB3D9;.

&#xBD80; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; &#xBC0F; osteoblastic &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC21C;&#xD658; &#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; monophosphate &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xC720;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Anteriormente, hemos demostrado que la hormona paratiroidea (PTH) transactivaci&#xF3;n de monofosfato de adenosina c&#xED;clico (AMPc) respuesta a prote&#xED;nas mal elemento vinculante (CREB) requiere tanto de la serina 129 (S129) y la serina 133 (S133) en c&#xE9;lulas de osteosarcoma de rata UMR 106-01 (UMR) c&#xE9;lulas. Adem&#xE1;s, aunque la prote&#xED;na quinasa A (PKA) es responsable de la fosforilaci&#xF3;n en la S133, la gluc&#xF3;geno sintasa quinasa 3beta (GSK-3beta) la actividad es necesaria y puede ser responsable de la fosforilaci&#xF3;n de CREB en el S129. Aqu&#xED;, se muestra, utilizando el sistema reportero GAL4-CREB, que el factor de crecimiento epid&#xE9;rmico (EGF) pueden transactivate CREB en las c&#xE9;lulas UMR, adem&#xE1;s de la PTH. Adicionalmente, el tratamiento de las c&#xE9;lulas UMR tanto con PTH y los resultados del EGF en mayor que la transactivaci&#xF3;n aditivo de CREB. Adem&#xE1;s, utilizando el an&#xE1;lisis mutacional nos muestran que S129 y S133 son necesarios para EGF inducida por la actividad transcripcional. EGF activa los miembros de la familia MAPK como p38 y extracelulares activado la se&#xF1;al de las quinasas ERK (), y el tratamiento de las c&#xE9;lulas UMR, ya sea con el inhibidor de la p38 (SB203580) o el inhibidor de MEK (PD98059) impide la fosforilaci&#xF3;n de CREB en el S133 por EGF, pero no por PTH. El tratamiento de c&#xE9;lulas con SB203580 o PD98059 solo o junto inhibe de forma significativa la transactivaci&#xF3;n de CREB por EGF, pero no por la PTH, lo que indica que el EGF regula la fosforilaci&#xF3;n de CREB y transactivaci&#xF3;n a trav&#xE9;s de p38 y ERK y la PTH no lo hace. Finalmente, la transactivaci&#xF3;n mayor que aditivo de CREB por PTH y EGF es significativamente inhibido por el inhibidor de PKA H-89 o por cotratamiento con SB203580 y PD98059. Por lo tanto, varias v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas osteobl&#xE1;sticas pueden converger en y regular la actividad de CREB. Esto sugiere, en vivo, que los agentes de circulaci&#xF3;n, tales como la PTH y EGF act&#xFA;an en concierto para ejercer sus efectos.

La inducci&#xF3;n de la actividad transcripcional de la prote&#xED;na c&#xED;clica monofosfato de adenosina elemento de respuesta vinculante por la hormona paratiroidea y de Factor de Crecimiento Epid&#xE9;rmico en las c&#xE9;lulas osteobl&#xE1;sticas

