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Dans cet article

  • Résumé
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  • Introduction
  • Protocole
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  • Discussion
  • Déclarations de divulgation
  • Remerciements
  • matériels
  • Références
  • Réimpressions et Autorisations

Résumé

Ici, nous démontrons comment axée sur l’agarose imitant le tissu optiques fantômes sont faits et comment leurs propriétés optiques sont déterminées à l’aide d’un système optique conventionnel avec une sphère d’Ulbricht.

Résumé

Ce protocole décrit comment faire basé sur agarose tissus imitant fantômes et explique comment déterminer leurs propriétés optiques en utilisant un système optique conventionnel avec une sphère d’Ulbricht. Systèmes de mesure pour l’acquisition de la réflectance diffuse et les spectres de transmittance total sont construits avec une source de lumière blanche à large bande, un guide de lumière, une lentille achromatique, une sphère d’Ulbricht, un porte-échantillon, une sonde de fibre optique et un spectromètre à canaux multiples. Un moule acrylique composé de deux pièces acryliques rectangulaires et une pièce acrylique en forme de U est construit pour créer un fantôme épidermique et un fantôme cutané avec sang. L’application d’une solution de (Na2S2O4) le dithionite de sodium à la phantom cutanée permet au chercheur de désoxygéner hémoglobine dans les globules rouges distribués dans le fantôme par voie cutanée. L’inverse de simulation Monte Carlo avec les spectres de transmittance total mesurés par un spectromètre avec une sphère d’Ulbricht et réflexion diffuse est effectué afin de déterminer l’absorption coefficient spectre µun(λ) et le réduit le coefficient de diffusion du spectre µs' (λ) de chaque couche fantôme. Un fantôme à deux couches imitant la réflectance diffuse du tissu de la peau humaine est également démontré en entassant le fantôme épidermique sur le fantôme par voie cutanée.

Introduction

Optiques fantômes sont des objets imitant les propriétés optiques des tissus biologiques et ont été largement utilisées dans le domaine de l’optique biomédicale. Ils sont conçus afin que les propriétés optiques, tels que la diffusion de la lumière et des coefficients d’absorption, correspondent à celles des tissus humains et animaux vivants. Les fantômes optiques sont généralement utilisés pour les fins suivantes : simulant le transport léger dans les tissus biologiques, calibrer un design nouveau système optique, évaluer la qualité et la performance des systèmes existants, en comparant la performance entre les systèmes et en validant la capacité des méthodes optiques de quantifier les propriétés optiques1,2,3,4,5. Par conséquent, les substances facile à obtenir, un procédé de fabrication simple, une grande reproductibilité et une stabilité optique sont requis pour la fabrication des fantômes optiques.

Différents types de fantômes optiques avec différents matériaux de base comme la suspension aqueuse6, gélatine gel7, agarose gel8,9,10, gel de polyacrylamide11, résine12, 13,14,15,16et chambre-température-vulcanisation silicone17 ont été rapportés dans la littérature antérieure. Il a été rapporté que les gels à base de gélatine et de l’alginate sont utiles pour des fantômes optiques avec des structures hétérogènes18. Phantoms de l’alginate ont une stabilité mécanique et thermique approprié d’évaluation des effets tels que les études d’ablation au laser et par laser hyperthermie études18photothermique. Des gels d’agarose ont la capacité de fabriquer des structures hétérogènes, et leurs propriétés mécaniques et physiques sont stables pendant une longue période18. Des gels d’agarose de haute pureté ont une très faible turbidité et une faible absorption optique. Donc, les propriétés optiques des fantômes basé sur gel d’agarose pourraient facilement être conçues avec la lumière appropriée de diffusion et d’absorber des agents. Récemment, styrène-éthylène-butylène (SEBS), copolymères bloc19 et polychlorure de vinyle (PVC) gels20 ont été signalés comme matériaux fantômes intéressants pour les optiques et techniques photoacoustiques.

