Soins de base

Source : Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR ; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Université de Notre Dame, Indiana

Souris et les rats représentent plus de 90 % des animaux utilisés en recherche biomédicale. Le bon entretien de ces animaux de recherche est essentielle à l’issue des expériences. Il existe des procédures générales qui s’appliquent à la majorité de ces souris et les rats, mais certains animaux, tels que les personnes immunodéprimées, exigent des mesures supplémentaires à prendre pour assurer leur subsistance pour l’expérimentation.

Souris immunodéprimées couramment utilisés comprennent ceux qui se sont produites naturellement chez les souris consanguines et ceux qui ont été créés par génie génétique. Les premières souris immunodéprimées utilisés en recherche étaient des souris « nude ». La souris BALB/c Nude (nu) a été découvert en 1966, au sein d’une colonie de souris BALB/c qui produisait des souris dépourvues de cheveux et un thymus. Ces souris athymiques ont une inhibition du système immunitaire qui est dépourvue de cellules T. La valeur de cet animal a été rapidement découvert pour l’utilisation dans les études des infections microbiennes, déficits immunitaires et l’auto-immunité. Bien que pas aussi couramment utilisé comme la souris nude, il y a aussi un rat nu. Le rat nu est déficiente des lymphocytes T et montre la cellule appauvri les populations dans les régions de thymus dépendantes des organes lymphoïdes périphériques. Une autre souris déficiente immunitaire naturelle est la souris de déficit immunitaire combiné sévère (DICS). Ces souris ont un défaut qui altère la production de cellules B et T fonctionnelles. Avec l’incapacité de produire une réponse immunitaire, ces souris peuvent servir de récipiendaires host pour les greffes de cellules humaines. Plusieurs souches de souris génétiquement modifiées avec les déficits immunitaires sont disponibles dans le commerce. ¹ La gravité de la déficience varie en fonction de la modification génétique ; Cependant, tous les rats et les souris immunodéprimées sont traitées de la même façon.

Ce manuscrit décrira le soin des animaux immunocompétents tant immunodéprimés. Le logement, l’alimentation, des exigences environnementales et manutention seront discutés pour les deux groupes d’animaux.

Logement/mise en cage

Souris et les rats occupent principalement de type boîte à chaussures mise en cage avec un fond solid qui contient des matériaux d’assise. La cage de souris de type boîte à chaussures fournit 75 pouces carrés de surface au sol, qui est suffisant pour un maximum de cinq souris adultes. Toutefois, le protocole expérimental peut nécessiter des groupes de quatre souris. Dans ce cas, les souris doivent être logés après réception par groupes de quatre, pour éviter les perturbations des groupes sociaux, lorsque l’expérience commence. En général, mise en cage rat permet un maximum de deux animaux adultes entièrement cultivé. Si les rats doivent être logés à long terme, ils devraient constituer dans logement paire.

Les cages peuvent être statiques ou ventilés individuellement (IVC). Public statiques cages sont soit recouvert d’un couvercle de barre métallique ou sont installés sur un support sous une étagère qui est ensuite la partie supérieure de la cage. Matériau du filtre est ajouté sur le dessus de la cage un bonnet sur le couvercle de barre métallique, soit comme une feuille de papier filtre sur les étagères de la grille. IVC est mis en place comme une cage, couvercle barre métallique et bonnet qui sont placés sur une étagère qui fournit un flux d’air vers la cage. L’utilisation de IVCs élimine la nécessité de changer la cage car souvent comme statiques cages sont modifiés.

Systèmes de cages standard constituent une source d’eau et une zone pour la distribution de vivres. L’eau peut être fournie par une bouteille d’eau sur le dessus de la cage ou via un tube de siroter du qui est construit en composant de la cage de l’animale. Lorsque la cage est enclenchée sur un support de l’eau est transportée dans le tube de siroter pour un système d’arrosage automatique est conçu pour répondre aux besoins de l’animal tout au long de l’animalerie. Mise en cage doit être correctement préparé pour fournir des soins appropriés pour les animaux. Il y a deux mangeoires placés dans la cage de l’animale, ou une partie du couvercle barre métallique est utilisée pour le stockage de nourriture. Alimentaires doivent être placés de telle qu’il n’est pas souillé par les animaux.

