Commencez par stériliser la peau de la souris avec de l’éthanol à 80 % et transférez la souris dans une hotte de biosécurité stérile. Pour isoler les explants du noyau du tendon de la queue, utilisez un scalpel pour couper la queue à sa base. Ensuite, saisissez le bout de la queue avec une pince à épiler et remuez-la pour casser la peau.
Retirez doucement la pince à épiler pour exposer les explants du noyau du tendon. Placez les explants du noyau tendineux dans un milieu de culture standard et séparez-les de la queue à l’aide d’une lame de scalpel fraîche. Ensuite, pour isoler les fibroblastes tendineux, faites une incision transversale au milieu du pied de la souris à l’aide d’un scalpel.
De chaque extrémité de cette incision, faites une coupe perpendiculaire le long des côtés des pattes arrière jusqu’aux hanches. Ensuite, utilisez une pince à épiler pour fixer le lambeau de peau au pied et décoller la peau recouvrant les muscles du mollet. Séparez le tendon d’Achille de l’os du calcanéum avec une lame de scalpel fraîche.
Fixez l’extrémité libre avec une pince à épiler et séparez l’autre extrémité du muscle gastrocnémien. Transférez le tendon dans PBS et retirez le tissu musculaire restant. Ensuite, transférez le tendon dans le milieu de digestion.
Ensuite, utilisez des ciseaux pour couper l’articulation de la hanche et séparer les pattes arrière du corps. Lavez les pattes arrière dans du PBS froid. Retirez les muscles avec le scalpel et placez-les dans une boîte de Pétri sur de la glace.
Pendant que la boîte de Pétri est sur de la glace, émincez le tissu musculaire en morceaux de moins d’un millimètre cube. Transférez le tissu musculaire haché dans un milieu de digestion. Après avoir retiré les tissus musculaires restants, lavez les os restants dans du PBS froid.
Placez les os dans du PBS frais et froid et retirez progressivement les épiphyses pour exposer la moelle osseuse. Équipez une seringue d’une aiguille d’injection de 0,4 x 25 millimètres et remplissez-la de 10 millilitres de milieu de culture de macrophages. Tenez chaque os au-dessus d’un tube en plastique de 50 millilitres et insérez l’aiguille à environ un millimètre de profondeur dans la moelle osseuse par le haut.
Rincer la moelle osseuse en vidant la seringue.