Polymère microsphères7,12,21,22, oxyde de titane en poudre1et lipides émulsions23,24,25,26 comme le lait et les lipides émulsion sont utilisés comme agents de dispersion de la lumière, tandis que d’encre noire27,28 et colorants moléculaire29,30 sont utilisés comme amortisseurs de la lumière. Diffuser les spectres de réflectance de vivre la plupart organes sont dominées par l’absorption de l’hémoglobine oxygénée et désoxygéné dans les globules rouges. Donc, l’hémoglobine solutions31,32 et sang total8,9,10,33,36 sont souvent utilisés comme absorbeurs de lumière dans la fantômes de spectroscopie de réflectance diffuse et imagerie multispectrale.

La méthode décrite dans cet article est utilisée pour créer un fantôme optique imitant le transport léger dans les tissus biologiques et de caractériser ses propriétés optiques. À titre d’exemple, un deux couches optiques fantôme imitant propriétés optiques des tissus de la peau humaine est démontrée. Les avantages de cette méthode par des techniques alternatives sont la capacité de représenter les spectres de réflectance diffuse dans des tissus biologiques vivants dans le visible à la longueur d’onde du proche infrarouge, ainsi que la simplicité de le rendre, à l’aide de facilement disponible matériaux et instruments d’optique conventionnelles. Par conséquent, les fantômes optiques effectués par cette méthode sera utiles pour le développement de méthodes optiques basée sur la spectroscopie de réflectance diffuse et imagerie multispectrale.

Protocole

1. construction d’un système de réflectance et facteur de transmission totale spectroscopique classique diffus

Remarque : Construire les ensembles de mesurage de la réflectance diffuse et spectres de transmittance total à l’aide d’une source de lumière blanche à large bande, un guide de lumière, une lentille achromatique, une sphère d’Ulbricht, un porte-échantillon, une fibre optique et un spectromètre à canaux multiples. Le rôle du piège à lumière doit supprimer le composant de réflexion spéculaire du spectre de réflectance. Le porte-échantillon de la sphère d’intégration se compose d’une plaque de montage et une queue d’aronde et le bloc d’attache à ressort qui maintient l’échantillon contre le port. La queue d’aronde et l’assemblage de la pince à ressort sont retirés le porte-échantillon et un piédestal cubique fabriqués à la main en mousse de polystyrène est fixé à la plaque de montage au lieu de cela. Les schémas des composants optiques, illustrés à la Figure 1bis et 1 b, peuvent être désignés pour la procédure de construction pour les mesures de réflectance diffuse et les mesures de facteur de transmission totale, respectivement.

  1. Connectez le spectromètre et un ordinateur personnel en utilisant le câble de bus série universel (USB) fourni.
  2. Fixer l’adaptateur à un port de détecteur de la sphère d’intégration. Connectez le spectromètre et l’adaptateur de port de la sphère d’intégration à l’aide d’une fibre optique. Connectez la source lumineuse 150 W halogène lampe et le guide de lumière.
  3. Visser le support de l’échantillon sur un port de l’échantillon de la sphère d’intégration. Fixer le piège lumineux à un port approprié de la sphère d’intégration lors de l’exécution des mesures de réflectance diffuse. Allumez la source de lumière de lampe halogène pour éclairer un échantillon via le guide de lumière et de la lentille achromatique.
  4. Ouvrez le logiciel d’exploitation du spectromètre.

2. Elaboration d’un moule acrylique

Remarque : Un moule acrylique qui se compose de deux pièces acryliques rectangulaires et une pièce acrylique en forme de U est construit pour créer un fantôme de gel monocouche. Figure 2 peuvent être désignés pour cette procédure de construction.

