Dextran-FITC Injection et collecte de bouchons de gel matriciels de souris pour le dosage des bouchons de gel matriciels

Pour injecter du Dextran à la souris, FITC sept jours après l’injection de gel matriciel, SUSPENDEZ 0,5 milligramme de Dextran, FITC dans 500 microlitres d’eau doublement distillée. Tourbillonnez-le soigneusement pour obtenir une solution de Dextran, FITC d’un microgramme par microlitre. Remplissez une seringue de calibre 29 avec 50 microlitres de la solution Dextran FITC.

Fixez la souris sur l’instrument d’injection de la veine caudale, désinfectez la queue avec une boule de coton imbibée d’alcool à 75 % avant d’injecter soigneusement 50 microlitres de la solution FITC de Dextran dans la seringue dans la veine caudale. Appliquez une pression sur le site d’injection avec le coton-tige pendant une minute pour arrêter le saignement. Remettez la souris dans sa cage et laissez-la se détendre pendant 30 minutes avant de récupérer le bouchon de gel matriciel.

Pour recueillir le bouchon de gel, coupez la peau de la souris euthanasiée le long du bord marqué du bouchon, à l’aide de ciseaux chirurgicaux. Et retirez la peau au-dessus du bouchon de gel matriciel. Récupérez le bouchon et rincez-le dans un bécher avec une solution saline tamponnée au phosphate pour éliminer tout excès de sang.

Ensuite, couvrez le bas de la cassette d’enrobage tissulaire avec environ 0,5 millilitre de gel d’enrobage tissulaire. Placez ensuite rapidement le bouchon de gel matriciel sur le gel d’enrobage tissulaire dans l’orientation prévue. Incorporez le bouchon avec du gel d’enrobage de tissu supplémentaire.

Solidifiez les cassettes à moins 80 degrés Celsius pendant 12 heures. Après avoir retiré le bloc de bouchon solidifié, coupez des sections de 12 microns d’épaisseur à l’aide d’un microtome de congélation. Montez ensuite les coupes sur des lames de microscope.