Imagerie confocale 3D améliorée de tissus cardiaques humains clairsemés par solvant

Pour commencer, utilisez un scalpel pour disséquer du tissu cardiaque humain fixé à 4 % de paraformaldéhyde pour l’adapter à la chambre de microscopie confocale. Déshydrater les échantillons cardiaques dans une série graduée de méthanol pendant une heure chacun à température ambiante avec agitation, suivie d’une immersion pendant une nuit dans une solution de dichlorométhane à 66 % et de méthanol à 33 % avec agitation. Le lendemain, blanchissez l’échantillon en effectuant les étapes indiquées.

Ensuite, réhydratez l’échantillon avec une série de méthanol gradué pendant une heure chacune avec agitation. Après l’immunomarquage, effectuez les étapes suivantes pour préparer le tissu à l’imagerie. Fixez une chambre contenant de l’adhésif sur une lame et appliquez du vernis à ongles sur le pourtour de la chambre.

Allumez le microscope confocal à balayage laser droit équipé d’une lentille 5X. À l’aide de lignes laser appropriées pour les spectres d’émission des fluorophores utilisés, obtenez des images Tile Scan et z-stack à une résolution de 1024 par 1024. À l’échelle microscopique, le nettoyage tissulaire des échantillons cardiaques permet de visualiser les ganglions contenant des neurones cardiaques et la structuration neuronale de l’innervation myocardique.