This work was supported by National Institutes of Health grants HL087990 (G.L.).

Déclaration éthique: adultes rats Sprague-Dawley mâles (pesant 330-380 g) ont été utilisés dans ce protocole. Ce protocole a été approuvé par le Comité institutionnel de protection des animaux et l&#39;utilisation (IACUC) à la LSU Health Science Centre-Shreveport et est en conformité avec le «Guide pour le soin et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire de (huitième édition, National Academy of Sciences, 2011 ). 1 Préparation de modification PE-50 Tube <ol><li> Tenir un long tube PE-50 de 30 cm au-dessus d&#39;un feu de gaz par les mains, adoucir progressivement le tube. Étirez délicatement le tube. </li><li> Sélectionnez un point sur ​​le tube étiré en utilisant un compas numérique (Figure 1), marquer et couper le PE-tube de 50 modifié en un segment de 25 cm avec une longue pointe de 1 cm (diamètre extérieur: 0,30 à 0,34 mm). </li></ol> 2 Préparation des homologues caillots sanguins <ol><li> Anesthésier le rat avec de l&#39;isoflurane (5% pour l&#39;induction, l&#39;entretien de 2-3%) dans 70% de N 2 O et 30% O &lt;sub&gt; 2 par un masque avant la collecte de sang. Confirmez l&#39;anesthésie par une pincée de pointe. </li><li> Effectuer fémorale cathétérisme artériel d&#39;un rat des bailleurs de fonds avec la méthode publiée le 4 et le transfert de sang de l&#39;artère fémorale directement dans un 20 cm de long PE-50 tube. Placer le tube pendant 2 heures à la température ambiante à un caillot de sang, puis conserver le tube pendant 22 heures à 4 ° C. Remarque: Le cathétérisme est réalisée en utilisant une technique aseptique, comme décrit dans l&#39;étape 3.1. Le rat des bailleurs de fonds est récupérée pour d&#39;autres échantillonnages. </li><li> Couper le tube PE-50 en 50 mm segments et débusquer le caillot du tube dans une boîte de Pétri stérile contenant une solution saline normale. </li><li> Transférer les 50 mm de long dans un caillot de 60 mm de long 10 PE-tube et connecter chaque extrémité de tube PE-10 à 20 cm de long PE-50 tube relié à une seringue ml contenant une solution saline normale avec aiguille 23 G (figure 2) . </li><li> Déplacer le caillot par mouvement alternatif continu d&#39;une seringue à l&#39;autre pendant 5 minutes, ce qui peut éliminer les cellules sanguines à partir dele caillot et de réduire la fragilité du caillot coagulé extravasculaire, sans perturber le noyau de fibrine. </li><li> Couper le caillot dans un long segment de 40 mm et de transférer le segment de caillot dans un PE-50 cathéter modifié comme décrit dans l&#39;étape 1.2 dans des conditions aseptiques. Note: Tous les tubes de PE est stérilisé à l&#39;oxyde d&#39;éthylène. </li></ol> 3. embolique Artère cérébrale moyenne occlusion (figure 3A, B) <ol><li> Stériliser tous les instruments chirurgicaux par autoclavage (minimum 121 ° C, 15 PSI, pendant 15 min). Désinfectez la table d&#39;opération et du matériel chirurgical associé en utilisant 70% d&#39;éthanol. </li><li> Anesthésier le rat avec de l&#39;isoflurane comme décrit dans l&#39;étape 2.1. Testez la profondeur de l&#39;anesthésie en effectuant une pincée de pointe sur les deux pieds arrière, et tout mouvement observé (retrait de la patte) indique que l&#39;animal n&#39;est pas suffisamment anesthésié à faire de la chirurgie. Appliquez une petite quantité de pommade vétérinaire sur les deux yeux pour prévenir la sécheresse alors que sous anesthésie. Raser la fourrure sur le col et la tête re ventralerégions avec une tondeuse électrique pour exposer les zones de la peau. </li><li> Placez le rat en position couchée sur un coussin chauffant. Insérer une sonde rectale, de contrôle et de maintenir la température du corps entre 36,5 à 37,5 ° C en utilisant une unité de commande de couverture homéotherme. </li><li> Désinfectez la peau rasée et fourrure de 10% povidone-iode, suivie par 70% d&#39;éthanol. </li><li> Faire une incision médiane de 2 cm de long sur le col sous un microscope à dissection. Utilisez écarteurs pour exposer le champ opératoire et disséquer le droit commun artère carotide (CCA), l&#39;artère carotide externe (CEA), l&#39;artère carotide interne (ACI), et ptérygopalatine artère (PPA) gratuit de nerfs environnants et le fascia (figure 3A). Remarque: Avant la chirurgie, changer de gants stériles si aucun assistant aide à préparer l&#39;animal. </li><li> Disséquer le CCA libre des nerfs environnants (sans nuire à l&#39;nerf vague) et placer une suture de soie 5-0 stérile dans l&#39;artère. Faire un nœud coulant (n ° 1) et de saisir le fil de suture à l&#39;aide d&#39;un petit hemostat et tirez enseigné vers le corps. </li><li> Disséquer le CEA et ses deux branches, l&#39;artère occipitale (OA) et l&#39;artère thyroïdienne supérieure (STA). Coaguler deux branches à l&#39;aide d&#39;une unité électrique de vétérinaire. Placez deux morceaux