&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x7D20; (PTH) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; PTH1R &#x53CA;&#x5176;&#x53D7;&#x4F53; (&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x7D20; 1 &#x53D7;&#x4F53;&#xFF09; &#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x9AA8;&#x91CD;&#x5851;&#x548C;&#x9499;&#x7A33;&#x6001;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E; PTH &#x7684;&#x539F;&#x56E0;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x9AA8;&#x5438;&#x6536;&#x3001; PTH &#x7684;&#x95F4;&#x6B47;&#x6CE8;&#x5C04;&#x7C7B;&#x56FA;&#x9187;&#x5BF9;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x9AA8;&#x3002;&#x8C03;&#x63A7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x5F88;&#x964C;&#x751F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x66F4;&#x6539; PTH &#x6CBB;&#x7597;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C; UMR 106-01 &#x5E74;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528; DNA &#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x5171; 125 &#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C; 30 &#x672A;&#x77E5;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x6807;&#x7B7E; (&#x65E0;&#x5BB3;&#x73AF;&#x5883;&#x6280;&#x672F;) &#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E8C;&#x6298;&#x8868;&#x8FBE;&#x53D8;&#x5316;&#x540E; PTH &#x6CBB;&#x7597;&#x7B2C; 4&#x3001; 12 &#x548C; 24 h.14 &#x57FA;&#x56E0;&#x4EE5;&#x524D;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4E3A; PTH &#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E0D;&#x660E;&#x8981;&#x53D7; PTH &#x4E4B;&#x524D;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x3002;&#x5B9E;&#x65F6;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;-&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x8BC1;&#x5B9E; 90 &#x548C; 50%&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x53D7;&#x8D85;&#x8FC7; 2 &#x6298;&#x9875; PTH UMR 106-01 &#x548C;&#x5927;&#x9F20;&#x521D;&#x7EA7;&#x7684;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C5E;&#x4E8E;&#x4E0B;&#x5217;&#x86CB;&#x767D;&#x5BB6;&#x65CF;&#xFF1A; &#x6FC0;&#x7D20;&#x3001; &#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF1B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x86CB;&#x767D; &#xFF1B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF1B;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; &#xFF1B;&#x4EE3;&#x8C22;&#x9176; &#xFF1B;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x57FA;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D; &#xFF1B;&#x8F6C;&#x8FD0; &#xFF1B;&#x7B49;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5168;&#x9762;&#x548C;&#x6DF1;&#x5165;&#x5730;&#x4E86;&#x89E3; PTH &#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;&#x63A5;&#x4E0B;&#x6765;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x8BA1;&#x7B97;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4EE5;&#x63D0;&#x53D6;&#x53EF;&#x80FD;&#x53C2;&#x4E0E;&#x8C03;&#x63A7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x56E0;&#x7D20;&#x5305;&#x62EC;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4EE5;&#x524D;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4E3A;&#x53C2;&#x4E0E; PTH &#x4FE1;&#x53F7; &#xFF08;AP 1 &#x548C; cAMP &#x53CD;&#x5E94;&#x5143;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF09;&#xFF0C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x82AF;&#x7247;&#x6570;&#x636E; (C/EBP) &#x548C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x65B0;&#x578B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x90A3;&#x4E9B; (AP-2&#xFF0C;AP 4&#x3001; SP1&#x3001; FoxD3 &#x7B49;.&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4E00;&#x79CD;&#x53EF;&#x9760;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x7533;&#x8BF7;&#x5176;&#x4ED6;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;

&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x548C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7532;&#x72B6;&#x65C1;&#x817A;&#x6FC0;&#x7D20;&#x4FE1;&#x53F7;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x82AF;&#x7247;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x7684;&#x6210;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;

Parathyroid hormone (PTH) binds to its receptor PTH1R (parathyroid hormone 1 receptor) in osteoblastic cells to regulate bone remodeling and calcium homeostasis. While prolonged exposure to PTH causes increased bone resorption, intermittent injections of PTH have an anabolic effect on bone. The molecular mechanisms regulating these processes are still largely unknown. Here, we present our results on gene expression profile changes in the PTH-treated osteoblastic cell line, UMR 106-01, using DNA microarray analysis. A total of 125 known genes and 30 unknown expressed sequence tags (ESTs) were found to have at least 2-fold expression changes after PTH treatment at 4, 12, and 24 h. 14 genes were previously known to be PTH-regulated but many were unknown to be regulated by PTH prior to our experiments. Real-time reverse transcriptase-PCR confirmed that 90 and 50% of the genes are regulated more than 2-fold by PTH in UMR 106-01 and rat primary osteoblastic cells, respectively. Most genes belong to the following protein families: hormones, growth factors, and receptors; signal transduction pathway proteins; transcription factors; proteases; metabolic enzymes; structural and matrix proteins; transporters; etc. These results provide a comprehensive and deeper knowledge about PTH regulation of osteoblastic gene expression. Next, we designed a computational method to extract information about transcription factors likely involved in regulating these genes. These factors include those previously known to be involved in PTH signaling (AP-1 and the cAMP response element-binding protein), those that were identified by microarray data (C/EBP), and some novel transcription factors (AP-2, AP-4, SP1, FoxD3, etc.). Our results suggest that a reliable bioinformatics approach can be easily applied for other systems.

Gene expression profiles and transcription factors involved in parathyroid hormone signaling in osteoblasts revealed by microarray and bioinformatics.

