Protocole d’inoculum standard (SIP) pour l’identification bactérienne à l’aide d’un système automatisé d’identification microbienne et de sensibilité aux antimicrobiens (aMIAST)

Pour commencer, frottez le septum d’une bouteille d’hémoculture automatisée contenant des organismes monomorphes à Gram négatif, avec de l’alcool isopropylique à 70 %, à l’intérieur d’une enceinte de biosécurité de classe II A. Ensuite, prélevez un millilitre de mélange de bouillon de sang dans une seringue stérile équipée d’une aiguille de calibre 21. Versez une grosse goutte du mélange sur la surface d’un support plaqué.

Après avoir strié les plaques, incubez les cultures à 37 degrés Celsius pendant 18 à 24 heures. Examinez les plaques à la recherche de colonies isolées à l’intérieur de l’enceinte de sécurité biologique. Ensuite, versez trois millilitres de solution saline stérile dans un tube aMIAST avec un flacon distributeur.

Maintenant, prélevez trois à cinq colonies morphologiquement similaires avec un fil d’inoculation droit stérile. Transférez l’inoculum dans le premier tube. Utilisez une solution saline et un densitomètre pour ajuster la turbidité de la suspension entre 0,47 et 0,63 McFarland.

Ensuite, placez une fixation capillaire sur la carte d’identification aMIAST à Gram négatif dans le premier tube. Positionnez les cartes sélectionnées sur la cassette. Chargez maintenant la cassette dans sa position dans la chambre de remplissage avec le code-barres de l’échantillon vers l’intérieur.

Fermez la porte et appuyez sur Remplir sur l’écran de l’interface utilisateur. Lorsque le cycle de remplissage est terminé, le voyant bleu du système clignote. Maintenant, transférez la cassette de la chambre de remplissage dans la chambre de chargement.

Retirez les déchets de cassette une fois le chargement terminé. Sous-culture : la suspension restante dans les tubes sur gélose CLED pour vérifier la pureté des isolats. Le protocole d’inoculum standard a identifié 105 des 204 isolats testés comme étant des isolats à Gram négatif à déclaration obligatoire, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa et le complexe Acinetobacter baumannii étant les principaux organismes identifiés.