Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

University of Missouri-Columbia

Ciliated protozoa contain two types of nuclei, germ line micronuclei (Mic) and transcriptionally active macronuclei (Mac). During sexual reproduction, the parental Mac degenerates and a new Mac develops from a mitotic product of the zygotic Mic. Macronuclear development involves extensive endoreplication of the genome. The present study shows that endoreplication of macronuclear DNA in Tetrahymena is an example of endocyling, a variant of the mitotic cycle with alternating S and G phases in the absence of cell division. Thus, endocycling is conserved from ciliates to multicellular organisms. The gene ASI2 in Tetrahymena thermophila encodes a putative signal transduction receptor. ASI2 is nonessential for vegetative growth, but it is upregulated during development of the new Mac. Cells that lack ASI2 in the developing Mac anlagen are arrested in endoreplication of the DNA and die. This study shows that ASI2 is also transcribed in the parental Mac early in conjugation and that transcription of ASI2 in the parental Mac supports endoreplication of the DNA during early stages of development of the Mac anlagen. Other molecular events in Mac anlage development, including developmentally regulated DNA rearrangement, occur normally in matings between ASI2 knockouts, suggesting that ASI2 specifically regulates endocycling in Tetrahymena.

A developmentally regulated gene, ASI2, is required for endocycling in the macronuclear anlagen of Tetrahymena.

Protozoaires cili&eacute;s contiennent deux types de noyaux, germe ligne micronoyaux (Mic) et activit&eacute; de transcription macronoyaux (Mac). Au cours de la reproduction sexu&eacute;e, le Mac parental d&eacute;g&eacute;n&egrave;re et un nouveau Mac se d&eacute;veloppe &agrave; partir d&#39;un produit mitotique de la Mic zygotique. Macronucl&eacute;aire d&eacute;veloppement implique une vaste endor&eacute;duplication du g&eacute;nome. Cette &eacute;tude montre qu&#39;endor&eacute;duplication de macronucl&eacute;aire ADN chez Tetrahymena est un exemple d&#39;endocyling, une variante du cycle avec une alternance de phases S et G, en l&#39;absence de division cellulaire mitotique. Ainsi, endocycling est conserv&eacute;e de cili&eacute;s chez les organismes multicellulaires. Le g&egrave;ne ASI2 chez Tetrahymena thermophila encode un r&eacute;cepteur de transduction de signal putatif. ASI2 est non essentiels pour la croissance v&eacute;g&eacute;tative, mais elle est augment&eacute;e au cours du d&eacute;veloppement du nouveau Mac. Les cellules qui n&#39;ont pas ASI2 dans les pays en d&eacute;veloppement anlagen Mac sont arr&ecirc;t&eacute;s &agrave; endor&eacute;duplication de l&#39;ADN et meurent. Cette &eacute;tude montre que ASI2 est aussi transcrit dans le Mac parental au d&eacute;but de la conjugaison et que transcription de ASI2 dans le parental Mac prend en charge l&#39;endor&eacute;duplication de l&#39;ADN au cours des premiers stades du d&eacute;veloppement des anlagen Mac. Autres &eacute;v&eacute;nements mol&eacute;culaires dans le d&eacute;veloppement d&#39;anlage Mac, y compris d&eacute;veloppemental r&eacute;gl&eacute; r&eacute;arrangement de l&#39;ADN, se produisent normalement dans les croisements entre les coups de gr&acirc;ce ASI2, ce qui laisse supposer que ASI2 r&eacute;glemente en particulier endocycling de Tetrahymena.

Un g&egrave;ne d&eacute;veloppemental r&eacute;gl&eacute;, ASI2, est n&eacute;cessaire pour endocycling dans les anlagen macronucl&eacute;aire de Tetrahymena.

Protozoi ciliati contengono due tipi di nuclei, micronuclei di linea germinale (Mic) e transcriptionally active macronucleo (Mac). Durante la riproduzione sessuale, il Mac parental degenera e si sviluppa un nuovo Mac da un prodotto mitotico del microfono zygotic. Macronuclear sviluppo coinvolge ampie endoreplication del genoma. Il presente studio dimostra che endoreplication di macronuclear in Tetrahymena del DNA &egrave; un esempio di endocyling, una variante del ciclo mitotico con alternanza di fasi di S e G in assenza di divisione cellulare. Cos&igrave;, endocycling &egrave; conservato da ciliati a organismi pluricellulari. Il gene ASI2 in Tetrahymena thermophila codifica per un recettore di trasduzione del segnale putativo. ASI2 &egrave; non essenziali per la crescita vegetativa, ma &egrave; sovraregolati durante lo sviluppo del nuovo Mac. Le cellule che la mancanza di ASI2 nel anlagen Mac in via di sviluppo vengono arrestate in endoreplication del DNA e morire. Questo studio dimostra che ASI2 &egrave; anche trascritto in Mac parentale presto nella coniugazione e che trascrizione di ASI2 in parentale Mac supporta endoreplication del DNA durante le prime fasi di sviluppo di anlagen il Mac. Altri eventi molecolari in sviluppo Mac anlage inerente allo sviluppo regolamentato riarrangiamento del DNA, si verificano normalmente in accoppiamenti tra ASI2 knockouts, suggerendo che ASI2 disciplina specificamente endocycling in Tetrahymena.

