Pour commencer, placez la souris C57 Black/6 JRj anesthésiée. Décubitus dorsal sur une table d’opération chauffée. Confirmez l’absence de réponses réflexes au pincement des orteils.
Vaporisez la souris avec 70% d’éthanol pour éviter que les cheveux ne collent aux ciseaux. À l’aide de ciseaux, faites une incision abdominale à la base, en coupant vers le haut des deux côtés de la cage thoracique pour exposer la cavité abdominale. Utilisez un coton-tige pour déplacer les intestins vers la droite, exposant ainsi la veine porte.
À l’aide d’une pince courbée, placez deux ligatures sous la veine porte et attachez sans serrer chaque ligature. Ensuite, insérez un cathéter de 0,7 millimètre dans la veine porte. Une fois perforé, retirez l’aiguille du cathéter et guidez le cathéter dans la veine jusqu’à ce que l’extrémité du cathéter soit proche du foie.
Ensuite, resserrez les ligatures. Observez le foie. Réglez le débit de la pompe à rouleaux et fixez le tube de profusion.
Initier la profusion du foie à 37 degrés Celsius. Une fois que le foie devient pâle, utilisez des ciseaux pour couper la cage thoracique et le diaphragme. Ensuite, à l’aide d’une pince à pointe fine, placez la ligature sous la veine cave inférieure suprahépatique.
Ensuite, insérez un cathéter dans la veine cave inférieure suprahépatique à travers l’oreillette droite du cœur. Une fois perforé, retirez l’aiguille et guidez le cathéter dans la veine plus près du foie. Ensuite, serrez la ligature.
Fixez un tube pour la collecte des effluents de perfusion et fixez tous les tubes avec du ruban adhésif étanche. À l’aide d’un adaptateur de pince vasculaire, placez une pince de vaisseau sur la veine cave infrahépatique immédiatement au-dessus de la veine rénale droite pour éviter le mélange mort. Ensuite, augmentez le débit de perfusion à 3,5 millilitres par minute.
Démarrez la minuterie et l’enregistrement de la pression. Couvrir le foie d’un champ stérile imbibé de sérum physiologique, laisser reposer pendant 30 minutes et mesurer le volume d’effluent. Après 30 minutes d’équilibration, lancez l’expérience pour le premier prélèvement d’échantillon de base dans le collecteur de fractions.
Surveillez régulièrement le piège à bulles et remplissez-le de tampon de perfusion lorsqu’il est presque vide. Prélever un échantillon tampon à l’aide d’un robinet d’arrêt à trois voies immédiatement avant qu’il n’entre dans l’organe et à partir du cathéter collecteur inséré dans la veine cave inférieure. À l’aide d’un analyseur de gaz du sang, mesurez l’échantillon prélevé pour confirmer que l’organe est métaboliquement actif.
Après 15 minutes de perfusion initiale, à l’aide d’un pousse-seringue, démarrer la première stimulation en perfusant une substance d’essai à travers un robinet d’arrêt à trois voies au débit désiré. Après la simulation, prélevez des échantillons de base pendant 20 à 30 minutes avant de commencer la deuxième stimulation. La production d’urée dans le foie perfusé avec des périodes de base stables précédant chacune des deux périodes de stimulation suggère que la réponse de l’urée à deux stimulations consécutives avec des acides aminés mixtes est cohérente.
Une libération basale constante de glucose et d’acides gras non estérifiés a été observée. Avant une forte augmentation du glucose et des acides gras non ED pendant la perfusion de glucagon. La valeur moyenne à l’état basal et pendant la perfusion de glucagon suggère que le glucagon stimule rapidement la glycogénolyse hépatique et la lipolyse.
Cependant, sans périodes basales stables, il devient impossible de distinguer une réponse à l’urée de la suivante.
