Après avoir cultivé l’Aspergillus flavus NRRL 3357 aflatoxigène sur une tarière en dextrose de pomme de terre inclinée pendant six jours à 30 degrés Celsius, éluez les spores fongiques de l’éprouvette avec 10 millilitres d’eau contenant Tween 20. Vortex le tube à essai pendant 20 secondes. Filtrez la suspension de spores fongiques à travers de la laine de verre placée dans un entonnoir et utilisez le filtrat vortex pour la dilution.
Diluez une aliquote de 100 microlitres de la suspension filtrée avec 9,9 millilitres d’eau. Après le vortex, comptez les spores à l’aide d’un hémocytomètre. À l’aide de la formule à l’écran, calculez le volume d’eau nécessaire pour diluer un volume de la suspension d’origine de l’inclinaison à 1000 spores par microlitre.
Ajoutez un volume de la suspension d’origine à la quantité d’eau calculée. Ensuite, cassez doucement les gousses d’arachides et retirez les coques. Placez les graines dans un bécher stérile.
Ajoutez une solution de peroxyde d’hydrogène à 0,05 % jusqu’à ce que le bécher soit rempli à 70 %, en laissant les graines s’imprégner d’eau pendant trois heures. Décantez la solution de peroxyde d’hydrogène des graines et ajoutez environ trois fois la quantité de mélange d’eau à 80 % d’éthanol pour couvrir les graines. Incuber pendant une minute.
Rincez ensuite les graines deux fois avec des volumes égaux d’eau distillée stérile. Ajoutez le volume quintuple de solution de peroxyde d’hydrogène à 3 % dans le bécher et laissez-le reposer pendant cinq minutes. Après avoir décanté la solution de peroxyde d’hydrogène, rincez les graines deux fois avec des volumes égaux d’eau stérile.
Placez un papier filtre de 90 millimètres de diamètre dans le couvercle et humidifiez le papier avec un millilitre d’eau stérile. Placez le couvercle sur le plat. Placez les graines sur une serviette en papier stérile.
À l’aide d’une pince, retirez la peau de la graine. Placez rapidement les graines pelées dans la boîte de Pétri pour éviter la déshydratation. Coupez environ un tiers de la graine contenant l’axe embryonnaire.
Divisez la graine en cotylédons et, à l’aide d’un foret bien aiguisé, percez environ 1,5 à deux millimètres de profondeur au milieu de la face extérieure de chaque cotylédon. Placez quatre à six morceaux de graines percés sur une tarière à 1,5 %. À l’aide d’une pipette de 10 microlitres, ajoutez deux microlitres de suspension de spores dans la cavité percée de chaque demi-morceau de cotylédon.
Après avoir couvert le plat avec un couvercle, incuber à 30 degrés Celsius sans lumière pendant 72 heures.
