Commencez par inoculer les souches de levure compétentes pour le contrôle et la recombinaison des plaques YPD dans cinq millilitres de milieu YPR, et faites croître la culture pendant la nuit à 30 degrés Celsius et 200 tr/min. Ensuite, mettez la culture à l’échelle en inoculant deux millilitres dans 100 millilitres de milieu YPR frais et en le cultivant pendant la nuit à 30 degrés Celsius et 200 tr/min. Pour chaque souche, verser 1 800 millilitres de levure d’autoclave Peptone moyenne et 200 millilitres de solution d’autoclave 20 % de raffinose dans deux erlenmeyers de 5 litres.
Inoculez chaque souche de levure avec une densité optique de 0,2 à 600 nanomètres dans le milieu respectif et incubez pendant environ six heures à 200 tr/min, ou jusqu’à ce que les cellules atteignent la densité optique souhaitée de 1,0. Ajoutez simultanément 200 millilitres de 2% de galactose et 110 microlitres de levure facteur d’accouplement alpha ou YMFA pour arrêter les cellules en phase G1 et incuber pendant deux heures. Transférez la suspension cellulaire dans des seaux à centrifuger d’un litre et centrifugez le seau à 6 000 G et quatre degrés Celsius pendant 10 minutes.
Jetez le surnageant et remettez les pastilles cellulaires en suspension dans 10 à 15 millilitres d’eau distillée. Ensuite, scellez une seringue de 25 millilitres avec un bouchon de leurre et placez-la à l’intérieur d’un tube conique de 50 millilitres rempli d’eau. Transférez la suspension cellulaire dans l’ensemble seringue.
Lavez les seaux de centrifugation avec cinq millilitres d’eau distillée pour recueillir les cellules restantes. Ensuite, centrifugez l’ensemble à 2 397 G pendant 10 minutes à température ambiante et jetez le surnageant. Retirez ensuite le bouchon du leurre de la seringue et extrudez les cellules dans de l’azote liquide pour former des spaghettis cellulaires.
Enfin, transférez les spaghettis congelés dans un tube conique de 50 millilitres et conservez-les à moins 80 degrés Celsius jusqu’à leur nouvelle utilisation.