de stériles 6-0 sutures de soie sous la CEA. </li><li> Séparer les deux soies placées sous l&#39;artère, une pièce de direction de la tête (extrémité distale) et l&#39;autre vers le corps. Attachez une ligature serrée (n ° 2) sur le côté le plus proche de la tête, saisir la soie avec de petites pinces hémostatiques et tirer enseigné vers la tête. Préparer un noeud lâche (n ° 3) avec l&#39;autre soie pour une utilisation ultérieure. </li><li> Disséquer la CIA et du PPA les nerfs environnants (sans nuire à l&#39;nerf vagal). Attachez le PPA avec une suture 6-0 (# 4). Faire un nœud coulant avec 6-0 suture autour de l&#39;ICA (n ° 5). Alternativement, couper le ICA à l&#39;aide d&#39;un clip microvasculaire. </li><li> Découpez un petit trou (moitié à travers) dans le CEA entre le serré (# 2) et en vrac (# 3) ligatures avec des ciseaux à ressort Vannas de style. Insérez le PE-50 modifié baignoiree contenant un caillot de sang dans l&#39;incision et l&#39;avance à la bifurcation de la CCA. Serrer la ligature lâche (n ° 3) autour de la lumière juste assez pour obtenir préserver la mobilité du tube à demeure. </li><li> Coupez le CEA sur le site de petit trou pour libérer le moignon et la position de la souche en dessous de la bifurcation de la CEA et de l&#39;ICA; ce qui permettra le tube modifié glisser facilement dans l&#39;ACI. Ouvrez la CIA et de faire avancer doucement le tube de la lumière de la CEA dans le ICA jusqu&#39;à la pointe du cathéter atteint l&#39;origine de la MCA (~ 17 mm de la bifurcation). Remarque: Avant d&#39;insérer le bout de tube dans le CEA, stérile la surface extérieure du tube avec 70% d&#39;éthanol, puis laver avec du sérum physiologique stérile. </li><li> Injecter le caillot à travers le cathéter PE-50 modifié avec 10 ul de solution saline plus de 10 secondes en utilisant une seringue Hamilton de 100 pi (figure 3B). </li><li> Retirer le cathéter de la CEA 5 minutes plus tard. Attachez le CEA et rouvrir CCA. Suturer l&#39;incision dans le cou. </li></ol> 4. surveillance régionale du débit sanguin cérébral (DSCr) <ol><li> Avant l&#39;occlusion de la MCA, faire une longue incision de 1,2 cm de la ligne médiane dans le cuir chevelu afin d&#39;exposer l&#39;os du crâne. Retirez les tissus sur l&#39;os du crâne avec un grattoir dentaire et les swaps de coton stérile. Remarque: Avant la chirurgie, la zone du cuir chevelu exposé et fourrure de sont désinfectés avec 10% de povidone-iode, suivie par 70% d&#39;éthanol. </li><li> Percer un trou de diamètre de fraise de 1,5 mm située à 2 mm et 5 mm postérieur au bregma latérale en utilisant une fraise sphérique en acier inoxydable de 0,7 mm (figure 4). REMARQUE: Gardez la dure-mère intacte. </li><li> Placer la sonde de 0,5 mm au-dessus de la surface de la dure-mère. Surveiller le débit sanguin cérébral à 0 (niveau de référence), 5, 15, 30, 60, 90 et 120 minutes après l&#39;embolisation et continuer à 5, 15, 30, 45, et 60 minutes après l&#39;administration intraveineuse de tPA. Après la dernière mesure du débit sanguin cérébral, l&#39;incision du cuir chevelu est fermée par suture. Remarque: Avant de cou incision nous mesurer DSCr comme base avant MCA Occlusion. Poster MCA occlusion nous mesurer DSCr après la fermeture de suture de l&#39;incision du cou. Ainsi, l&#39;incision du cou est maintenu stérile. </li></ol> Soins 5. post-opératoire <ol><li> Injecter 2,5 ml de solution saline sous-cutanée pour prévenir la déshydratation et injecter Buprenex (0,05 mg / kg, SC) immédiatement après la chirurgie et tous les 6-12 heures comme nécessaire pour soulager la douleur. </li><li> Arrêtez l&#39;isoflurane. Placez le rat dans une chambre de récupération vétérinaire 37 ° C (garder au chaud des animaux) et de garder observation. Il faut généralement 10 min pour le rat de récupérer de l&#39;anesthésie. Ensuite, mettre l&#39;animal dans une cage stérilisé, placer un peu de nourriture mouillée dans une boîte de Petri dans la cage, et retourner la cage à la salle de stérilisation des animaux. </li><li> 24 heures après l&#39;accident vasculaire cérébral, euthanasier le rat avec une overdose de pentobarbital de sodium (100 mg / kg de poids corporel, IP). </li></ol> 6. neurologique déficit Score <ol><li> Effectuer le score Bederson avant et à 2 heures après l&#39;embolisation. Utilisez un classement scale de 0-3 comme décrit précédemment 5: 0, augmenter le rat par la queue, l&#39;animal étendant les deux pattes avant sur ​​le sol et ne présentant pas d&#39;autres déficits (mouvement normal); 1, portant le rat par la queue, fléchir la patte antérieure controlatérale; 2, diminution de la résistance à poussoir latéral (et des membres antérieurs flexion) sans indirecte; 3, le même comportement que de grade 2 avec des cercles. NOTE: Les rats montrant Bederson score = 0 (pas de déficit) à 2 h après l&#39;embolisation sont exclus de l&#39;étude. </li></ol>

