Ce protocole a été approuvé par le soin des animaux et du Comité institutionnel d&#39;utilisation (IACUC) à l&#39;Université de Floride et est en conformité avec le «principe de protection des animaux de laboratoire&quot; (NIH publication n ° 86-23, révisée en 1985). 1. Matériels <ol><li> Animaux: Homme souris C57BL / 6 (Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, USA) pesant 20-26 grammes au moment de la chirurgie. </li><li> Anesthésie: <ol><li> Appareil d&#39;anesthésie: l&#39;anesthésie par inhalation système VetEquip (VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA). </li><li> Anesthésique par inhalation: L&#39;isoflurane (Baxter Pharmacie, Deerfield, IL). </li></ol></li><li> Outils chirurgicaux: SuperCut Ciseaux Iris, droites (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis); Vannas micro-ciseaux, droites (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis); Dumont forceps (pointe fine, 45 ° pointes coudées, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) et unité de coagulation bipolaire (Salutgh Fréquence Dessiccateur 900, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA), clip navire micro (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) </li><li> Fournitures chirurgicales: Conseils de coton stériles; lingettes, éponges de gaze; Suture (7-0 suture de soie, Ethicon, Inc, Somerville, NJ, USA); adhésif tissulaire (Vetbond, 3M Company, St Paul, MN, USA); lavage chirurgical des mains : solution saline Bethadine, éthanol à 70%, et de 0,9% stérile; Pommade ophtalmique (Pommade Vétérinaire Puralube, Pharmaderm, Melville, NY, USA). </li><li> Occlusion de suture préparation pour MCAO: <ol><li> Filament pour le MCA occlusion: 7-0 suture chirurgicale monofilament en nylon (Ethicon, Inc, Somerville, NJ, USA). </li><li> Source de chaleur pour émousser la pointe de suture (Unité cautérisation thermique, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride). </li><li> Caoutchouc de silicone liquide (RTV Silicone adhésif, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA). </li></ol></li><li> Surgical / dissection microscope (Microscope stéréo Leica MZ6). <ol><li> Fibre optiqueéclairage (éclairage fibre optique FO1-150, Techniquip Corp, Livermore, CA, USA). </li></ol></li><li> Laser Doppler (PeriFlux System 5000, Perimed, Stockholm, Suède). <ol><li> Flexible micropointe (MT B500-0 Microtip droite, Perimed, Stockholm, Suède) </li></ol></li><li> Paramètres de température: <ol><li> Rectale moniteur températures (BAT-12, World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride). </li><li> Couverture thermique (T / PUMP, TP600, Gaymar, NY, USA). </li></ol></li><li> La coloration et la mesure quantitative de l&#39;infarctus du volume: <ol><li> Solution à 2% de chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (2% TTC, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). </li><li> Souris cerveau matrice trancheuse (Zivic-Miller Lab., Inc, Allison Park, Pennsylvanie, Etats-Unis). </li><li> Appareil photo numérique (V1253, Kodak Co., Rochester, NY, USA). </li><li> Image J logiciels (ImageJ 1.42q logiciel, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA). </li></ol></li></ol> 2. Pré-chirurgicaux étapes <ol><li> Avant la chirurgie, les souris sont logés sous un 12:12 lumière / obscurité cycle avec libre accès à l&#39;eau et rongeur. </li><li> Sutures pour MCAO sont préparés par émousser 1-2mm de la pointe de fil