Commencez par maintenir HEK293T cellules et le DMEM contenant du FBS inactivé par la chaleur, de la pénicilline et de la streptomycine dans une fiole T75. Pour le comptage cellulaire, mélanger 20 microlitres de suspension cellulaire avec 20 microlitres de solution de bleu trypan. Ajoutez 20 microlitres de suspension cellulaire mélangée à un colorant dans la chambre de comptage cellulaire et comptez le nombre de cellules par millilitre.
Semez HEK293T cellules et 10 millilitres de DMEM complet dans une boîte de Pétri de culture cellulaire de 10 centimètres. Incuber les cellules pendant la nuit dans un incubateur de dioxyde de carbone à 37 degrés Celsius. Le lendemain, retirez le milieu complet et remplacez-le par neuf millilitres de milieu sans sérum DMEM.
En utilisant les composés donnés de l’assemblage des particules virales, préparez un mélange de cotransfection. Ajouter lentement le mélange dans la boîte de Pétri et incuber à 37 degrés Celsius pendant six heures. Après l’incubation, remplacer le DMEM sans sérum par un milieu DMEM complet et poursuivre l’incubation pour la cotransfection jusqu’à 48 heures.
Ensuite, détachez les cellules en pipetant à plusieurs reprises sur la surface de la monocouche et transférez la suspension dans un tube de 15 millilitres. Centrifuger la suspension cellulaire à 400 G pendant cinq minutes. Prélevez le surnageant et passez-le à travers un filtre de 0,22 micron.
Conservez le filtrat contenant le pseudovirus Ha-CoV-2 à 80 degrés Celsius.
