Immunomarquage et comptage automatisé de cellules ganglionnaires rétiniennes de souris à l’aide d’un programme basé sur l’IA

Après avoir isolé toute la monture de la rétine de la souris, lavez la rétine dans le PBS avec une légère agitation pendant cinq minutes. Plongez la rétine lavée dans un tampon de blocage pendant 30 minutes. Après l’incubation, remplacez le tampon de blocage par l’anticorps primaire BRN3A.

Incuber la rétine pendant la nuit à quatre degrés Celsius pour permettre la liaison d’anticorps antigéniques spécifiques. Le lendemain, lavez la rétine trois fois avec du PBS pendant cinq minutes chacune avant d’incuber avec l’anticorps secondaire anti-lapin conjugué Alexa 594 ou Alexa 488 pendant deux heures pour visualiser les antigènes cibles. Après avoir lavé la rétine immunomarquée avec du PBS, transférez-la doucement sur une lame de microscope en verre.

Aplatissez la rétine pour minimiser le pliage ou la distorsion. Placez une lamelle sur la rétine montée en veillant à ce qu’aucune bulle d’air ne se forme. Téléchargez le code à partir du lien GitHub.

Téléchargez ensuite les fichiers nécessaires à partir du disque cloud et décompressez-les. Localisez la configuration. ini et modifiez son contenu pour qu’il pointe vers le chemin d’accès yolov5_cpu.

Cliquez ensuite sur Interface utilisateur. exe pour ouvrir l’interface graphique. Vérifiez si le pmse_plus.

pt se trouve dans le répertoire racine du lecteur C.Si ce n’est pas le cas, copiez-le à partir du dossier weights du dossier yolov5. Ouvrez le logiciel de comptage de cellules. Cliquez sur Ouvrir l’image pour importer l’image, puis cliquez sur Exécuter pour permettre au logiciel de compter automatiquement les cellules.

Le logiciel de comptage automatisé des cellules a identifié avec précision 15 231 cellules ganglionnaires rétiniennes dans le modèle murin de glaucome induit par le N-méthyl-D-aspartate, montrant une perte cellulaire significative par rapport à environ 45 000 à 50 000 CGR dans une rétine normale.