L&#x26;#39;hormone parathyro&#xEF;dienne (PTH) se lie &#xE0; son r&#xE9;cepteur PTH1R (hormone parathyro&#xEF;dienne 1 receptor) dans les cellules ost&#xE9;oblastiques de r&#xE9;glementer le remodelage osseux et l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie du calcium. Alors que l&#x26;#39;exposition prolong&#xE9;e &#xE0; des causes PTH augment&#xE9; la r&#xE9;sorption osseuse, les injections intermittentes de PTH ont un effet anabolisant sur l&#x26;#39;os. Les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui r&#xE9;gulent ces processus sont encore largement inconnus. Ici, nous pr&#xE9;sentons nos r&#xE9;sultats sur les changements d&#x26;#39;expression de g&#xE8;nes de profil dans la ligne de PTH-trait&#xE9; la cellule ost&#xE9;oblastique, UMR 106-01, en utilisant l&#x26;#39;analyse des puces &#xE0; ADN. Un total de 125 g&#xE8;nes connus et inconnus 30 &#xE9;tiquettes de s&#xE9;quences exprim&#xE9;es (EST) ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s &#xE0; avoir des changements d&#x26;#39;expression d&#x26;#39;au moins 2 fois apr&#xE8;s traitement &#xE0; la PTH &#xE0; &#x200B;&#x200B;4, 12 et 24 h. 14 g&#xE8;nes ont d&#xE9;j&#xE0; &#xE9;t&#xE9; connu pour &#xEA;tre la PTH-r&#xE9;glement&#xE9;, mais beaucoup &#xE9;taient inconnus d&#x26;#39;&#xEA;tre r&#xE9;glement&#xE9;s par la PTH avant nos exp&#xE9;riences. En temps r&#xE9;el de la transcriptase inverse-PCR a confirm&#xE9; que 90 et 50% des g&#xE8;nes sont r&#xE9;gul&#xE9;s plus de 2 fois par la PTH dans l&#x26;#39;UMR 106-01 et primaires de rat cellules ost&#xE9;oblastiques, respectivement. La plupart des g&#xE8;nes appartiennent &#xE0; des familles de prot&#xE9;ines suivants: les hormones, les facteurs de croissance, et les r&#xE9;cepteurs, les prot&#xE9;ines de la voie de transduction du signal, les facteurs de transcription; prot&#xE9;ases, des enzymes m&#xE9;taboliques, les prot&#xE9;ines structurelles et de la matrice; transporteurs; etc Ces r&#xE9;sultats fournissent une connaissance approfondie et plus profonde sur la RPGC n o r&#xE9;glementation l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes ost&#xE9;oblastique. Ensuite, nous avons con&#xE7;u une m&#xE9;thode de calcul pour extraire des informations sur les facteurs de transcription impliqu&#xE9;s dans la r&#xE9;gulation susceptible de ces g&#xE8;nes. Ces facteurs incluent ceux pr&#xE9;c&#xE9;demment connus pour &#xEA;tre impliqu&#xE9;s dans la signalisation PTH (AP-1 et la r&#xE9;ponse &#xE0; l&#x26;#39;AMPc &#xE9;l&#xE9;ment-binding protein), ceux qui ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s par puce &#xE0; ADN de donn&#xE9;es (C / EBP), et quelques nouveaux facteurs de transcription (AP-2, AP -4, SP1, FoxD3, etc.) Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent qu&#x26;#39;une approche fiable bioinformatique peut &#xEA;tre facilement appliqu&#xE9;e pour d&#x26;#39;autres syst&#xE8;mes.

Profils d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique et facteurs de transcription impliqu&#xE9;s dans la signalisation hormone parathyro&#xEF;dienne dans les ost&#xE9;oblastes r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9;es par puces &#xE0; ADN et la bioinformatique

Genexpressionsprofile und Transkriptionsfaktoren in Parathormon-Signalisierung in Osteoblasten von Microarray-und Bioinformatik ergeben beteiligt.

Ormone paratiroideo (PTH) lega il recettore PTH1R (ormone paratiroideo 1 receptor) in cellule osteoblastiche regolare omeostasi del calcio e di rimodellamento dell&#39;osso. Mentre l&#39;esposizione prolungata a PTH provoca aumentato riassorbimento, iniezioni intermittenti di PTH hanno un effetto anabolico sull&#39;osso. I meccanismi molecolari che regolano questi processi sono ancora in gran parte sconosciuti. Qui, presentiamo i nostri risultati sull&#39;espressione del gene cambia profilo nella linea PTH-trattato delle cellule osteoblastiche, UMR 106-01, mediante analisi del DNA microarray. Un totale di 30 sconosciuto expressed sequence Tag (ESTs) e 125 geni noti sono stati trovati per avere cambiamenti di espressione almeno 2 volte dopo il trattamento di PTH at 4, 12 e 24 h. 14 geni precedentemente erano noti per essere regolata dal PTH, ma molti erano sconosciuti a essere regolamentato da PTH prima nostri esperimenti. Reverse transcriptase-PCR in tempo reale ha confermato che 90 e 50% dei geni sono regolati pi&ugrave; di 2 volte del PTH in UMR 106-01 e cellule osteoblastiche primarie di ratto, rispettivamente. La maggior parte dei geni appartengono alle seguenti famiglie della proteina: ormoni, fattori di crescita e recettori; Signal transduction pathway proteine; fattori di trascrizione; proteasi; enzimi metabolici; proteine strutturali e matrice; trasportatori; ecc. Questi risultati forniscono una completa e profonda conoscenza di regolamento PTH di espressione genica osteoblastica. Successivamente, abbiamo progettato un metodo di calcolo per estrarre informazioni sui fattori di trascrizione probabilmente coinvolti nella regolazione di questi geni. Questi fattori comprendono quelli precedentemente noto per essere coinvolto in PTH segnalazione (AP-1 e il campo risposta elemento-proteina), quelli che sono stati identificati da dati di microarray (C/EBP) e alcuni fattori di trascrizione romanzo (AP-2, AP-4, SP1, FoxD3, ecc.). I nostri risultati suggeriscono che un approccio di bioinformatica affidabile pu&ograve; essere facilmente applicato per altri sistemi.

