Placez la souris anesthésiée dans un cadre stéréotaxique sur un coussin chauffant et appliquez une pommade ophtalmique sur les paupières pour empêcher les globes oculaires de se dessécher. Rasez la tête dans la zone allant des os nasaux aux os occipitaux et désinfectez la peau exposée avec une alternance de doses de chlorhexidine et d’alcool trois fois chacune. À l’aide de ciseaux de dissection droits, coupez le cuir chevelu, maintenez-le avec une micro-pince et nettoyez le crâne du fascia.
À l’aide d’une perceuse d’un diamètre de 1,3 millimètre, faites deux trous dans les os temporaux de chaque côté le long des coordonnées des deux paires de vis. Placez les vis électroencéphalographiques, ou EEG, avec des fils conducteurs dans de l’alcool pendant 15 minutes, puis la solution saline. Placez quatre vis plaquées argent avec des électrodes dans les trous à une profondeur d’un millimètre.
Fixez les vis à la surface du crâne à l’aide d’acrylique dentaire, puis fixez un capteur d’enregistrement EEG au nez de l’animal. Après 30 minutes, utilisez une pince à épiler incurvée pour fixer les électrodes EMG à l’arrière du muscle orbicularis oculi avec de l’acrylique dentaire. Connectez et fixez les électrodes EEG à l’évidement plaqué argent du capteur.
Enfin, placez la souris sur un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle jusqu’à ce que l’animal se remette complètement de l’anesthésie. Après sept jours, utilisez de l’acrylique dentaire et une pince Dumont pour fixer une plaque métallique d’un diamètre de cinq millimètres sur l’os occipital du crâne de la souris. Pour préparer le cathéter chronique, marquez un segment sur l’aiguille à insuline à deux millimètres du côté de son extrémité biseautée.
Fixez l’aiguille à insuline dans le support du côté de l’embout biseauté au segment marqué. Placez un cathéter en polyéthylène PE-10 de deux centimètres sur toute la longueur restante de l’aiguille. Remplissez le cathéter d’une solution saline et couvrez-le d’un capuchon en plastique.
Pour l’implantation, percez un trou de trépanation de 1,5 millimètre de diamètre aux coordonnées appropriées. Placez le cathéter en polyéthylène PE-10 dans un support stéréotaxique et insérez-le dans le crâne de la souris. Ensuite, fixez-le avec de l’acrylique dentaire et laissez-le durcir pendant 15 minutes.
Connectez n’importe quel système d’enregistrement EEG commercial au connecteur situé sur la tête de la souris et définissez la valeur requise de la modulation de largeur d’impulsion, ou cycle de service PWM. Surveillez le signal EEG et attendez l’activité du rythme delta. Si un sommeil à mouvements oculaires non rapides (NREM) est observé, lancez le processus de photobiomodulation ou PBM et arrêtez le processus si le sommeil NREM passe au sommeil à mouvements oculaires rapides ou à l’éveil.
