1. préparation des échantillons du sol

1. Tout d’abord, déterminer la teneur en eau initiale du sol par une nuit de séchage d’une quantité connue de la terre humide, réexaminant et le sol sec. L’équation pour déterminer la teneur en eau initiale du sol est :
   
   (Équation 1)
   où :
   MC = teneur en eau
   W = poids net
   D = poids sec
2. Calculer la quantité d’eau qui doit être ajoutée à 25 g de sol pour augmenter la teneur en humidité du sol à 10 % sur la base du poids sec.
3. Ensuite, ajoutez la quantité d’eau à 25 g du sol.
4. Couvrir le récipient d’une pellicule plastique et percer le film plusieurs fois avec une sonde pour permettre l’aération pendant l’incubation. Fixez le film avec une bande élastique.
5. Peser le sol, puis envelopper Incuber l’échantillon à la température ambiante pendant une semaine.

2. l’incubation et l’Inoculation champignon

1. Après que l’incubation est terminée, peser l’échantillon de sol avec l’enveloppe et la bande de caoutchouc. Calculer la perte de poids en raison de la perte d’humidité.
2. Calculer la teneur en humidité du sol nouveau.
3. Ensuite, préparer une série de dilution au 1/10 des sols tel qu’illustré à la Figure 2. Cela se traduira par des dilutions de 10^-1 (bouteille à), 10^-2 (tube B), 10^-3 (tube C), 10^-4 (tube D) et 10^-5 (tube E) g de sol par des suspensions de mL.
4. Préparer stérile Rose Bengale-streptomycine géloses. Le Rose Bengale et streptomycine inhibent la croissance bactérienne. Pour les sols très fertiles où les populations microbiennes du sol sont élevées, les dilutions choisies devraient être plus élevées, c'est-à-dire, 10^-3, 10^-4et 10^-5, g de sol par plaque.
5. À chacun de la 10^-3 assiettes, ajouter 0,1 mL de la dilution tube 10^-2, et réparties sur la surface de la gélose à l’aide d’une flamme ethanol stérilisé épandeur de verre. Parce qu’une quantité de 0,1 mL est plaquée, ce qui rend l' efficace dilution 10^-3. Répétez ces étapes pour toutes les dilutions.
6. Incuber les plaques à température ambiante pendant une semaine.

3. colonie comptant et l’examen par microscopie

1. Faire des comptages de colonies à un seul et même dilution de chaque sol. Les plaques qui sont comptées devraient avoir des colonies dénombrables discrets. Recouvert de plaques ne devraient pas être comptées. De même, les plaques avec moins de 10 colonies ne devraient pas être comptées. Notez et décrire les caractéristiques culturelles de trois différentes colonies.
2. Préparer pression ruban (ruban transparent) bâtis sur des lames de microscope détaillée étude utilisant la procédure suivante :
   1. Déposer une goutte de lactophénol montage fluide au centre d’une lame de verre propre
   2. Coupez une bande de ruban de cellophane clair environ 3 cm de long du rouleau de stock. Pour éviter de contaminer la surface adhésive, utiliser la pince lors de la manipulation de la bande. Une aiguille dissection aidera à libérer le ruban de la pince.
   3. Le côté adhésif du ruban adhésif est appliqué à la surface d’une colonie de champignon sporulant. Prendre soin d’éviter une pression excessive sur la bande ou une masse trop dense d’hyphes et les spores seront recueillies.
   4. Retirez la bande de contact avec la colonie de champignon et appliquez-le, côté adhésif vers le bas, la goutte de liquide de montage sur la lame de verre. Frottez doucement la bande avec un instrument lisse et plat à bulles d’air express.
   5. Examiner le support de bande au microscope sous l’objectif à immersion d’huile avec de l’huile.
   6. Identifier les deux genres de champignons différents, à l’aide de la clé d’identification fongique fournis (Figure 4).

La figure 4. « « « « Clé d’identification fongique.