Profili di espressione genica e fattori di trascrizione coinvolti nella segnalazione in osteoblasti rivelati da microarray e Bioinformatica dell&#39;ormone paratiroideo.

&#x526F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#xFF08;PTH&#xFF09;&#x304C;&#x9AA8;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;PTH1R&#xFF08;&#x526F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;1&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF09;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3002; PTH&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3078;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x66DD;&#x9732;&#x304C;&#x9AA8;&#x5438;&#x53CE;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;PTH&#x306E;&#x9593;&#x6B20;&#x6CE8;&#x5C04;&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x540C;&#x5316;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x70B9;&#x304C;&#x591A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;DNA&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PTH&#x51E6;&#x7406;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3001;UMR 106&#x304B;&#x3089;01&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 125&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;30&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x914D;&#x5217;&#x30BF;&#x30B0;&#xFF08;EST&#xFF09;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x306F;&#x3001;4&#x3001;12&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;24&#x6642;&#x9593;&#x3067;PTH&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;2&#x500D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; 14&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;PTH-&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x5148;&#x7ACB;&#x3063;&#x3066;PTH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x9006;&#x8EE2;&#x5199;&#x9175;&#x7D20;-PCR&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;90&#x3068;50&#xFF05;&#x304C;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;UMR 106&#x304B;&#x3089;01&#x3068;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x521D;&#x4EE3;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;PTH&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;2&#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306B;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;PTH&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x5305;&#x62EC;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x6DF1;&#x3044;&#x77E5;&#x8B58;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF1A;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x5C5E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;&#x6B21;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x304A;&#x305D;&#x3089;&#x304F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x62BD;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;PTH&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#xFF08;AP-1&#x304A;&#x3088;&#x3073;cAMP&#x5FDC;&#x7B54;&#x8981;&#x7D20;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF09;&#x3001;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#xFF08;C / EBP&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF08;AP-2&#x3001;AP&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;-4&#x3001;SP1&#x3001;FoxD3&#x306A;&#x3069;&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x4FE1;&#x983C;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30DE;&#x30C6;&#x30A3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9AA8;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x526F;&#x7532;&#x72B6;&#x817A;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E2;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;

&#xBD80; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; (PTH)&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB418;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; PTH1R (&#xBD80; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC; 1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;) osteoblastic &#xC140; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xBF08; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xCE7C;&#xC298; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;. PTH&#xC5D0; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xB178;&#xCD9C; &#xD558;&#xBA74; &#xC99D;&#xAC00; &#xBF08; &#xC7AC;&#xD761;&#xC218;, &#xB3D9;&#xC548; PTH&#xC758; &#xAC04;&#xD5D0;&#xC801;&#xC778; &#xC8FC;&#xC0AC; &#xBF08;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31; &#xB3D9;&#xD654; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;.&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC744; osteoblastic &#xC140; PTH &#xCDE8;&#xAE09; &#xB77C;&#xC778;, UMR 106-01 DNA microarray &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. 125 &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; 30 &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xD0DC;&#xADF8; (ESTs) &#xCD1D; 4, 12, &#xBC0F; 24 h. 14&#xC5D0;&#xC11C; PTH &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 2-fold &#xC2DD; &#xBCC0;&#xACBD;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; PTH &#xADDC;&#xC81C; &#xB420; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB9CE;&#xC740; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC804;&#xC5D0; PTH&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C;. &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; PCR&#xB294; 90&#xACFC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 50%&#xB294; &#xADDC;&#xC81C; 2-fold &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; PTH UMR 106-01&#xACFC; &#xC950; &#xC8FC; osteoblastic &#xC140;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC01;&#xAC01; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xAC00; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xB294;: &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;, &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xBC0F; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658; &#xD1B5;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;; &#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C;; &#xB300;&#xC0AC; &#xD6A8;&#xC18C;; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;; &#xB4F1;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; osteoblastic &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; PTH &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xB354; &#xAE4A;&#xC740; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xACC4;&#xC0B0; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xC124;&#xACC4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xADF8; &#xADF8; microarray &#xB370;&#xC774;&#xD130; (C/EBP), &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638; (AP 1&#xACFC; &#xCEA0;&#xD504; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;), PTH&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; (AP 2 AP 4, SP1, FoxD3, &#xB4F1;.). &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E0;&#xB8B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC9C4; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xACFC; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xC2E0;&#xD638; osteoblasts microarray &#xBC0F; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC815;&#xBCF4;&#xD559;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xAC1C;&#xC5D0; &#xBD80; &#xAC11; &#xC0C1;&#xC120; &#xD638;&#xB974;&#xBAAC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC;.

