Hybridation de cellules bactériennes à l’aide d’une sonde oligonucléotidique marquée à l’aide d’un fluorophore par hybridation in situ par fluorescence (FISH)

Pour commencer, prenez des cellules bactériennes fixées dans du paraformaldéhyde. Centrifugez les cellules à 14 000 x g pendant 10 minutes. Retirez ensuite le surnageant.

Remettez le granulé en suspension dans 100 microlitres d’éthanol à 96 % de qualité analytique et incubez pendant une minute à température ambiante. Répétez la centrifugation pendant cinq minutes, puis retirez l’éthanol et séchez la pastille à l’air libre. Maintenant, hybridez les cellules dans une solution contenant de l’oligonucléotide marqué par fluorescence pendant trois heures à 46 degrés Celsius.

Immédiatement après l’hybridation, centrifuger les échantillons dans un rotor préchauffé à 46 degrés Celsius pendant 15 minutes à la température maximale autorisée. Ensuite, lavez les échantillons dans un tampon avec une rigueur appropriée pendant 15 minutes à 48 degrés Celsius. Après avoir centrifugé l’échantillon, lavez à nouveau les cellules avec 500 microlitres de PBS glacé.

Remettez-les en suspension dans 20 microlitres de PBS et stockez-les à quatre degrés Celsius jusqu’à nouvel ordre.