Pour commencer, prélevez le septum d’une bouteille d’hémoculture automatisée, contenant des organismes monomorphes à Gram négatif avec 70 % d’alcool isopropylique à l’intérieur d’une enceinte de biosécurité de classe 2A. Prélevez cinq millilitres de mélange de bouillon de sang dans une seringue stérile équipée d’une aiguille de calibre 21. Ensuite, désinfectez le septum en caoutchouc d’un tube séparateur en caoutchouc.
Transférez le mélange de bouillon de sang dans le tube. Centrifuger l’échantillon à 160 G pendant 10 minutes. Maintenant, pipetez soigneusement le surnageant à l’intérieur d’une enceinte de biosécurité.
Transférez le surnageant dans un nouveau flacon de prélèvement de sang ordinaire. Placez le flacon bouché dans une centrifugeuse à 2000 G pendant 10 minutes. Maintenant, aspirez le surnageant avec une pipette stérile.
Versez ensuite trois millilitres de solution saline stérile dans un tube aMIAST avec un flacon distributeur. À l’aide d’une boucle d’inoculation stérile, prélevez la pastille bactérienne au fond du flacon et inoculez-la dans le tube aMIAST. Utilisez une solution saline stérile et un densitomètre pour ajuster la turbidité de la suspension entre 0,47 et 0,63.
Placez ensuite une fixation capillaire de la carte d’identification aMIAST à Gram négatif dans le premier tube. Positionnez correctement les cartes sélectionnées sur la cassette. Chargez maintenant la cassette dans sa position dans la chambre de remplissage avec le code-barres de l’échantillon vers l’intérieur.
Fermez la porte et appuyez sur Remplir sur l’écran de l’interface utilisateur. Lorsque le cycle de remplissage est terminé, le voyant bleu du système clignote. Maintenant, transférez la cassette de la chambre de remplissage dans la chambre de chargement.
Retirez les déchets de cassette une fois le chargement terminé. Sous-culture : la suspension restante dans les tubes sur gélose CLED pour vérifier la pureté des isolats. Les résultats de sept flacons d’hémoculture positifs, identifiés à l’aide du protocole d’inoculum direct, étaient discordants jusqu’au niveau de l’espèce.
Sur les 105 gram négatifs à déclaration obligatoire RAST identifiés par le protocole d’inoculum standard, 98 ont été correctement identifiés par le protocole d’inoculum direct. Parmi les 99 échantillons de sang à déclaration négative non conformes à la RAST, un nombre de grammes négatifs à déclaration obligatoire a été détecté dans quatre flacons d’hémoculture positifs.