La hormona paratiroidea (PTH) se une a su receptor de PTH1R (hormona paratiroidea 1 receptor) en las c&#xE9;lulas osteobl&#xE1;sticas para regular la remodelaci&#xF3;n &#xF3;sea y la homeostasis del calcio. Mientras que la exposici&#xF3;n prolongada a las causas de PTH incrementa la resorci&#xF3;n &#xF3;sea, las inyecciones intermitentes de PTH tiene un efecto anab&#xF3;lico sobre el hueso. Los mecanismos moleculares que regulan estos procesos a&#xFA;n no se conocen. A continuaci&#xF3;n, presentamos nuestros resultados en los cambios Perfil de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en la l&#xED;nea celular de la hormona paratiroidea tratada osteobl&#xE1;stica, UMR 106-01, mediante el an&#xE1;lisis de microarrays de ADN. Un total de 125 genes conocidos y desconocidos de 30 etiquetas de secuencias expresadas (EST) se encontr&#xF3; que ten&#xED;an por lo menos 2 veces los cambios de expresi&#xF3;n despu&#xE9;s del tratamiento con PTH en 4, 12 y 24 h. 14 genes que antes se conoc&#xED;a como la PTH regulada pero muchos de ellos eran desconocidos para ser regulada por la PTH antes de que nuestros experimentos. En tiempo real de la transcriptasa inversa-PCR confirm&#xF3; que el 90 y el 50% de los genes est&#xE1;n regulados m&#xE1;s de dos veces por PTH en UMR 106-01 y de rata osteobl&#xE1;sticas c&#xE9;lulas primarias, respectivamente. La mayor&#xED;a de los genes que pertenecen a las familias de prote&#xED;nas siguientes: hormonas, factores de crecimiento y los receptores, prote&#xED;nas de la v&#xED;a de transducci&#xF3;n de se&#xF1;ales, factores de transcripci&#xF3;n, proteasas, enzimas metab&#xF3;licas, prote&#xED;nas estructurales y de la matriz, los transportistas, etc Estos resultados proporcionan un conocimiento amplio y profundo sobre la regulaci&#xF3;n de la PTH de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica osteobl&#xE1;stica. A continuaci&#xF3;n, se dise&#xF1;&#xF3; un m&#xE9;todo de c&#xE1;lculo para extraer informaci&#xF3;n acerca de los factores de transcripci&#xF3;n implicados en el mantenimiento de estos genes. Estos factores incluyen los previamente conocidos por estar involucrados en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la PTH (AP-1 y la prote&#xED;na de respuesta a AMPc elemento de uni&#xF3;n), los que fueron identificados por los datos de microarrays (C / EBP), y algunos factores de transcripci&#xF3;n nuevos (AP-2, AP -4, SP1, FoxD3, etc.) Nuestros resultados sugieren que un enfoque fiable bioinform&#xE1;tica puede aplicarse f&#xE1;cilmente para otros sistemas.

Perfiles de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica y factores de transcripci&#xF3;n implicados en la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de la hormona paratiroidea en los osteoblastos reveladas por microarrays y Bioinform&#xE1;tica