Le Guide pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire² (le « Guide ») stipule que tous les outils de mise en cage doivent être assainis au moins toutes les 2 semaines. Quelques cages et accessoires devrez peut-être être changé plus souvent dicté par le niveau d’odeur et d’ammoniaque dans l’enceinte. En général, la VCI est prévues pour changer toutes les deux semaines, à moins qu’il y a quatre ou plusieurs mâles ou femelle avec une litière ; Ces clôtures peuvent impliquer le changement hebdomadaire. Comme le changement de cage est l’occasion pour les souris d’être exposés à des agents pathogènes, modification de la mise en cage pour souris présentant une déficience immunitaires devrait être fait que rarement possible.

Régime alimentaire

Il y a beaucoup de compositions de régimes disponibles avec des variations dans les teneurs en protéines, glucides et fat. En général, aliments du bétail devrait être composé de 15 à 19 % de protéines, 44 % de glucides et 4-9 % de matières grasses. Aliments ayant une teneur en matière grasse accrue est souvent utilisé pour les colonies de reproduction pour améliorer la reproduction. Comme la nourriture peut être une source de contamination pour les souris immunodéficientes, il doit être soit vapeur stérilisés ou irradiés. Nourriture qui est soumis au processus d’autoclavage doit être spécialement formulé pour supporter le processus. Toutefois, le processus d’irradiation ne modifie pas le contenu de la nourriture.

L’eau est une autre source potentielle de contamination pour les animaux déficients immunitaires. L’eau doit être traité par un autoclave ou la filtration qui inclut l’eau qui traverse un filtre UV. À la vapeur stériliser l’eau dans un autoclave, bouteilles d’eau sont recouvertes de papier d’aluminium. Couvercles de bouteille avec tubes sipper sont stérilisés séparément dans un sac d’autoclave. L’acidification de l’eau à un pH de 2,5-3 aide à contrôler les organismes bactériens de croissance dans les bouteilles d’eau. L’eau est acidifié par ajouter deux gouttes de 12 molaires (M) d’acide chlorhydrique (HCl) à huit litres d’eau renversée osmolalité (RO). Systèmes d’arrosage automatiques peuvent être utilisés avec une série de filtration dans tout le système qui inclut des filtres à particules et un filtre de lumière ultraviolet.

Environnement

Conditions environnementales au sein d’un établissement de soins pour animaux doivent être étroitement contrôlées. Lignes directrices et règlements fédéraux ont établi les normes pour les soins et manipulation de couramment utilisé des animaux. Débit d’air, température ambiante, humidité et éclairage sont fournis pour répondre aux besoins physiologiques des animaux. À l’exception de la nécessité d’une température ambiante légèrement accrue, les paramètres pour les animaux immunodéprimés sont les mêmes que ceux pour animaux conventionnels. Les animaux nude athymique nécessitent également une literie supplémentaire et déchiquetés matériaux de nidification type de papier dans leurs cages pour aider à la thermorégulation.

Chambres animaux devraient être maintenus à une température entre 68 et 72° F avec un taux d’humidité de 40-60 %. ² ringtail des souris et des rats, une affection qui provoque la peau de la queue à sec au point de lui constriction autour de la queue, qui peut conduire à la mue de la queue peuvent entraîner des taux d’humidité inférieur à 40 %. Cycles d’éclairage doit être définie afin d’éviter les facteurs de stress aux animaux causées par des photopériodes inappropriés ou intensité lumineuse. Normalement, les photopériodes sont 12 heures et 12 heures de repos. L’intensité de la lumière devrait varier selon l’activité dans la salle. Lorsque les techniciens travaillent dans la salle des animale, des niveaux plus élevés d’éclairage peuvent être utilisés. Toutefois, l’éclairage devrait être abaissé à environ 325 lux lorsque toute l’activité est terminée. ² les lumières devraient être sur les minuteries et les cycles vérifiées au moyen de systèmes de surveillance. Tel qu’indiqué par le Guide, chambres animaux doivent avoir un minimum de 10-15 changements d’air d’air frais 100 % par heure. ² renouvellements d’air diminuent les microbes et les odeurs dans la salle des animale. Dans les chambres animaux densément peuplées, le nombre de renouvellements d’air par heure devrez peut-être être augmentée.