  1. Découpez les deux pièces rectangulaires acryliques d’une plaque acrylique de 2 mm d’épaisseur à une taille facultative.
  2. Découper une pièce acrylique d’une plaque acrylique épaisseur de 1 mm à une taille facultative. Couper la pièce acrylique épaisseur de 1 mm pour qu’il devienne une pièce en forme de U à être utilisé pour le moule pour faire 1 mm épaisseur épidermiques fantômes.
  3. Découper une pièce acrylique d’une épaisseur de 5 mm plaque d’acrylique à une taille facultative. Couper la pièce acrylique épaisseur de 5 mm pour qu’il devienne une pièce en forme de U à être utilisé comme un moule pour faire 5 mm épaisseur cutanées fantômes.
  4. Enlever toutes les bavures sur chaque morceau acrylique à l’aide d’une lime en métal.
  5. Faire le moule fantôme épidermique en tenant la pièce en U de 1 mm d’épaisseur avec les deux pièces acryliques de 2 mm d’épaisseur et en fixant à cinq foldback clips.
  6. Faire le moule fantôme par voie cutanée en tenant la pièce en forme de U épaisseur de 5 mm avec les deux pièces acryliques de 2 mm d’épaisseur et en fixant à cinq foldback clips.

3. préparation du matériau de Base

  1. Mettre 500 mL d’une solution saline standard avec 0,9 % (p/v) NaCl dans une gousse. Lentement, ajouter 5 g de poudre d’agarose en remuant le mélange pour éviter les grumeaux.
  2. Faire chauffer le mélange de poudre d’agarose et une solution saline par un radiateur électrique de cuisson avec un réglage de puissance 1 000 W pendant 5 min.
  3. Une fois que le mélange bout, maintenir le mélange à feu doux pendant 3 min.
  4. Laisser refroidir le mélange à une température d’environ 70 ° C. Puis versez le mélange dans un récipient et gardez-le dans un Bain thermostaté à 60 ° C pendant 30 min avant de faire un fantôme.

4. préparation de la peau-imitant les fantômes optiques

Remarque : Une solution café est utilisée pour imiter le spectre d’absorption de la mélanine. La solution de café contient un pigment brun appelé mélanoidine. Le spectre d’absorption de mélanoidine a été signalé à être similaire à celle de la mélanine10.

  1. Préparer un fantôme épidermique
    1. Versez 100 mL d’eau pure dans le réservoir de la cafetière. Placez un filtre dans le panier de la cafetière. Ajouter 24 g de café moulu dans le filtre. Mettre en marche la machine à café, puis appuyez sur le bouton d’infusion infusion.
    2. Mettre 4 mL de café infusé et 16 mL de solution saline dans un flacon de verre pour faire une solution de café.
    3. Mettre 5 mL d’émulsion lipidique (p. ex., Intralipide 10 %) et 10 mL de la solution de café dans un gobelet en plastique transparent. Lentement, ajouter 35 mL de matériau de base à ce mélange tout en remuant.
    4. Aspirer le mélange dans une seringue et injecter lentement dans le moule épidermique fantôme tout en évitant toute formation de bulles. Laisser refroidir le moule acrylique contenant le mélange à 5 ° C pendant 20 min.
    5. Retirer les clips foldback du moule. Glisser une des pièces acryliques vers l’extérieur et le retirer du moule. Prendre le gel solidifié de 1 mm d’épaisseur fantôme hors du moule et coupez à la taille désirée à l’aide d’un bistouri.
    6. Placez et maintenez le fantôme de gel entre les verres de deux diapositives.
  2. Préparer un fantôme cutané contenant du sang oxygéné
    1. Prenez 5,0 mL d’émulsion lipidique et 0,4 mL de sang entier équine avec 45 %-hématocrite et mettre dans un gobelet en plastique transparent. Ajouter lentement 44,6 mL du matériau de base en remuant le mélange.
    2. Aspirer le mélange dans une seringue et injecter lentement dans le moule fantôme cutané tout en évitant toute formation de bulles. Laisser refroidir le moule acrylique contenant le mélange à 5 ° C pendant 20 min.
    3. Retirer les clips foldback du moule. Glisser une des pièces acryliques vers l’extérieur et le retirer du moule. Prenez le gel solidifié épaisseur de 5 mm fantôme hors du moule et coupez à la taille désirée à l’aide d’un bistouri.
    4. Placez et maintenez le fantôme de gel entre les verres de deux diapositives.
  3. Préparer un fantôme cutané contenant le sang désoxygéné
    1. Mettre un gel dermique fantôme contenant du sang oxygéné (de l’étape 4.2.3) sur un plat en verre.
    2. Dissoudre 1 g de dithionite de sodium (Na2S2O4) dans 20 mL d’une solution saline dans un flacon de verre.
    3. Ajouter 0,05 g/mL de la solution Na2S2O4 sur le fantôme à l’aide d’une seringue à désoxygéner le sang dans le fantôme.
    4. Placez et maintenez le fantôme entre les verres de deux diapositives pour éviter qu’il sèche.
  4. Préparer un fantôme de deux couches
    1. Baisse de 0,1 mL de sérum physiologique sur un fantôme dermique pour assurer un couplage optique entre les couches épidermiques et dermiques. Placez le fantôme épidermique sur le fantôme par voie cutanée.
    2. Si les bulles d’air sont présentes entre les couches, les pousser dehors en caressant la surface de la phantom deux couches avec un doigt.
    3. Tenez le fantôme de deux couches entre deux verres de diapositive pour éviter qu’il sèche.