&#x5171;&#x4EF7;&#x8102;&#x8D28;&#x4FEE;&#x6539;&#x8C03;&#x89E3; Ras &#x86CB;&#x767D;&#x819C;&#x9644;&#x4EF6;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x7684; Ras &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x662F; farnesylated &#x548C;&#x7FA7;&#x57FA;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5728;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178; &#xFF1B;H-Ras &#x53CA; N-Ras &#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4FEE;&#x6539; palmitoylation&#x3002;&#x9175;&#x6BCD; Ras &#x662F;&#x68D5;&#x6988;&#x9170;&#x5316;&#x7684; DHHC &#x5BCC;&#x542B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x57DF;&#x5305;&#x542B;&#x86CB;&#x767D; Erf2 &#x4E0E; Erf4 &#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#xFF0C;H &#x548C; N Ras &#x662F;&#x68D5;&#x6988;&#x9170;&#x5316;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x86CB;&#x767D; palmitoyltransferase &#x7684; ZDHHC9 &#x548C; GCP16 &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6240;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x3002;DHHC9 &#x662F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6216;&#x7F3A;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5305;&#x542B; DHHC &#x5BCC;&#x542B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x57DF;&#x3002;GCP16 &#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x5177;&#x6709;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD; Erf4 &#x5E8F;&#x5217;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x7684;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;DHHC9 &#x548C; GCP16 co-distribute &#x5728;&#x9AD8;&#x5C14;&#x57FA;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4F53;&#x5185;&#x7684; Ras palmitoylation &#x7B26;&#x5408;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x50CF;&#x9175;&#x6BCD; Erf2.Erf4&#xFF0C;&#x5F62;&#x6210;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;DHHC9 &#x548C; GCP16 &#x548C; DHHC9 &#x86CB;&#x767D;&#x8102;&#x80AA;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x9700;&#x8981; GCP16&#x3002;&#x7EAF;&#x51C0;&#x7684; DHHC9&#x3002;GCP16 &#x5C55;&#x54C1;&#x5E95;&#x7269;&#x4E13;&#x4E00;&#x6027;&#x3001; palmitoylating H &#x548C; N-Ras &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; myristoylated G (alphai1) &#x6216;&#x5DEE;&#x8DDD;-43&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; N &#x7AEF; palmitoylation &#x56FE;&#x6848;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;DHHC9&#x3002;GCP16 &#x663E;&#x793A;&#x9175;&#x6BCD; Ras palmitoyltransferase &#x529F;&#x80FD;&#x4EBA;&#x7C7B; ortholog &#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;

DHHC9 &#x548C; GCP16 &#x5177;&#x6709;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684; H &#x548C; N Ras &#x6784;&#x6210;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8102;&#x80AA;&#x9170;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x3002;

Covalent lipid modifications mediate the membrane attachment and biological activity of Ras proteins. All Ras isoforms are farnesylated and carboxyl-methylated at the terminal cysteine; H-Ras and N-Ras are further modified by palmitoylation. Yeast Ras is palmitoylated by the DHHC cysteine-rich domain-containing protein Erf2 in a complex with Erf4. Here we report that H- and N-Ras are palmitoylated by a human protein palmitoyltransferase encoded by the ZDHHC9 and GCP16 genes. DHHC9 is an integral membrane protein that contains a DHHC cysteine-rich domain. GCP16 encodes a Golgi-localized membrane protein that has limited sequence similarity to yeast Erf4. DHHC9 and GCP16 co-distribute in the Golgi apparatus, a location consistent with the site of mammalian Ras palmitoylation in vivo. Like yeast Erf2.Erf4, DHHC9 and GCP16 form a protein complex, and DHHC9 requires GCP16 for protein fatty acyltransferase activity and protein stability. Purified DHHC9.GCP16 exhibits substrate specificity, palmitoylating H- and N-Ras but not myristoylated G (alphai1) or GAP-43, proteins with N-terminal palmitoylation motifs. Hence, DHHC9.GCP16 displays the properties of a functional human ortholog of the yeast Ras palmitoyltransferase.

DHHC9 and GCP16 constitute a human protein fatty acyltransferase with specificity for H- and N-Ras.

Modifications lipidiques covalentes m&#xE9;diation l&#x26;#39;attachement membrane et l&#x26;#39;activit&#xE9; biologique des prot&#xE9;ines Ras. Tous les isoformes Ras sont farn&#xE9;syl&#xE9;e et carboxyle-m&#xE9;thyl&#xE9; &#xE0; la cyst&#xE9;ine terminal; H-Ras et N-Ras sont en outre modifi&#xE9;e par palmitoylation. Levure Ras est palmitoyl&#xE9;e par le Erf2 prot&#xE9;ine riche en cyst&#xE9;ine de domaine contenant DHHC dans un complexe avec Erf4. Nous rapportons ici que H et N-Ras sont palmitoyl&#xE9;e par une prot&#xE9;ine humaine cod&#xE9;e par les palmitoyltransf&#xE9;rase ZDHHC9 et GCP16 g&#xE8;nes. DHHC9 est une prot&#xE9;ine membranaire int&#xE9;grale qui contient une DHHC riche en cyst&#xE9;ine de domaine. GCP16 code pour une prot&#xE9;ine de la membrane de Golgi-localis&#xE9; qui a une similarit&#xE9; de s&#xE9;quence limit&#xE9;e &#xE0; la levure Erf4. DHHC9 et GCP16 co-distribuer dans l&#x26;#39;appareil de Golgi, un emplacement compatible avec le site de Ras palmitoylation mammif&#xE8;re in vivo. Comme la levure Erf2.Erf4, DHHC9 et GCP16 forme un complexe prot&#xE9;ique, et DHHC9 exige GCP16 pour la prot&#xE9;ine acyltransf&#xE9;rase gras et la stabilit&#xE9; des prot&#xE9;ines. Purifi&#xE9;e DHHC9.GCP16 sp&#xE9;cificit&#xE9; de substrat des expositions, palmitoylating H-et N-Ras, mais pas myristoyl&#xE9;e G (alphai1) ou GAP-43, les prot&#xE9;ines avec des motifs palmitoylation N-terminaux. Par cons&#xE9;quent, DHHC9.GCP16 affiche les propri&#xE9;t&#xE9;s d&#x26;#39;un orthologue humaine fonctionnelle de Ras les levures palmitoyltransf&#xE9;rase.