Les facteurs environnementaux à l’échelle de la cage comprennent le type de mise en cage, le substrat utilisé dans la cage, le système de livraison de l’eau et l’alimentation. Le logement social est obligatoire sauf si scientifiquement justifiée, ou un animal n’est pas compatible avec tous les autres. Les dispositions de l’enrichissement environnemental, tels que les cabanes de papier et de matériaux de nidification, que les animaux puissent manifester des comportements propres à chaque espèce, qui à son tour diminue le niveau de stress et augmente le bien-être général des animaux. Matériaux de nidification fournissent également un coin couchage saturé en calmant les phéromones qui aide avec le logement chez des souris mâles multiples dans la même cage. L’aire de nidification est déplacé vers la cage propre à cage changer afin d’éviter l’agression chez les mâles, car ils sont introduits dans un nouvel environnement. ³

1. manipulation immunocompétents (conventionnels) souris

Il a été démontré que les désordres du système immunitaire des souris sont très semblables à ceux de l’homme. ² que ces animaux ont limité les capacités immunologiques, procédures pour la manipulation ou l’entretien de ces animaux ont été conçus pour minimiser les risques de maladies infectieuses grâce à l’utilisation de mesures d’ingénierie, des équipements de protection individuelle pour la le personnel de soins aux animaux et les modes opératoires normalisés ; Ces atténuent la contamination de la mise en cage et d’autres équipements avec lesquels les animaux sont en contact.