5. acquisition des spectres de réflectance Diffuse

  1. Acquisition de spectres sombres
    Remarque : Le capteur de dispositif à couplage de charge (CCD) dans le spectromètre peut estimer l’intensité lumineuse basée sur un signal électrique généré en réponse à la lumière incidente. Cependant, il y a bruit sombre37 qui est indépendante des signaux générés par des photons mais est dépendante de la température de l’appareil, même si le détecteur ne détecte pas la lumière. Pour mesurer avec précision l’intensité spectrale de la lumière, le signal de courant sombre devrait être mesuré en un spectre foncé et ensuite soustraites du spectre de l’échantillon. Le spectre foncé est un spectre pris avec le trajet optique bloqué.
    1. Positionnez la sphère d’intégration à une position optimale pour les mesures de réflectance diffuse (Figure 1 a).
    2. Éteindre la source lumineuse de la lampe halogène. Bloquer le parcours lumineux vers le spectromètre à l’aide d’un bouchon de l’orifice ou une plaque de blindage.
    3. Sélectionnez la commande stocker sombre dans le menu fichier pour enregistrer un spectre noir.
    4. Sélectionnez la commande soustraction spectre foncé dans le menu fichier pour soustraire le sombre spectre du spectre de l’échantillon mesuré (voir ci-dessous).
  2. Acquisition des spectres de référence
    Remarque : Les propriétés optiques des composants utilisés dans cette expérience, comme la source de lumière, guide de lumière, lentille achromatique, fibre optique et spectromètre, ont leurs propre longueur d’onde-dépendances. Par conséquent, l’intensité spectrale de la lumière transmise par le biais de ces composants optiques devrait être mesurée comme un spectre de référence. Pour la mesure d’un spectre de réflectance diffuse, le spectre de référence est un spectre avec un diffuseur blanc standard, éclairé par la lumière de la source lumineuse.
    1. Allumez la source lumineuse de la lampe halogène en appuyant sur le bouton d’alimentation. Échauffement de la lampe pendant au moins 10 min avant d’acquérir un spectre de référence.
    2. Placez un diffuseur blanc standard (p. ex., Spectralon) à l’emplacement de l’échantillon de la sphère d’intégration.
    3. Régler le temps d’intégration du spectromètre en sélectionnant la valeur appropriée dans la liste déroulante dans le logiciel d’exploitation de spectromètre afin que l’intensité de signal de crête est d’environ 75 % de l’intensité du spectromètre maximale.
    4. Sélectionnez la commande enregistrer la référence dans le menu fichier pour enregistrer un spectre de référence.
  3. Acquisition de spectres de l’échantillon
    Remarque : Un spectre du facteur de réflexion diffuse de l’échantillon est acquis et sauvegardé sur le disque dur d’un ordinateur personnel en utilisant les mêmes conditions d’acquisition.
    1. Placez le fantôme épidermique en sandwich par les verres de deux diapositives dans le port de l’échantillon. Sélectionnez la commande Enregistrer dans le menu fichier pour enregistrer un spectre de réflectance diffuse dans un fichier.
    2. Répétez les fantômes étape 5.3.1 pour la voie cutanée et deux couches.