Un gene evolutivo regolamentato, ASI2, &egrave; necessario per endocycling nella macronuclear anlagen di Tetrahymena.

Protozoos ciliados contienen dos tipos de n&uacute;cleos, micron&uacute;cleos de l&iacute;nea del germen (Mic) y transcripcionalmente activa macronuclei (Mac). Durante la reproducci&oacute;n sexual, el Mac parental degenera y un Mac se convierte de un producto mit&oacute;tico de la Mic cig&oacute;ticos. Macronuclear desarrollo implica endoreplication extenso del genoma. El presente estudio muestra que endoreplication de macronuclear ADN en Tetrahymena es un ejemplo de endocyling, una variante del ciclo mit&oacute;tico alternando fases S y G en la ausencia de la divisi&oacute;n celular. As&iacute;, endocycling se conserva de ciliados a organismos multicelulares. El gen ASI2 en Tetrahymena thermophila codifica un receptor de transducci&oacute;n de se&ntilde;al posible. ASI2 es no esenciales para el crecimiento vegetativo, pero se alza durante el desarrollo del nuevo Mac. Las c&eacute;lulas que carecen de ASI2 en el desarrollo anlagen Mac son arrestadas en endoreplication de la DNA y mueren. Este estudio muestra que ASI2 tambi&eacute;n se transcribe en el Mac parental temprano en la conjugaci&oacute;n y que transcripci&oacute;n de ASI2 en el parental Mac soporta endoreplication de la DNA durante las primeras etapas de desarrollo del anlagen Mac. Otros eventos moleculares en el desarrollo de anlage de Mac, incluyendo desarrollo regulado cambio de ADN, se producen normalmente en apareamientos entre ASI2 nocauts, sugiriendo que la ASI2 regula espec&iacute;ficamente endocycling en Tetrahymena.

Un gen desarrollo regulado, ASI2, es necesario para endocycling en el macronuclear anlagen de Tetrahymena.

Inhalation exposure models are becoming the preferred method for the comparative study of respiratory infectious diseases due to their resemblance to the natural route of infection. To enable precise delivery of pathogen to the lower respiratory tract in a manner that imposes minimal biosafety risk, nose-only exposure systems have been developed. Early inhalation exposure technology for infectious disease research grew out of technology used in asthma research where predominantly the Collison nebulizer is used to generate an aerosol by beating a liquid sample against glass. Although infectious aerosol droplets of 1-5 Î¼m in size can be generated, the Collison often causes loss of viability. In this work, we evaluate a gentler method for aerosolization of living cells and describe the use of the Sparging Liquid Aerosol Generator (SLAG) in a rat pneumonic plague model. The SLAG creates aerosols by continuous dripping of liquid sample on a porous metal disc. We show the generation of 0.5-1 Î¼m Yersinia pestis aerosol particles using the SLAG with spray factors typically ranging from 10(-7) to 10(-8) with no detectable loss of bacterial viability. Delivery of these infectious particles via nose-only exposure led to the rapid development of lethal pneumonic plague. Further, we evaluated the effect of restraint-stress imposed by the nose-only exposure chamber on early inflammatory responses and bacterial deposition. Elevated serum corticosterone which peaked at 2 h post-procedure indicated the animals experienced stress as a result of restraint in the nose-only chamber. However, we observed no correlation between elevated corticosterone and the amount of bacterial deposition or inflammation in the lungs. Together these data demonstrate the utility of the SLAG and the nose-only chamber for aerosol challenge of rodents by Y. pestis.

Host stress and immune responses during aerosol challenge of Brown Norway rats with Yersinia pestis.