1. Déballage de conteneurs d’expédition : recevoir des animaux provenant d’autres institutions ou vendeurs animales présente un risque pour les animaux déjà logés dans l’animalerie. Pendant le transport, les boîtes de transport des animaux peuvent venir en contact avec des agents pathogènes. Par conséquent, la procédure appropriée doit être effectuée lors du déballage des conteneurs d’expédition.
   1. Exigences minimales en matière d’équipement de protection individuelle (EPI) sont des gants, blouse propre ou gommage, un masque de particules et lunettes de sécurité lors de la manipulation des animaux.
   2. Sélectionnez la cage appropriée, y compris le couvercle de barre métallique et le dessus de la barrière. La cage devrait être équipée de literie appropriée et de matériaux de nidification. Mise en cage tous les devrait être préparé et placé dans la zone de réception avant l’arrivée des animaux.
   3. À leur arrivée, les boîtes de transport sont placées dans un endroit sûr et chambre à température contrôlée. Puis, examinez le conteneur pour les dommages.
   4. Désinfecter les surfaces externes de l’emballage d’expédition avec un produit du dioxyde de choline pour détruire les pathogènes nuisibles. S’assurer que le désinfectant est en contact avec la zone conformément aux recommandations du fabricant, généralement de 15 à 30 minutes.
   5. Placer le récipient dans une Station de transfert Animal (ATS). L’ATS fournit HEPA filtre d’air dans le capot qui protège les allergènes en créant une barrière de vide d’air entre l’utilisateur et la zone de travail. Cela garantit une exposition minimale à cheveux/poils d’animaux et cage matériel de literie. L’air unidirectionnel protège également les animaux de l’air ambiant, minimisant les risques de contamination.
   6. Une fois l’emballage ouvert, évaluer la santé générale des animaux. Prenez note de tout animal blessé ou malade.
   7. Placez les animaux dans les cages assemblés dans la taille des groupes appropriés. Le groupement doit être conforme à la réglementation de l’espace et le protocole expérimental auquel ils vont être affectés.
   8. Couvrir la cage avec le couvercle de barre métallique. Fixer la cloison sur le couvercle de barre métallique pour créer deux zones sur le couvercle.
   9. Choisir les aliments appropriés et enfourner à un côté du couvercle barre métallique. Le second côté laisser ouverte permettant la meilleure circulation d’air.
   10. L’eau sera fourni par des bouteilles d’eau ou un système d’arrosage automatique. Bouteilles d’eau sont utilisés pour les souris nouvellement sevrés pour s’assurer qu’ils sont capables de maintenir leur niveau d’hydratation. IVC mise en cage avec arrosage automatique, appliquer le tube d’arrosage avant de placer sur la grille.
   11. Placer la cage sur une grille. Si vous utilisez IVCs, vérifiez que la cage est enclenchée sur le support, et que le tube sipper est sécurisé au système d’arrosage.
2. Cage de changer de souris classiques
   1. Cages d’animaux sont modifiées dans un ATS. L’ATS est désinfectée à la fin de chaque session.
   2. Qu’une seule cage peut être ouverts simultanément.
   3. Mise en cage préparée avec la literie appropriée et les matériaux de nidification est présentée dans l’animalerie. Un petit nombre de cages est placé dans l’ATS.
   4. Cages IVC avec tubes sipper interne doivent être imputées à forcer l’eau dans le sipper pour supprimer l’espace mort d’air dans le tube de siroter du. Si pas correctement chargée, les souris n’est peut-être pas en mesure de fournir suffisamment de pression sur le tube sipper pour enlever l’air de lui.
   5. Exigences minimales en matière d’équipement de protection individuelle (EPI) sont des gants, blouse propre ou gommage, un masque de particules et lunettes de sécurité lors de la manipulation des animaux.
   6. Une cage d’animaux à être changé est placée dans une nouvelle cage, puis à l’ATS.
   7. Animaux sont transférés soit à la main ou à l’aide d’une pince rembourrée. Gants sont soit changés entre cages ou entre groupes de souris. Gants peuvent également être désinfectées avec un non toxique chimique entre les cages.
   8. Il a été démontré que l’aire de nidification des souris lors du transfert vers une cage propre aide avec la transition vers la cage propre, surtout pour les hommes logés en groupe. Autres éléments d’enrichissement sont également transférés à la nouvelle cage.
   9. Une fois le haut de la cage ou le chargeur est placé dans la nouvelle cage, nourriture est ajouté.
   10. Le dessus de la barrière est placé sur la nouvelle cage et la cage est retournée à la crémaillère.
   11. Cages IVC doivent être correctement ancrés dans le rack pour s’assurer que les vannes d’air et d’eau sont engagés.