6. l’acquisition du spectre Total Transmittance

  1. Acquisition de spectres sombres
    Remarque : Le capteur dans le spectromètre peut estimer l’intensité lumineuse basée sur un signal électrique généré en réponse à la lumière incidente. Cependant, il y a bruit sombre qui est indépendante des signaux générés par des photons mais est dépendante de la température de l’appareil, même si le détecteur ne détecte pas la lumière. Pour mesurer avec précision l’intensité spectrale de la lumière, le signal de courant sombre devrait être mesuré en un spectre foncé et ensuite soustraites du spectre de l’échantillon. Le spectre foncé est un spectre pris avec le trajet optique bloqué.
    1. Positionnez la sphère d’intégration à une position optimale pour les mesures de facteur de transmission totale (Figure 1 b).
    2. Retirer le piège à lumière du port de la sphère d’intégration et fixer un bouchon de l’orifice au port.
    3. Éteindre la source lumineuse de la lampe halogène. Bloquer le parcours lumineux vers la sphère d’intégration à l’aide d’un bouchon de l’orifice ou plaque de blindage.
    4. Sélectionnez la commande stocker sombre dans le menu fichier pour enregistrer un spectre noir.
    5. Sélectionnez la commande soustraction spectre foncé dans le menu fichier pour soustraire le sombre spectre du spectre de l’échantillon mesuré (voir ci-dessous).
  2. Acquisition des spectres de référence
    Remarque : Les propriétés optiques des composants utilisés dans cette expérience, comme la source de lumière, guide de lumière, lentille achromatique, fibre optique et spectromètre, ont leurs propre longueur d’onde-dépendances. Par conséquent, l’intensité spectrale de la lumière transmise par le biais de ces composants doit être mesurée comme un spectre de référence. Pour la mesure du spectre total transmittance, le spectre de référence est un spectre franchie avec la lumière de la source lumineuse est entrant directement dans la sphère d’intégration via le port de l’échantillon.
    1. Allumez la source lumineuse de la lampe halogène en appuyant sur le bouton d’alimentation. Échauffement de la lampe pendant au moins 10 min avant d’acquérir un spectre de référence.
    2. Régler le temps d’intégration du spectromètre en sélectionnant la valeur appropriée dans la liste déroulante des temps d’intégration dans le logiciel de fonctionnement du spectromètre jusqu'à ce que la plus grande intensité lumineuse indique un signal qui est d’environ 75 % du maximum valeurs.
    3. Sélectionnez la commande enregistrer la référence dans le menu fichier pour enregistrer un spectre de référence.
  3. Acquisition de spectres de l’échantillon
    Remarque : Le spectre du facteur total de transmission de l’échantillon est acquis et sauvegardé sur le disque dur d’un ordinateur personnel en utilisant les mêmes conditions d’acquisition.
    1. Placez le fantôme épidermique en sandwich par les verres de deux diapositives dans le port de l’échantillon. Sélectionnez la commande Enregistrer dans le menu fichier pour enregistrer un spectre de transmission totale dans un fichier.
    2. Répétez les fantômes étape 6.3.1 pour la voie cutanée et deux couches.

7. estimation de l’Absorption et les propriétés de dispersion de la lumière

Remarque : Un ensemble du spectre de réflectance diffuse et le spectre de transmission total est sauvegardé sur le disque dur d’un ordinateur personnel et analysé en mode hors connexion. Un inverse de simulation Monte-Carlo8,38,39,40 est ensuite effectué afin d’estimer l’absorption coefficient spectre µun(λ) et le coefficient de diffusion réduite spectre µs'(λ). Dans cet inverse simulation Monte Carlo, la diffusion estimée coefficient µs, sous l’hypothèse que l’anisotropie facteur g est 0, est considéré comme la dispersion réduit coefficient µs' . La réflectance tant les données de transmission sont utilisées pour une simulation unique exécutée. L’algorithme détaillé utilisé dans le présent protocole a été signalé dans le précédent littérature8,39. Nous avons estimé l’absorption coefficient spectre µun(λ) et la dispersion réduit coefficient spectre µs'(λ) d’une couche épidermique d’une série de la réflectance diffuse spectre et le spectre de transmission total provenant de la couche épidermique. De la même manière, nous avons estimé µun(λ) et µs'(λ) d’une couche cutanée d’un ensemble de l’éventail de réflectance diffuse et le spectre de transmission total obtenu par l’exposition cutanée couche.