Mod&egrave;les d&#39;exposition par inhalation sont de plus la m&eacute;thode privil&eacute;gi&eacute;e pour l&#39;&eacute;tude comparative des maladies respiratoires infectieuses en raison de leur ressemblance avec la voie naturelle de l&#39;infection. Pour activer la livraison pr&eacute;cise de l&#39;agent pathog&egrave;ne pour les voies respiratoires inf&eacute;rieures d&#39;une mani&egrave;re qui impose le risque minime de bios&eacute;curit&eacute;, ont &eacute;labor&eacute; des syst&egrave;mes d&#39;exposition nez seulement. D&eacute;but technologie d&#39;exposition par inhalation pour la recherche sur les maladies infectieuses issu de la technologie utilis&eacute;e dans la recherche sur l&#39;asthme o&ugrave; principalement le n&eacute;buliseur Collison sert &agrave; g&eacute;n&eacute;rer un a&eacute;rosol en battant un &eacute;chantillon liquide contre le verre. Bien que les gouttelettes infectieuses a&eacute;rosol de 1 &agrave; 5 &mu;m de taille peuvent &ecirc;tre g&eacute;n&eacute;r&eacute;es, la Collison provoque souvent perte de viabilit&eacute;. Dans ce travail, nous &eacute;valuer une m&eacute;thode plus douce pour l&#39;a&eacute;rosolisation des cellules vivantes et d&eacute;crivent l&#39;utilisation de la g&eacute;n&eacute;ratrice barbotage d&#39;a&eacute;rosol liquide (scories) dans un mod&egrave;le de peste pulmonaire chez le rat. Le laitier cr&eacute;e des a&eacute;rosols en continu d&eacute;goulinant de liquide &eacute;chantillon sur un disque de m&eacute;tal poreux. Nous montrons &agrave; la g&eacute;n&eacute;ration de 0,5 &agrave; 1 &mu;m Yersinia pestis a&eacute;rosols particules &agrave; l&#39;aide de la scorie avec facteurs de pulv&eacute;risation en g&eacute;n&eacute;ral allant de 10(-7) &agrave; 10(-8) sans perte d&eacute;celable de la viabilit&eacute; bact&eacute;rienne. Livraison de ces particules infectieuses par l&#39;exposition nez seulement conduit &agrave; l&#39;&eacute;volution rapide de la peste pulmonaire mortelle. De plus, nous avons &eacute;valu&eacute; l&#39;effet de retenue-stress impos&eacute; par la chambre d&#39;exposition nez seulement sur les premi&egrave;res r&eacute;ponses inflammatoires et des d&eacute;p&ocirc;ts bact&eacute;riens. Corticost&eacute;rone s&eacute;rique qui a atteint un sommet apr&egrave;s l&#39;intervention 2 h indique le stress exp&eacute;riment&eacute;s animaux &agrave; la suite de retenue dans la chambre de nez seulement. Cependant, nous avons n&#39;observ&eacute; aucune corr&eacute;lation entre la corticost&eacute;rone &eacute;lev&eacute;e et le montant des d&eacute;p&ocirc;ts bact&eacute;riens ou inflammation dans les poumons. Ensemble, ces donn&eacute;es d&eacute;montrent l&#39;utilit&eacute; de la scorie et de la chambre de nez seulement pour d&eacute;fi d&#39;a&eacute;rosol de rongeurs par Y. pestis.

Stress de l&#39;h&ocirc;te et les r&eacute;ponses immunitaires au cours du d&eacute;fi des a&eacute;rosols de surmulots Brown avec Yersinia pestis.

Modelli di esposizione inalazione stanno diventando il metodo preferito per lo studio comparato delle malattie infettive respiratorie a causa della loro somiglianza con la via naturale d&#39;infezione. Per attivare la consegna precisa dell&#39;agente patogeno al tratto respiratorio inferiore in un modo che impone la biosicurezza minimo rischio, sono stati sviluppati sistemi di esposizione solo naso. Primi tecnologia di esposizione di inalazione per la ricerca di malattie infettive &egrave; cresciuto fuori tecnologia utilizzata nella ricerca di asma dove il nebulizzatore Collison &egrave; usato principalmente per generare un aerosol battendo un campione liquido contro il vetro. Anche se le goccioline di aerosol infettivi di 1-5 &mu;m di dimensione possono essere generate, il Collison provoca spesso perdita di vitalit&agrave;. In questo lavoro, abbiamo valutare un metodo pi&ugrave; dolce per aerosolization di cellule viventi e descrivono l&#39;uso del gorgogliamento Aerosol generatore (SCORIA liquida) in un modello di ratto peste polmonare. La SCORIA crea aerosol dal continuo stillicidio di campione liquido su un disco di metallo poroso. Vi mostriamo la generazione di 0,5-1 &mu;m Yersinia pestis aerosol particelle usando le scorie con fattori spray in genere che vanno da 10(-7) a 10(-8) senza perdita rilevabile di redditivit&agrave; batterica. Consegna di queste particelle infettive tramite esposizione solo naso port&ograve; al rapido sviluppo della peste polmonare letale. Inoltre, abbiamo valutato l&#39;effetto di moderazione-stress imposto dalla camera solo naso esposizione sulle prime risposte infiammatorie e deposizione batterica. Corticosterone sierici elevati che raggiunse dopo 2 h indicato lo stress sperimentato gli animali a seguito di moderazione nella camera solo naso. Tuttavia, abbiamo non osservato alcuna correlazione tra elevati corticosterone e la quantit&agrave; di deposizione batterica o infiammazione dei polmoni. Insieme questi dati dimostrano l&#39;utilit&agrave; delle scorie e la camera solo naso per la sfida di aerosol di roditori di Y. pestis.

Susan T. Gater

Laboratory for Infectious Disease Research

University of Missouri-Columbia

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Susan T. Gater

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University of Missouri-Columbia

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Laboratory for Infectious Disease Research