de suture avec de la chaleur et le revêtement 3-4mm de suture à partir de son arbre de pointe de caoutchouc de silicone liquide, ce qui lui permet de sécher (7-0; diamètre de pointe, 0.20-0.25 mm; revêtement longueur, 3-4mm, longueur de suture 11-13mm). Stérilité doit être conservé dans toutes les étapes mentionnées ci-dessus. </li><li> Après avoir pesé la souris, l&#39;anesthésie est induite avec 4% d&#39;isoflurane dans une chambre d&#39;admission et maintenue pendant la procédure avec l&#39;isoflurane 1,5-2% à 30% d&#39;O 2 et 70% de N 2 O mélange de gaz par l&#39;intermédiaire d&#39;un masque facial. </li><li> La souris est placée dans une position couchée sur un tampon de gaze placé sur une surface de fonctionnement à température contrôlée (couverture thermique); la fourrure tête est rasée. </li><li> Pommade ophtalmique lubrifiant est appliqué sur les deux yeux et les paupières sont fermées pour empêcher le dessèchement des yeux lors de la surprocessus gique. </li><li> Une incision médiane (1 cm) est faite sur la peau qui recouvre la calotte crânienne de la ligne nucale supérieure à la nasion et la peau est tirée latéralement d&#39;apposer une microsonde flexible (MT B500-0 Microtip droite; 0,5 mm de diamètre). La micropointe est placé perpendiculairement à la surface du crâne pariétal droit (1 mm et 5 mm postérieure latérale au bregma) pour contrôler le débit sanguin dans le territoire MCA par vélocimétrie laser. </li><li> Assurez-vous que la micro-pointe flexible est attaché au crâne bien avant que l&#39;animal est tourné vers une position couchée. Cou de l&#39;animal est placé sur un tampon doux et son nez est maintenu en cône du nez de l&#39;appareil d&#39;anesthésie. Cela se traduira par avoir assez d&#39;espace pour la micropointe flexible. </li><li> Une sonde de température rectale est insérée pour maintenir une température constante pour animaux noyau de 37 ± 0,5 ° C. </li><li> Les deux pattes de devant et pattes postérieures sont collées à la surface plate-forme d&#39;exploitation, et la queue est collé sur le tube rectal. </li> &lt;/ Ol&gt; 3. MCA occlusion chirurgie: <ol><li> Sous le microscope opératoire, une incision médiane du cou est faite avec des ciseaux entre le manubrium et la mâchoire en soulevant délicatement la peau lâche. </li><li> Les paires de glandes sous-maxillaires sous-jacents sont carrément divisée, avec la glande gauche laissés sur place. La glande sous-maxillaire droite est rétracté crânienne et sécurisé avec le muscle sterno. </li><li> La division exposé du muscle omo-hyoïdien recouvrant la gaine carotidienne est soigneusement divisée avec des micros. </li><li> L&#39;artère carotide commune droite (CCA) est soigneusement séparée et isolée du nerf vague et de sa gaine (situé latérale CCA). </li><li> Ci-après, les 2 méthodes chirurgicales qui ont été fréquemment utilisés pour effectuer l&#39;occlusion MCA divergent: </li></ol> Koizumi 4 Méthode <ol class="lroman" type="i"><li> Trois sutures lâches col de soie (7-0) sont préparés autour du droit du CCA. </li><li&gt; L&#39;artère carotide externe (CEA) est identifié, isolé et cautérisée (2-3mm en aval de la bifurcation). Il peut ensuite être divisée par des micro-ciseaux. Pour éviter les dommages involontaires périphériques sur le site de la cautérisation, la puissance devrait être fixé à 1 en utilisant le bouton d&#39;alimentation. Ceci est cohérent pour tous les cautérisations. </li><li> Une