<ol>
	<li>Overgaard, K., Sereghy, T., Boysen, G., Pedersen, H., H&#248;yer, S., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+reproducible+cerebral+infarction+using+thrombotic+blood+clot+emboli.">A rat model of reproducible cerebral infarction using thrombotic blood clot emboli.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 12 (3), 484-490 (1992).</li><li>Zhang, R. L., Chopp, M., Zhang, Z. G., Jiang, Q., Ewing, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+focal+embolic+cerebral+ischemia.">A rat model of focal embolic cerebral ischemia.</a> Brain Res. 766 (1-2), 83-92 (1997).</li><li>Dinapoli, V. A., Rosen, C. 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L., Bartkowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+middle+cerebral+artery+occlusion:+evaluation+of+the+model+and+development+of+a+neurologic+examination.">Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination.</a> Stroke. 17 (3), 472-476 (1986).</li><li>Henninger, N., Bouley, J., Br&#229;tane, B. 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X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats.">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li><li>Westendorp, W. F., Nederkoorn, P. J., Vermeij, J. D., Dijkgraaf, M. G., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-stroke+infection:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Post-stroke infection: a systematic review and meta-analysis.</a> BMC Neurol. 11 (110), (2011).</li></ol>

We do not have any potential conflicting interests to disclose.

Dans cette étude, nous avons démontré un procédé standard pour exécuter un modèle d&#39;AVC embolique MCAO chez le rat, dans lequel l&#39;origine de la MCA est occluse par un caillot de fibrine riche. Le principal avantage de ce modèle est: l&#39;occlusion de la tige de MCA avec un caillot de sang fibrine riche est semblable à un coup de thromboembolique chez les humains, le modèle de course embolique est apte à effectuer une enquête préclinique de la thérapie fibrinolytique, et que ce modèle peut se dév...

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.
The institution "Louisiana State University Health Science Center" was changed to "Louisiana State University Health Science Center, Shreveport".

A correction was made to <a href="/video/51956">Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats</a>. The institution information was updated.

