Après avoir étudié l’imagerie des cellules Hep-3B traitées par le médicament, ouvrez les images confocales dans l’image J avec le plugin de colocalisation. Ouvrez le fichier ND dans le serveur J image et sélectionnez l’option fractionner les canaux dans la boîte de dialogue. Travaillez avec des images vertes et rouges.
Générez des doublons de ces images pour garder l’image originale intacte en cliquant sur l’image et en sélectionnant Dupliquer ou en utilisant le raccourci clavier shift plus D.To réduire l’arrière-plan, générer un autre doublon d’image, soustraire l’arrière-plan avec un rayon de roulement de 100 et sélectionnez l’option Créer un arrière-plan pour générer une image avec l’arrière-plan des images données. Ensuite, allez au processus. Cliquez sur la calculatrice d’images et soustrayez la première image dupliquée de la seconde image dupliquée.
Utilisez les images résultantes pour l’analyse de colocalisation. Pour utiliser le plugin de colocalisation, convertissez les images des canaux vert et rouge en 8 bits en cliquant sur image, en sélectionnant type, suivi de 8 bits. Ensuite, cliquez sur plugins et sélectionnez colocalisation.
Pour mesurer la colocalisation des mitochondries et des signaux lysosomes, définissez le rapport à 75%, le seuil du canal rouge à 80,0 et le seuil du canal vert à 50,0. Une image binaire 8 bits contenant des puncta colocalisés et combinant les trois images 8 bits dans une image RVB sera générée. Convertissez ces images en images 8 bits.
Pour obtenir la région d’intérêt des cellules, générez une image qui met en évidence la zone des cellules en sélectionnant l’image d’un point colocalisé. Pour sélectionner toute la zone de cellule, sélectionnez l’image de points colocalisés résultante et cliquez sur l’image, ajustez le seuil et définissez le seuil pour vous assurer que toute la zone de cellule est mise en surbrillance. Pour analyser la zone de la cellule, sélectionnez analyser, cliquez sur analyser les particules et mesurez toutes les particules de l’image de zéro à l’infini, le paramètre par défaut pour analyser les particules.
Pour analyser la zone des mitochondries et des lysosomes colocalisés, sélectionnez l’image 8 bits colocalisée. Ensuite, sélectionnez analyser. Cliquez sur analyser les particules et mesurez la somme des puncta entre 0,1625 micromètre carré et quatre micromètres carrés.
Divisez la surface des mitochondries et des lysosomes colocalisés par la surface cellulaire totale pour mesurer la puncta colocalisée. Les images confocales des cellules Hep-3B ont montré une colocalisation des mitochondries et des lysosomes. VL 850 et FCCP ont induit une mitophagie significative dans les cellules Hep-3B.
