Commencez par isoler l’intestin grêle de l’animal euthanasié et transférez le tissu dans une boîte de Pétri. À l’aide de ciseaux de laboratoire et d’une pince à épiler, retirez les tissus adipeux de l’intestin grêle. Ensuite, coupez l’intestin grêle en plusieurs segments.
À l’aide d’une seringue de cinq millilitres, rincer l’intestin grêle avec cinq millilitres d’antibiotiques PBS froids pour éliminer le contenu luminal. Coupez le tissu ouvert dans le sens de la longueur à l’aide de ciseaux de laboratoire. Ensuite, lavez-le manuellement avec des antibiotiques PBS froids tout en secouant.
À l’aide de ciseaux de laboratoire, couper le segment intestinal en morceaux mesurant environ cinq millimètres sur cinq millimètres. Utilisez une pipette pour transférer les fragments collectés dans un tube de 50 millilitres. Ensuite, ajoutez 25 millilitres d’antibiotiques PBS froids au tube contenant les fragments de tissu et secouez le tube d’avant en arrière 10 fois pour laver le contenu intestinal des fragments de tissu.
Aspirer le tampon après le lavage. Les fragments de tissu sont maintenant prêts pour l’isolement de la crypte.
