Faire revivre les cultures de Sulfolobus acidocaldarius pour l’expérimentation de l’évolution de la température

Pour commencer, utilisez un bec Bunsen pour chauffer soigneusement un fil d’acier émoussé. Percez-le dans le couvercle d’un tube de microcentrifugation de deux millilitres pour créer un trou d’un millimètre de large. Placez les tubes percés dans un récipient autoclavable pour la stérilisation.

Une fois que les tubes ont été autoclavés et refroidis, remplissez-les avec 1,5 millilitre de BBM+ Maintenant, à l’aide d’une pointe de pipette, grattez environ 50 à 60 milligrammes de la culture de Sulfolobus acidocaldarius à partir d’un stock de glycérol. Transférez l’inoculum dans les tubes remplis de BBM+. Conservez un tube non inoculé avec BBM+ comme témoin négatif.

Pour éviter que des aérosols ne s’échappent du couvercle du tube percé, placez une membrane perméable aux gaz tolérante à la chaleur sur le dessus du couvercle. Placez les tubes inoculés dans un thermomélangeur pour l’inoculation. Une fois que les cultures ont atteint la densité optique requise, centrifuger les tubes à 5 000 G pendant deux minutes à température ambiante.

Ensuite, pipetez le surnageant pour le jeter. Ajoutez 1,5 millilitre de BBM+ chaud à la pastille et remettez la pastille en suspension dans le milieu. La croissance s’est avérée similaire lorsque l’on compare l’incubation à l’aide de thermomélangeurs avec celle des incubateurs conventionnels.