Preparing Cells to Assemble a 3D Human-Stem-Cell-Derived In Vitro Blood Brain Barrier

Commencez par préparer les cellules endothéliales différenciées, les parasites et les astrocytes pour l’assemblage du modèle iBBB. Après avoir aspiré le milieu de culture cellulaire à partir des cellules endothéliales différenciées, lavez les cellules avec du PBS une fois, puis ajoutez un mélange de protéase collagénase aux cellules lavées et dissociez les cellules à 37 degrés Celsius pendant cinq minutes. Transférez le mélange de protéase collagénase avec les cellules dissociées dans un tube conique contenant de l’hECSR, en maintenant un rapport de 1 :3 entre le mélange et l’hECSR, puis centrifugez les cellules à 300 G pendant trois minutes et aspirez le surnageant avant de remettre en suspension la pastille cellulaire résultante dans l’hECSR.

Dissociez les parasites différenciés avec le mélange de protéase collagénase à 37 degrés Celsius pendant cinq minutes. Ajouter la quantité appropriée de N2B27 dans un tube conique et y transférer les cellules dissociées du mélange de protéase collagénase, en maintenant un rapport de 1 :3 du mélange à N2B27. Faites tourner les cellules à 300 G pendant trois minutes.

Après avoir aspiré le surnageant, remettre en suspension la pastille cellulaire dans N2B27. Dissociez les astrocytes différenciés avec le mélange de protéase collagénase à 37 degrés Celsius pendant cinq minutes. Transférez les cellules dissociées dans le mélange de protéase collagénase dans un tube conique contenant un milieu astrocytaire complet dans un rapport de 1 :3 entre le mélange et le milieu.

Après avoir centrifugé les cellules à 300 G pendant trois minutes, aspirer le surnageant et remettre en suspension la pastille cellulaire dans un milieu astrocytaire complet. Les cellules sont maintenant prêtes pour l’assemblage de l’iBBB.