tension suffisante est appliquée à la suture col le plus proximal sur la DPA à occlure le débit sanguin (ligature permanente). L&#39;occlusion flux est vérifiée par une baisse de ~ 50% des valeurs de base perfusion corticale. </li><li> Puis un clip récipient est placé juste avant la bifurcation CCA afin d&#39;éviter un flux rétrograde au moment de l&#39;artériotomie. </li><li> Une artériotomie est effectuée entre la ligature et suture proximale de la pince sur le récipient avec des micro-CCA ciseaux (plus proche de ligation). </li><li> La chaleur émoussée revêtu de silicone 7-0 suture nylon est introduite par l&#39;artériotomie et avancé jusqu&#39;à ce qu&#39;il atteigne le clip pour vaisseau. Les 2 autres sont lâches sutures col gentment serrée autour de la CCA entre la artériotomie et le clip navire pour éviter le retour de débit de fuite à travers la CCA, avec prudence pour ne pas traumatiser la paroi artérielle, puis le clip navire est retirée. </li></ol> Longa 3 Méthode <ol class="lalpha" type="a"><li> Le CEA est identifié, disséqué autant que possible (près de sa bifurcation dans les artères linguale et maxillaire), cautérisée (avec alimentation mis à 1), et divisé par des micro-ciseaux. </li><li> Deux sutures lâches col de soie (7-0) sont préparés dans le proximale ICA juste au-dessus de la bifurcation du CCA. </li><li> Le CCA est temporairement fermé avec un clip navire. L&#39;occlusion flux est vérifiée par une baisse de ~ 50% des valeurs de base perfusion corticale. </li><li> Puis l&#39;ICA est temporairement fermée avec un clip récipient au-dessus des deux sutures lâches collier pour éviter un écoulement rétrograde au moment de l&#39;artériotomie. </li><li> Une artériotomie est réalisée à l&#39;aide de micro-ciseaux dans le proche CEA reflète à la souche. </li> &lt;li&gt; La chaleur émoussée revêtu de silicone 7-0 suture nylon est introduite par l&#39;artériotomie dans CEA et avancé jusqu&#39;à ce qu&#39;il atteigne le clip pour vaisseau appliqué à l&#39;ICA. Les 2 sutures lâches col proximale de l&#39;ICA sont légèrement resserré autour de la partie proximale ICA pour éviter l&#39;écoulement du sang reflux par l&#39;ICA, avec une attention pour ne pas traumatiser la paroi artérielle, puis le clip navire est retirée. </li></ol> Le reste de la procédure est largement convergentes: <ol><li> Le fil de suture est en train d&#39;occlusion avancé à travers l&#39;artère carotide interne (ACI) en direction de la base du crâne jusqu&#39;à ce qu&#39;une légère résistance se fait sentir. Une baisse concomitante de la valeur du débit sanguin cérébral en pourcentage (= 80%) par rapport à la valeur initiale est confirmée par laser Doppler. Les 2 points de suture cols sont serrés autour du filament inséré. </li><li> Pour transitoires expériences ischémie cérébrale, la suture occlusive est retirée doucement au bout de 45 minutes. Ce point peut être modifié de temps pour divers objectifs expérimentaux. </li><li> After retirer le filament de suture, le site artériotomie est fermé pour éviter une hémorragie post-opératoire. Dans la méthode de M. Koizumi, il s&#39;agit de serrer fermement les sutures collier autour du CCA. En technique Longa, le site artériotomie à la base du CEA est cautérisé, puis les fils de suture à la collerette proximale ICA sont desserrées et retirées à rétablir le flux carotidien. </li><li> Pour fermer l&#39;incision, la glande sous-maxillaire et SMC sont posés sur le champ opératoire. Les bords de la plaie sont ensuite estimés avec de la colle tissulaire dans les zones cervicales et le cuir chevelu. Alternativement, un fil résorbable ou une agrafe métallique peut être utilisé pour fermer la plaie surtout quand survie à long terme de l&#39;animal est destiné. </li><li> Après la fermeture de l&#39;incision, l&#39;animal reçoit 1 ml de solution saline chaude voie sous-cutanée à la reconstitution du volume. Une dose d&#39;analgésiques appropriés (c.