DHHC9 et GCP16 Constituer une prot&#xE9;ine humaine gras acyltransf&#xE9;rase avec une sp&#xE9;cificit&#xE9; pour H et N-Ras

DHHC9 und GCP16 bilden ein menschliches Protein Fetts&#xE4;ure-Acyltransferase mit Spezifit&#xE4;t f&#xFC;r H-und N-Ras.

Modifiche covalenti lipidi mediano l&#39;attivit&agrave; di membrana attaccamento e biologiche delle proteine Ras. Tutte le isoforme di Ras sono farnesylated e carbossilico-metilato presso la cisteina terminale; H-Ras e N-Ras sono ulteriormente modificato da palmitoilazione. Lievito Ras &egrave; palmitoilazione dalla DHHC ricca di cisteina dominio contenenti proteina Erf2 in un complesso con Erf4. Qui riportiamo che H e N-Ras sono palmitoilazione da una proteina umana palmitoiltransferasi codificati da geni ZDHHC9 e GCP16. DHHC9 &egrave; una proteina integrale di membrana che contiene un dominio ricco di cisteina DHHC. GCP16 codifica per una proteina di membrana Golgi localizzato che ha limitato la somiglianza di sequenza con lievito Erf4. DHHC9 e GCP16 co-distribute nell&#39;apparato di Golgi, una posizione coerenza con il sito di mammiferi palmitoilazione Ras in vivo. Come lievito Erf2.Erf4, DHHC9 e GCP16 formano un complesso proteico, e DHHC9 richiede GCP16 proteina grasso aciltransferasi attivit&agrave; e la stabilit&agrave; proteica. DHHC9 purificato.GCP16 esibisce le specificit&agrave; di substrato, palmitoylating H - e N-Ras ma non myristoylated G (alphai1) o GAP-43, proteine con motivi palmitoilazione N-terminale. Quindi, DHHC9.GCP16 consente di visualizzare le propriet&agrave; di un ortholog umano funzionale del lievito Ras palmitoiltransferasi.

DHHC9 e GCP16 costituiscono una proteina umana grasso aciltransferasi con specificit&agrave; per H - e N-Ras.

&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x6027;&#x306E;&#x8102;&#x8CEA;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;Ras&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;RAS&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x672B;&#x7AEF;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x30D5;&#x30A1;&#x30EB;&#x30CD;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30EB;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;H-Ras&#x304A;&#x3088;&#x3073;N-Ras&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;Ras&#x306F;Erf4&#x3068;&#x306E;&#x8907;&#x5408;DHHC&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x542B;&#x6709;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;Erf2&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;H-&#x304A;&#x3088;&#x3073;N-Ras&#x306F;ZDHHC9&#x3068;GCP16&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30D2;&#x30C8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x200B;&#x200B;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DHHC9&#x306F;DHHC&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x819C;&#x5185;&#x5728;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; GCP16&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;Erf4&#x306B;&#x914D;&#x5217;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x4F53;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x819C;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; DHHC9&#x3068;GCP16&#x30B4;&#x30EB;&#x30B8;&#x88C5;&#x7F6E;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;Ras&#x306E;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x6240;&#x306B;&#x5171;&#x540C;&#x3067;&#x914D;&#x5E03;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;Erf2.Erf4&#x3001;DHHC9&#x3068;GCP16&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;DHHC9&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x57FA;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;GCP16&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#x3001;DHHC9.GCP16&#x5C55;&#x793A;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;H-&#x304A;&#x3088;&#x3073;N-Ras&#x3092;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x304C;G&#xFF08;alphai1&#xFF09;&#x3084;GAP-43&#x3001;N-&#x672B;&#x7AEF;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x30DF;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x5316;&#x200B;&#x200B;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;DHHC9.GCP16&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30EB;&#x30DF;&#x30C8;&#x30A4;&#x30EB;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;Ras&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x30AA;&#x30EB;&#x30BD;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

