1 Pour commencer, transférez le tissu tumoral2 immergé dans 25 millilitres d’hibernat A 3 dans une boîte de Pétri en verre stérilisé 4 sous une armoire à flux laminaire. 5 À l’aide d’un microscope, éliminez soigneusement 6 tout le tissu nécrotique. 7 Ensuite, utilisez un scalpel 8 et une pince à tissus pour disséquer les vaisseaux sanguins.
9 Coupez le tissu tumoral en 10 morceaux d’un à deux centimètres cubes. 11 Transférez-les dans une boîte de Pétri en plastique 12 contenant trois millilitres de milieu H-GPSA, 13 et placez le plat sur de la glace. 14 Pour traiter manuellement la tumeur, transférez le morceau de tumeur 15 dans une boîte de Pétri en verre frais.
16 À l’aide de deux scalpels, disséquez le segment 17 en sections de 0,5 millilitre au microscope. 18 Pour traiter mécaniquement la tumeur, 19 positionnez d’abord correctement la lame. 20 Ajustez ensuite l’épaisseur de la tranche à 0,45 à 0,50 millimètre, 21 et fixez le bouton de déverrouillage de la table en mode de démarrage.
22 Coupez le bloc d’agaro en un cylindre de deux centimètres de long 23 et collez-le sur le plat circulaire en plastique du hachoir. 24 À l’aide d’un scalpel, créez un trou dans le cylindre d’agaro 25 et placez le tissu tumoral dans le noyau. 26 Positionnez ensuite le disque en plastique sur le disque de montage 27 de la table de découpe et appuyez sur le bouton de réinitialisation 28 pour lancer le processus de hachage.
29 Après le premier tour, faites pivoter le disque de montage de 30 sur 90 degrés, et répétez à nouveau 31 pour couper le tissu en morceaux rectangulaires. 32 Retirez le disque en plastique. 33 Ensuite, à l’aide d’une spatule à tissus, 34 faites pivoter uniquement le tissu tumoral de 90 degrés.
35 Remettez le disque en plastique sur la table de découpe 36 et appuyez sur reset pour continuer la coupe. 37 Ensuite, à l’aide d’une pipette de cinq millilitres, 38 transférez le matériau traité, 39 avec le milieu, dans la boîte de Pétri. 40 Placez immédiatement le plat sur de la glace.