-à buprénorphine à 0,05-0,1 mg / kg) doit être utilisé pour réduire la douleur et l&#39;inconfort des animaux au cours de la période de récupération. L&#39;animal est retiré de la salle d&#39;opération et placé dans une zone de récupération à chaud / cage pour éviter l&#39;hypothermie, avec libre accès facile et à l&#39;alimentation en eau douce et. </li></ol> 4. Post-Op évaluation neurologique Après que l&#39;animal ne reprenne conscience totale, les déficits neurologiques peut être évaluée par une échelle simple (échelle de cinq points) comme suit 3: <ol start="0"><li> pas de déficits observables </li><li> non-renouvellement de patte controlatérale (léger déficit neurologique focal) </li><li> évoluent dans une direction controlatéral à un infarctus (déficit neurologique focal modéré) </li><li> tomber dans une direction controlatéral à un infarctus sévère (déficit neurologique focal) </li><li> diminution du niveau de conscience sans mouvement spontané </li></ol> 5. La coloration et la mesure quantitative du volume de l&#39;infarctus cérébral <ol><li> Après 24 heures de reperfusion MCA, la souris survivant est pesé, profondément anesthésiés avec isoflorane 4%,et sacrifié selon le protocole approuvé. </li><li> Le cerveau est soigneusement enlevé et placé dans un cerveau de souris matrice trancheuse, et le cerveau tout entier est sectionnée au niveau coronaire intervalles de 2 mm. </li><li> Les sections sont immergés dans 2% TTC en tampon phosphate salin (PBS) à 37 ° C pendant 20 minutes. Après coloration TTC, infracted zone est indiquée par un blanc (non coloré) les tissus adjacents à la brique rouge (viable) du tissu (figure 1). </li><li> Des coupes sériées sont photographiés avec un appareil photo numérique et la zone de l&#39;infarctus est mesurée à l&#39;aide du programme J image. </li><li> La zone de l&#39;infarctus (blanc, sans tache), la zone de l&#39;hémisphère ipsilatéral (blanc et rouge brique, taché), et la zone de l&#39;hémisphère controlatéral (rouge brique, teinté) sont mesurées pour chaque section. Le volume est calculé en faisant la somme des zones représentatives de toutes les sections et en multipliant par l&#39;épaisseur de coupe. Après correction pour l&#39;œdème, le volume de l&#39;infarctus est calculé comme suit 9: Corrigezed infarctus du volume (CIV),% = [volume hémisphère contralatéral - (volume hémisphère ipsilatéral - volume de l&#39;infarctus)] volume hémisphère / controlatéral x 100 </li></ol> 6. Les résultats représentatifs Après l&#39;occlusion et la reperfusion du MCA via gauche CCA pour établir ischémie cérébrale transitoire, les animaux sont sacrifiés et leur cerveau en coupe coronale sont colorées avec TTC pour évaluer le volume de l&#39;infarctus (figure 1). <img src="/files/ftp_upload/2879/2879fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. TTC teinté sériées coronales du cerveau (2 mm) de souris soumises à une occlusion MCA.