2. manipulation des souris immunodéprimées

1. Déballage de conteneurs d’expédition
   1. Animaux immunodéprimés doit être décompressé dans des conditions stériles. Toutes les personnes gérant des souris présentant une déficience immunitaires doivent porter une blouse stérilisé de vapeur, masque, bonnet de cheveux et des gants stériles. Asepsie doit être utilisé à tout moment remise lorsque ces animaux.
   2. Tout l’équipement et la mise en cage doit ont été stérilisée à la vapeur, rayonnement UV, ou chimiquement stérilisé avec un trempage dans l’éthanol à 70 % pendant au moins 30 minutes, il y a deux options pour la mise en cage stérile : standard mise en cage qui a été emballé et stérilisé à la vapeur ou mise en cage qui est stérilisé, habituellement par irradiation-par le vendeur. Ces cages sont une seule utilisation, unités jetables.
   3. Avant de manipuler la souris sous la hotte à flux laminaire, la hotte est pulvérisée avec l’éthanol à 70 % avec le ventilateur en fonctionnement. Le ventilateur de la hotte devrait rester à tout moment pour maintenir l’environnement stérile. Après chaque utilisation, la hotte est pulvérisée avec un désinfectant et effacée de tous les débris et à nouveau pulvérisée avec l’éthanol à 70 %.
   4. Idéalement, deux personnes sont nécessaires pour la bonne réception des souris immunodéficientes : un pour gérer les animaux à l’aide de techniques aseptiques (le technicien stérile) et l’autre qui gérera les objets contaminés (le technicien non stérile). La personne non stérile devrait toujours porter une robe propre, à manches longues ; blouse de laboratoire ou blouse ; masque ; capot ; et des gants stériles pour éviter la contamination de l’intérieur stérile s’ils ont besoin de puiser dans la hotte.
   5. Préparer une hotte à flux laminaire comme décrite précédemment. Il est préférable d’avoir une hotte dédiée aux animaux immunodéprimés. Il est recommandé que hotte être équipée avec des lumières ultraviolets (UV) stérilisation qui peuvent être utilisés pour stériliser l’intérieur de la hotte entre les utilisations. Une minuterie est utilisée pour s’assurer que la surface de la hotte a une exposition adéquate aux rayons UV.
   6. L’extérieur de toutes les fournitures qui sont placés dans la hotte sont pulvérisés avec de l’alcool 70 %, y compris l’emballage extérieur de nourriture, d’eau et mise en cage.
   7. Conteneurs d’expédition sont pulvérisés avec une solution de dioxyde de chlore avant d’être mis dans la hotte. Une fois placé dans le capot, ils doivent demeurer non ouverts pendant 15-30 minutes.
   8. Le dresseur désigné ouvre la nourriture stérile et eau sous le capot.
   9. Le technicien non stérile ouvre la boîte d’expédition sous le capot. Il faut par le technicien non stérile pour éviter le contact avec les surfaces internes du capot et de l’intérieur de la boîte d’expédition.
   10. Le dresseur ouvre la cage stérile et prépare la cage en plaçant les aliments et l’eau sur le dessus de la cage. Les souris sont ensuite retirés de la boîte d’expédition et placés dans la cage stérile.
   11. La condition animale est remarquée par le dresseur stérile. Tous les animaux qui semblent malades ou ont des blessures évidentes vont être séparés. Tous les carreaux marqués d’animaux ayant nécessité des soins vétérinaires seront placées pour manutention, cage changeante ou expérimentale manipulation dernière, afin de réduire la contamination potentielle des autres animaux.
   12. La personne non stérile supprimera la cage peuplée de la hotte. Cages peuvent être placés sur une grille standard comme les cages statiques, ou sur une grille aérée comme IVCs. Dans la VCI, il faudrait les souris avec des matériaux de nidification supplémentaires pour aider à la régulation thermique.
   13. Le dresseur doit changer de gants après chaque conteneur d’expédition pour éviter la contamination croisée possible de groupes d’animaux. Le numéro du conteneur maritime est enregistré sur la carte de la cage à retracer l’origine des animaux en cas de maladie.
   14. Fournitures non utilisés peuvent être enregistrés pour une utilisation future condition le récipient d’origine peut être refermé. Aliments inutilisés sont retirés de la salle.
   15. Souris doivent subir une période d’acclimatation de minimum une semaine avant l’utilisation expérimentale.
2. Cage à changer pour des souris immunodéprimées
   1. Les cages de souris sont changés au moins une fois par semaine, ou plus souvent si nécessaire.
   2. Étapes pour la préparation de la hotte, préparation de la cage et le personnel EPI sont les mêmes que pour le déballage des animaux.
   3. Animaux sont transférés soit à la main ou avec l’utilisation de forceps rembourré. Le dresseur désigné doit reglove après chaque cage de 5-10, si les gants sont déchirés ou contaminés, ou si un animal semble malade.
   4. Les cages avec animaux apparaissant malade seront placés à l’extrémité de la cage, changer l’ordre, pour éviter l’exposition possible des animaux sains à des agents pathogènes ou de contaminants.
   5. Si les aliments ou l’eau doit être ajoutée à la cage avant le prochain changement de cage régulier, il faut aseptiquement sous le capot préparé.

L’entretien et la manutention des animaux utilisés en recherche biomédicale est cruciale pour l’issue des expériences. Règlements et directives établies exigent beaucoup des pratiques utilisées. Toutefois, des mesures supplémentaires sont nécessaires pour les souris et les rats qui ont des déficiences immunitaires afin d’atténuer l’exposition accidentelle à des agents pathogènes opportunistes. Quand pratiques se conformer aux procédures établies, la santé et bien-être des animaux de laboratoire est renforcée et mieux expérimental a donné lieu sont atteints.