Préparation d’échantillons pour la cytométrie en flux afin de mesurer la fluorescence de la pHluorin2 chez Trypanosoma brucei vivant

Pour commencer, prenez des cellules de Trypanosoma brucei exprimant la pHluorine. Ajouter de la tétracycline ou de la doxycycline et incuber pendant la nuit pour induire l’expression de pHluorin. Transférez ensuite trois millilitres de chaque culture dans des tubes séparés de 15 millilitres.

Ensuite, centrifugez les cellules à température ambiante pendant 10 minutes à 1000 xg. Retirez le surnageant et remettez les cellules en suspension dans un millilitre de PBS. Après avoir centrifugé les cellules pour la quatrième fois, retirez le surnageant et mettez à nouveau en suspension la pastille cellulaire dans du PBS avec des concentrations variables de glucose.

Ajoutez de l’iodure de propidium ou du rouge de thiazole pour distinguer les cellules mortes des cellules vivantes. Transférez ensuite chaque échantillon dans des tubes de cinq millilitres compatibles avec le cytomètre en flux.