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+on+stroke+prevention,+diagnosis,+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders.">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).</li><li>Lloyd-Jones, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update:+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee.">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, e21-e181 (2009).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).</li><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+I.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurol Res. 19, 641-648 (1997).</li><li>Fujii, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-related+differences+in+susceptibility+to+transient+forebrain+ischemia+in+SV-129+and+C57black/6+mice.+.">Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. .</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).</li><li>Bederson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+2,3,5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats.">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).</li><li>Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+4-phenylbutyrate+protects+against+cerebral+ischemic+injury.">Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury.</a> Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).</li><li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy.">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ideal+suture+diameter+is+critical+for+consistent+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice.">Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).</li><li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse:+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes.">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).</li><li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice:+a+redox+sensitive+mechanism?.">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?.</a> Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).</li></ol>

Les auteurs déclarent n&#39;avoir aucun conflit d&#39;intérêts.

Le modèle MCAO est un modèle établi qui reproduit l&#39;ischémie cérébrale chez les espèces murines. Ce modèle a été utilisé pour la première chez les rats et par la suite adaptée à la souris. Éviter craniectomie pour éliminer l&#39;influence de la manipulation chirurgicale sur la perméabilité barrière hémato-encéphalique et la pression intracrânienne est un avantage de cette technique. Cependant, de nombreuses variables, comme la souche des différences liées à la taille 10, la suture...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Type </th><th> Entreprise </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires (optionnel) </th></tr><tr><td> Des souris mâles C57BL / 6 </td><td> Animal </td><td> Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, USA </td><td></td><td> 20-26 grs </td></tr><tr><td> Microscope à dissection </td><td> Microscope </td><td> Microscope stéréo Leica MZ6 </td><td></td><td> Zoom 6.3:1 </td></tr><tr><td> Fibre optique d&#39;éclairage </td><td> Illuminateur </td><td> Techniquip Corp, Livermore, Californie, USA </td><td></td><td> FO1-150 </td></tr><tr><td> L&#39;isoflurane </td><td> Anesthésie </td><td> Pharmacie Baxter, Deerfield, IL </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> SuperCut ciseaux Iris, droit </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 14218 </td><td></td></tr><tr&gt; <td> Vannas micro-ciseaux, droit </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 14003 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont pointe fine pince </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 503290 </td><td></td></tr><tr><td> Clip navire </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 14120 </td><td></td></tr><tr><td> Dessiccateur à haute fréquence 900 </td><td> Outil chirurgical </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 500397 </td><td></td></tr><tr><td> 7-0 suture chirurgicale monofilament en nylon </td><td> Suturer </td><td> Ethicon, Inc, Somerville, New Jersey, USA </td><td> 1647G </td><td> Suture d&#39;occlusion </td></tr><tr><td> 7-0 suture de soie chirurgicale </td><td> Suturer </td><td> Ethicon, Inc, Somerville, New Jersey, États-UnisA </td><td> 7733G </td><td> Pour la ligature de suture </td></tr><tr><td> Adhésif silicone RTV </td><td> Le caoutchouc de silicone </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 1571 </td><td></td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> Adhésif tissulaire </td><td> 3M Company, St Paul, MN, USA </td><td> 70200746587 </td><td></td></tr><tr><td> Pommade Vétérinaire Puralube </td><td> Pommade ophtalmique </td><td> Pharmaderm, Melville, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> La buprénorphine hydrochlorode </td><td> Analgésiques </td><td> Hospira Inc, Lake Forest, IL, USA </td><td> NDC 0409-2012-32 </td><td></td></tr><tr><td> Unité cautérisation thermique </td><td></td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> 501292 </td><td></td></tr><tr><td> PeriFlux System 5000 </td><td> TCD débitmétrie </td><td> Perimed, Stockholm, Suede </td><td></td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 </td><td> Thermomètre rectal </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, USA </td><td> BAT-12R </td><td></td></tr><tr><td> T / PUMP, TP600 </td><td> Couverture thermique </td><td> Gaymar, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2,3,5-triphényltétrazolium </td><td> Réactif </td><td> Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA </td><td> T8877 </td><td></td></tr><tr><td> Souris cerveau matrice trancheuse </td><td> Cerveau trancheuse </td><td> Zivic-Miller Lab., Inc, Allison Park, Pennsylvanie, Etats-Unis </td><td> BSMAS001-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

