Pour effectuer une dilution en série à l’aide d’une plaque à puits, placez d’abord les suspensions de Mycobacterium sur les rangées A et E d’une plaque à 96 puits. Ajouter 180 microlitres d’eau déminéralisée dans les puits restants pour le processus de dilution en série. À l’aide d’une pipette à 12 canaux, remettre en suspension les suspensions de la rangée A et transférer 20 microlitres dans la rangée B.Répéter le transfert en suspension pour les rangées B et C jusqu’à ce que la dernière dilution soit atteinte dans la rangée D.Pour le placage par microgouttelettes, utiliser une pipette multicanaux de 0,5 à 10 microlitres avec des pointes minces pour transférer cinq microlitres de chaque rangée de la plaque à 96 puits vers la plaque carrée moyenne solide.
Laissez les gouttelettes toucher légèrement la gélose, ce qui assure un transfert correct et minimise la rétention de liquide à l’intérieur de l’embout. Laissez sécher les gouttelettes et fermez la plaque de gélose. Incubez-le à 37 degrés Celsius tout en surveillant la croissance bactérienne.
Si vous le souhaitez, placez les plaques de gélose dans un sac en plastique scellé pour éviter qu’elles ne sèchent. Après six à 10 jours d’incubation, vérifiez s’il y a des colonies individuelles visibles à l’œil nu. Placez la plaque sous un microscope inversé en utilisant l’objectif de grossissement le plus faible.
Vous pouvez également utiliser un appareil photo pour prendre une photo de la gouttelette et compter manuellement les colonies sur l’ordinateur à l’aide d’ImageJ pour le comptage automatisé des colonies. Le test de l’unité formant des micro-colonies ou micro-UFC a été utilisé pour produire de grandes quantités de données à partir d’une petite quantité de plaques de gélose. L’utilisation de liposomes pour l’administration de saquinavir a augmenté l’efficacité du traitement contre les souches de microbactéries présentant différentes résistances aux médicaments.