  1. Ouvrir un fichier d’entrée pour la simulation de Monte Carlo.
  2. Renseignez les valeurs de la réflectance diffuse mesurée et le facteur de transmission totale à la gamme de longueur d’onde spécifique de 400 à 700 nm à 10 nm-intervalles dans le fichier de données d’entrée. Renseignez la valeur de l’épaisseur de fantôme dans le fichier de données d’entrée.
  3. La valeur de l’indice de réfraction n d’un calque pour être une valeur appropriée dans le fichier de données d’entrée (par exemple, n = 1,33 à 550 nm). La valeur de l’anisotropie facteur g à 0 dans le fichier de données d’entrée.
  4. Définissez les valeurs initiales de l’absorption coefficient µun et la diffusion coefficient µs comme les valeurs appropriées dans le fichier de données d’entrée (p. ex., µa = 0,01, µs = 0,1 ).
  5. Exécutez le programme de simulation de Monte Carlo inverse.
  6. Tapez le nom du fichier d’entrée, puis exécuter la simulation.
  7. Ouvrir le fichier de sortie et les valeurs finales de µa et µs après que la simulation itérative est terminée.
  8. Répétez les étapes 7.1 à 7.7 pour autres longueurs d’onde désirées.

Résultats

La figure 3 montre les spectres représentatifs estimations du coefficient de diffusion réduite et le coefficient d’absorption pour le fantôme épidermique et dermique fantôme. Les résultats présentés à la Figure 3 sont les moyennes des dix mesures de spectres de réflectance et de transmission. La dispersion réduit coefficient µs' a un spectre de diffusion large, présentant une magnitude ...

Discussion

L’étape la plus critique dans le présent protocole est le contrôle de la température du matériau de base. La température à maintenir le matériau de base varie entre 58 et 60 ° C. Si la température est supérieure à 70 ° C, une dénaturation de l’émulsion lipidique et le sang se produit. Par conséquent, les propriétés optiques du fantôme seront détériorera. Si la température est inférieure à 40 ° C, le matériau de base va être ununiformly gélifié et, ainsi, les agents de diffusion et d’abs...

Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Partie de ce travail a été soutenu par une subvention pour Scientific Research (C) de la société japonaise pour la Promotion de la Science (25350520, 22500401, 15 K 06105) et l’US-ARMY ITC-PAC projet de recherche et développement (FA5209-15-P-0175, FA5209-16-P-0132).

matériels

NameCompanyCatalog NumberComments
150-W halogen-lamp light sourceHayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, JapanLA-150SAE
Light guideHayashi Watch Works Co., Ltd, Tokyo, JapanLGC1-5L1000
Integrating SphereLabsphere Incorporated, North Sutton, NH, USART-060-SF
Port adapterLabsphere Incorporated, North Sutton, NH, USAPA-050-SMA-SF
Light trapLabsphere Incorporated, North Sutton, NH, USALTRP-100-C
Spectralon white standard with 99% diffuse reflectanceLabsphere Incorporated, North Sutton, NH, USASRS-99-020
Optical fiberOcean Optics Inc., Dunedin, Florida, USAP400-2-VIS-NIR
Miniature Fiber Optic SpectrometerOcean Optics Inc., Dunedin, Florida, USAUSB2000
Achromatic lensChuo Precision Industrial Co.,Ltd, Tokyo, JapanACL-50-75M
IntralipidFresenius Kabi AB, Uppsala, SwedenIntralipid 10%
Coffee
(Blendy Mocha Blend Regular Coffee)
Ajinomoto AGF, Inc. Tokyo, JapanUnavailable
Whole bloodNippon Bio-Test Laboratories Inc. Saitama, Japan0103-2
AgaroseNippon Genetics Co., Ltd, Tokyo, JapanNE-AG02
Cooking heaterTOSHIBA CORPORATION Tokyo, JapanHP-103K

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