intraluminal middle cerebral artery occlusion (mcao) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice

L&#39;AVC est la troisième cause de décès et la première cause de handicap dans le monde, avec un coût estimé à près de 70 milliards de dollars aux États-Unis en 2009 1,2. Le intraluminale de l&#39;artère cérébrale occlusion (MCAO) modèle a été développé par Koizumi 4 en 1986 pour simuler cette percutante pathologie humaine chez le rat. Une modification de la méthode MCAO a ensuite été présenté par Longa 3. Les deux techniques ont été largement utilisées pour identifier les mécanismes moléculaires de lésions cérébrales résultant d&#39;un accident ischémique cérébral et modalités thérapeutiques potentielles 5. Cette méthode relativement non invasive chez le rat a été étendu pour utiliser la souris pour tirer parti des souches transgéniques et knock-out 6,7. Pour modéliser une ischémie cérébrale focale, une suture intraluminale est avancé par l&#39;artère carotide interne pour occlure la base de la MCA. Retrait de la suture après une période de temps spécifiée imite reperfusion spontanée, mais la suture peutégalement être maintenue en permanence. Cette vidéo sera de démontrer les deux grandes approches pour effectuer la procédure intraluminale MCAO chez la souris de façon progressive, ainsi que de fournir un aperçu des inconvénients potentiels et les pièges. Le tissu cérébral ischémique seront ensuite colorées par le chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium (CTT) pour évaluer l&#39;étendue de l&#39;infarctus cérébral 8.

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Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Le intraluminale de l&#39;artère cérébrale occlusion (MCAO) est le modèle le plus fréquemment utilisé chez les modèles expérimentaux ischémiques AVC. Ici, nous allons démontrer tout le modèle en détail avec le guide de Laser Doppler, et ses résultats représentatifs.

Intraluminale Occlusion Artère cérébrale moyenne (MCAO) Modèle pour l&#39;AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez la souris

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

intraluminal-middle-cerebral-artery-occlusion-mcao-model-for-ischemic

Research

JoVE Journal

Medicine

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

49.6K vues.  University of Florida. Le intraluminale de l'artère cérébrale occlusion (MCAO) est le modèle le plus fréquemment utilisé chez les modèles expérimentaux ischémiques AVC. Ici, nous allons démontrer tout le modèle en détail avec le guide de Laser Doppler, et ses résultats représentatifs.

Vidéo: Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Course de modélisation chez la souris - Moyen-occlusion artérielle cérébrale avec le modèle filamentaire

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

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Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Modèle murin d&#39;occlusion artère cérébrale moyenne

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Occlusion bilatérale de l&#39;artère carotide commune comme un stimulus suffisant pour provoquer le préconditionnement précoce Tolérance ischémique à une ischémie cérébrale focale

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

L&#39;endothéline-1 induite Moyen Modèle occlusion de l&#39;artère cérébrale pour AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez le rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

L&#39;utilisation d&#39;une fenêtre crânien à la Visualisez l&#39;artère cérébrale moyenne pendant l&#39;endothéline-1 induite par l&#39;occlusion Artère cérébrale moyenne

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Système optimisé pour la surveillance de la perfusion cérébrale chez le rat des maladies du intraluminale occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Modélisation des maladies chez les souris: Coagulation permanente de l&#39;artère cérébrale moyenne distale

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Embolique Artère cérébrale moyenne occlusion (MCAO) pour AVC ischémique avec homologues caillots sanguins chez les rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

Approche chirurgicale pour Occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne et reperfusion induite par des maladies chez les souris

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of stroke on tissue injury and to evaluate the effectiveness of therapeutic interventions, several experimental models in a variety of species were developed. They include complete global cerebral ischemia, incomplete global ischemia, focal cerebral ischemia, and multifocal cerebral ischemia. The model described in this protocol is based on the middle cerebral artery occlusion (MCAO) and is related to the focal ischemia category. This technique produces consistent focal ischemia in a strictly defined region of the hemisphere and is less invasive than other methods. The procedure described is performed on mice, given the availability of several genetic variants and the high number of tests standardized for mice to aid in the behavioral and neurodeficit evaluation.

We describe a mouse model of stroke induced by the occlusion of the middle cerebral artery using a silicone coated suture. The protocol can be applied to induce permanent occlusion or a temporary ischemia, followed by reperfusion.

Induction de l&#39;AVC ischémique et ischémie-reperfusion chez la souris Utilisation de l&#39;artère moyenne Occlusion Technique et visualisation des Infarctus Zone

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...