Commencez par préparer une dilution de 1 à 20 d’encre de Chine noire et de tampon glycérol, puis centrifugez pendant 10 minutes à 15 000 g à température ambiante. Ajoutez 40 microlitres de solution d’encre et de tampon glycérol dans la première section de la plaque à 384 puits. Ajoutez maintenant 25 microlitres de tampon du système glycérol à tous les puits de dilution et 40 microlitres à tous les puits de dilution deux, trois et quatre.
Ajoutez 25 microlitres d’échantillon de glycane extrait aux puits de dilution pour diluer les échantillons dans un rapport de un pour un. Diluez en série chaque échantillon quatre fois en transférant 10 microlitres du puits de dilution un au puits de dilution deux, puis mélangez doucement à l’aide d’une pipette. Répétez le processus en transférant 10 microlitres de l’échantillon de la deuxième dilution vers le puits de dilution trois.
Après avoir répété le processus pour les quatre puits de dilution, jetez-en 10 microlitres afin que tous les puits aient un volume final de 40 microlitres. Ajouter 40 microlitres de solution d’encre et de tampon glycérol à la plaque finale. Recouvrez ensuite la plaque d’une housse adhésive avant de la centrifuger pendant 10 minutes à 3000g à température ambiante.
Pour imprimer les échantillons sur la membrane nitrocellulosique, commencez par purger la tête d’impression et les capillaires plusieurs fois avec le tampon du système glycérol. Lancez un test d’impression en chargeant une plaque avec la mémoire tampon seule. Pour configurer l’instrument afin qu’il imprime directement à partir du réservoir tampon propre, cliquez sur Fichier, puis sur Nouveau, puis choisissez Print Run.
Choisissez le type de microplaque et modifiez les paramètres de la lame en conséquence. Ensuite, modifiez les paramètres du mini-tableau avant de modifier les paramètres de la propriété spot. Cliquez sur l’onglet Vue d’ensemble pour afficher la plaque.
Enfin, sous l’onglet Options, sélectionnez Utilisation de la mémoire tampon et calculez le temps d’impression avant d’allouer des emplacements de fichier pour enregistrer le fichier. Après avoir enregistré l’emplacement, appuyez sur Démarrer le tirage pour poursuivre le tirage. Lors de l’impression d’échantillons de glycanes extraits, programmez le système comme précédemment.
Sous l’onglet Options, cliquez sur Utilisation des microplaques sources. Enfin, enregistrez le fichier de grille unique généré pour la puce imprimée pour l’analyse en aval. Des étalons de glycanes définis ont également été inclus dans les puces à ADN imprimées en tant que témoins positifs.
Le profil de liaison cartographique obtenu pour les étalons de glycanes sélectionnés correspond aux spécificités des épitopes précédemment rapportées.