DHHC9&#x3068;GCP16&#x306F;&#x3001;H-&#x304A;&#x3088;&#x3073;N-ras&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30A2;&#x30B7;&#x30EB;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30D2;&#x30C8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x200B;&#x200B;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8102;&#x80AA;&#x9178;&#x3092;&#x69CB;&#x6210;&#x3059;&#x308B;

&#xACF5;&#xC720; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC218;&#xC815; &#xC911;&#xC7AC; Ras &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xCCA8;&#xBD80;&#xC640; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD65C;&#xB3D9;. &#xBAA8;&#xB4E0; Ras isoforms farnesylated &#xC774;&#xBA70; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;;&#xC5D0; carboxyl &#xAC20; H &#xC870;-Ras &#xBC0F; N-Ras &#xCD94;&#xAC00; palmitoylation&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB77C;&#xC2A4; DHHC &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Erf2 erf4&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; palmitoylated&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; H&#xC640; N Ras&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; palmitoyltransferase ZDHHC9 &#xBC0F; GCP16 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xD638;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; palmitoylated. DHHC9 DHHC &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD1B5;&#xD569; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. GCP16 &#xD6A8; Erf4 &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; Golgi &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DHHC9 &#xBC0F; GCP16 co-distribute Golgi &#xAE30;&#xAD6C;, &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; Ras palmitoylation&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;. &#xD6A8; &#xBAA8; Erf2.Erf4, &#xCC98;&#xB7FC; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xB294; DHHC9 &#xBC0F; GCP16 &#xBC0F; DHHC9 GCP16 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9C0;&#xBC29; acyltransferase &#xD65C;&#xB3D9;&#xACFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;. &#xC21C;&#xD654; dhhc9&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.GCP16 &#xC804;&#xC2DC; &#xAE30;&#xC9C8; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;, palmitoylating H&#xC640; N Ras &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; myristoylated G (alphai1) &#xB610;&#xB294; &#xAC04;&#xACA9; 43 N &#xB9E8;&#xB05D; palmitoylation &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, DHHC9.GCP16 &#xB204; &#xB8E9; Ras palmitoyltransferase&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC778;&#xAC04; ortholog&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

DHHC9 &#xBC0F; GCP16 &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; H &#xBC0F; N Ras&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9C0;&#xBC29; acyltransferase&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD55C;&#xB2E4;.

Las modificaciones covalentes de l&#xED;pidos mediar en la uni&#xF3;n de la membrana y la actividad biol&#xF3;gica de las prote&#xED;nas Ras. Todas las isoformas de Ras son farnesylated y carboxilo-metilada en la cisterna terminal; H-Ras y N-RAS tambi&#xE9;n dependen de palmitoilaci&#xF3;n. La levadura de Ras se palmitoylated por el Erf2 prote&#xED;na rica en ciste&#xED;na DHHC de dominio que contienen en un complejo con Erf4. Aqu&#xED; mostramos que H-Ras y N-est&#xE1;n palmitoylated por una prote&#xED;na humana palmitoiltransferasa codificadas por los genes ZDHHC9 y GCP16. DHHC9 es una prote&#xED;na integral de membrana que contiene una DHHC rica en ciste&#xED;na de dominio. GCP16 codifica una prote&#xED;na de la membrana de Golgi-localizada que tiene similitud de secuencia limitada a la levadura Erf4. DHHC9 GCP16 y co-distribuir en el aparato de Golgi, un lugar en consonancia con el lugar de los mam&#xED;feros palmitoilaci&#xF3;n Ras en vivo. Al igual que la levadura Erf2.Erf4, DHHC9 GCP16 y forma un complejo de prote&#xED;nas, y DHHC9 requiere GCP16 de prote&#xED;na grasa actividad aciltransferasa y la estabilidad de las prote&#xED;nas. Purificada DHHC9.GCP16 especificidad por el sustrato exposiciones, palmitoylating H y N-Ras, pero no miristoilada G (alphai1) o 43-GAP, las prote&#xED;nas con motivos palmitoilaci&#xF3;n N-terminales. Por lo tanto, DHHC9.GCP16 muestra las propiedades de un ort&#xF3;logo humano funcional de las levaduras Ras palmitoiltransferasa.

John Swarthout

Sigma-Aldrich

Genome-wide Screen for miRNA Targets Using the MISSION Target ID Library

MISSION LentiPlex Pooled shRNA Library Screening in Mammalian Cells