Analyse immunoblot

Résumé

Immunoblot (western blot) est un test rapide et sensible pour la détection et la caractérisation des protéines qui fonctionne en exploitant la spécificité inhérente à la reconnaissance antigène-anticorps. Cette vidéo fournit des protocoles de séparation des protéines, des protéines sur des membranes de blotting, immunoprobing, et la visualisation en utilisant des substrats chromogènes ou chimioluminescence.

Résumé

Immunoblot (western blot) est un test rapide et sensible pour la détection et la caractérisation des protéines qui fonctionne en exploitant la spécificité inhérente à la reconnaissance antigène-anticorps. Elle implique la solubilisation et la séparation électrophorétique des protéines, des glycoprotéines, ou lipopolysaccharides par électrophorèse sur gel, suivie d'un transfert quantitative et irréversible se liant à la nitrocellulose, le PVDF, ou en nylon. La technique immunoblot a été utile dans l'identification d'antigènes spécifiques reconnus par des anticorps polyclonaux ou monoclonaux et est très sensible (1 ng d'antigène peut être détecté). Cette unité fournit des protocoles de séparation des protéines, des protéines sur des membranes de blotting, immunoprobing, et la visualisation en utilisant des substrats chromogènes ou chimioluminescence.

Protocole

Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en Current Protocols in Molecular Biology