1. Preparazione del campione di terreno

1. In primo luogo, determinare il contenuto di umidità iniziale del terreno mediante essiccazione notturna di una quantità nota di terreno umido e ripesatura del terreno essiccato. L'equazione per determinare il contenuto di umidità iniziale del terreno è:
   
   (Equazione 1)
   dove:
   MC = contenuto di umidità
   W = peso netto
   D = peso a secco
2. Calcola la quantità di acqua che deve essere aggiunta a 25 g di terreno per aumentare il contenuto di umidità del suolo al 10% su una base di peso secco.
3. Quindi, aggiungi quella quantità di acqua a 25 g di terreno.
4. Coprire il contenitore con pellicola trasparente e forare il film più volte con una sonda per consentire l'aerazione durante l'incubazione. Fissare il film con un elastico.
5. Pesare il terreno e avvolgere, quindi incubare il campione a temperatura ambiente per una settimana.

2. Inoculazione e incubazione di funghi

1. Al termine dell'incubazione, pesare il campione di terreno con l'involucro e l'elastico. Calcola la perdita di peso dovuta alla perdita di umidità.
2. Calcola il nuovo contenuto di umidità del suolo.
3. Quindi, preparare una serie di diluizione 1/10 dei terreni come mostrato nella Figura 2. Ciò comporterà diluizioni di 10^-1 (bottiglia A), 10^-2 (tubo B), 10^-3 (tubo C), 10^-4 (tubo D) e 10^-5 (tubo E) g di terreno per mL di sospensioni.
4. Preparare piatti sterili di agar Rose Bengal-streptomycin. Sia il Rose Bengal che la streptomicina inibiscono la crescita batterica. Per terreni molto fertili dove le popolazioni microbiche del suolo sono elevate, le diluizioni scelte dovrebbero essere più alte, cioè10^-3,10^-4e 10^-5,g di terreno per piatto.
5. A ciascuna delle 10^-3 piastre, aggiungere 0,1 ml dal tubo di diluizione 10^-2e distribuire sulla superficie dell'agar utilizzando uno spandi vetro sterilizzato a fiamma di etanolo. Poiché una quantità di 0,1 ml è placcata, questo rende la diluizione effettiva 10^-3. Ripetere questi passaggi per tutte le diluizioni.
6. Incubare le piastre a temperatura ambiente per una settimana.

3. Conteggio delle colonie ed esame al microscopio

1. Fai in modo che le colonie contino a una e una sola diluizione di ciascun terreno. Le piastre che vengono contate dovrebbero avere colonie numerabili discrete. I piatti troppo cresciuti non dovrebbero essere contati. Allo stesso modo, le piastre con meno di 10 colonie non dovrebbero essere contate. Nota e descrivi le caratteristiche culturali di tre diverse colonie.
2. Preparare i supporti a nastro a pressione (nastro trasparente) su vetrini per lo studio dettagliato del microscopio utilizzando la seguente procedura:
   1. Depositare una goccia di liquido di montaggio lattofenolo al centro di un vetrino pulito
   2. Tagliare una striscia di nastro di cellophane trasparente lunga circa 3 cm dal rotolo di scorta. Per evitare di contaminare la superficie adesiva, utilizzare una pinetta durante la manipolazione del nastro. Un ago di dissezione aiuterà a liberare il nastro dalla pinzetta.
   3. Il lato adesivo del nastro viene applicato sulla superficie di una colonia di funghi sporulanti. Fare attenzione ad evitare una pressione eccessiva sul nastro o una massa troppo densa di ife e spore verrà raccolta.
   4. Rimuovere il nastro dal contatto con la colonia di funghi e applicarlo, lato adesivo verso il basso, alla goccia di fluido di montaggio sul vetrino. Strofinare delicatamente il nastro con uno strumento liscio e piatto per esprimere bolle d'aria.
   5. Esaminare il supporto del nastro microscopicamente sotto l'obiettivo di immersione dell'olio con olio.
   6. Identificare due diversi generi fungini utilizzando la chiave di identificazione fungina fornita (Figura 4).

Figura 4. Chiave di identificazione fungina.