Erratum: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

L&#39;AVC est la troisième cause de décès aux États-Unis, mais les options de traitement de l&#39;AVC aigu reste limitée. À l&#39;heure actuelle, l&#39;injection intraveineuse de l&#39;activateur du plasminogène tissulaire recombinant (tPA) à dissoudre les caillots de sang est le traitement le plus efficace pour un AVC ischémique aigu. Cependant, l&#39;utilisation de tPA est limitée par la fenêtre thérapeutique étroite et par un risque accru d&#39;hémorragie intracérébrale. Par conséquent, un modèle de course adapté à la recherche thrombolytique est urgent. L&#39;artère cérébrale moyenne (MCA) est l&#39;artère occluse le plus souvent dans la course chez les humains. Axé sur cette artère, de nombreux modèles animaux d&#39;AVC ischémique ont été mis en place. À l&#39;heure actuelle, deux grands types de rongeurs focal modèles d&#39;ischémie par occlusion MCA ont été développés: suture modèle OACM et embolique OACM modèle. Bien que les modèles MCAO via la technique de suture intraluminale ont été largement utilisés dans la recherche de la course mécanisme axé, ces modèles de suture ne le font pasaccident vasculaire cérébral humain imiter, car jusqu&#39;à 80% des AVC sont causés par des droits de thrombose ou d&#39;embolie. Cependant, le modèle de embolie utilisant des caillots de sang imite étroitement course humaine et est considéré comme approprié pour l&#39;étude thrombolytique. Ce modèle embolique a été d&#39;abord développé chez le rat par Overgaard et al. 1 en 1992 et caractérisé en outre par Zhang et al., En 1997 2 et par Dinapoli et al., En 2006 3. Bien embolique OACM a attiré l&#39;attention de plus en plus, il ya des problèmes techniques rencontrés par de nombreux laboratoires. Dans cet article, nous démontrons une méthode standard pour la production embolique OACM avec des caillots de sang homologue chez le rat adulte, qui peuvent se développer un infarctus prévisible dans le territoire de l&#39;ACM. Les techniques présentées dans cet article devraient aider les chercheurs à surmonter les problèmes techniques pour la création de ce modèle pour la recherche de la course.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="739">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">rh-tPA</td>
			<td style="width:135px;">Chemical</td>
			<td style="width:237px;">Genentech</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:232px;">2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td style="width:135px;">Chemical</td>
			<td style="width:237px;">Sigma</td>
			<td style="width:135px;">T8877</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:232px;">Anesthesia vaporizer</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Soma Technology</td>
			<td style="width:135px;">Drager Vapor 19.1&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:232px;">Rechargeable high speed micro drill</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:135px;">18000-17</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved scissors</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:135px;">14117-14</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:232px;">Dumont forceps(Medical #7)</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:135px;">11270-20</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Dumont forceps(Medical #5)</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:135px;">11251-35</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:232px;">Vannas-style spring scissors</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Fine Science Tools</td>
			<td>15000-03</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Veterinary recovery chamber&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Equipment&#160;</td>
			<td style="width:237px;">Peco Services&#160;</td>
			<td style="width:135px;">V1200&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Genie plus syringe pump</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Rat brain matrix</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:135px;">RBMA-310C</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Digital caliper&#160;</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:135px;">501601</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">Dissecting microscope</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:135px;">PZMTIII-BS-LWD</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Hamilton syringe</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Hamilton</td>
			<td style="width:135px;">model 710</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:232px;">Homeothermic blanket control unit</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:232px;">Electric clipper</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:135px;">CLP-9931</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:232px;">Veterinary electrosurgical unit</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">MACAN Manufacturing Company</td>
			<td style="width:135px;">MV-9</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">Blood flowmeter</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Adinstruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">PowerLab 4/30</td>
			<td style="width:135px;">Equipment</td>
			<td style="width:237px;">Adinstruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;width:232px;">LabChart 7.2</td>
			<td style="width:135px;">software</td>
			<td style="width:237px;">Adinstruments</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:232px;">1ml syringe</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">309659</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">23G needle</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">305143</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:232px;">30G needle</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">305106</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:232px;">PE-50 tubing</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">427517</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:232px;">PE-10 tubing</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td style="width:237px;">Becton, Dickinson and Company</td>
			<td style="width:135px;">427400</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:232px;">6-0 Silk suture</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td style="width:135px;">723287</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:232px;">5-0 Silk suture</td>
			<td style="width:135px;">Consumable</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>517607</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

embolic middle cerebral artery occlusion (mcao) for ischemic stroke with homologous blood clots in rats

Cliniquement, la thérapie thrombolytique avec l&#39;utilisation de l&#39;activateur du plasminogène tissulaire recombinant (tPA) reste le traitement le plus efficace pour l&#39;AVC ischémique aigu. Cependant, l&#39;utilisation de tPA est limitée par la fenêtre thérapeutique étroite et par un risque accru de transformation hémorragique. Il est urgent de développer des modèles de temps appropriés pour étudier de nouveaux agents thrombolytiques et des stratégies pour le traitement de l&#39;AVC ischémique. À l&#39;heure actuelle, deux grands types de modèles d&#39;AVC ischémiques ont été développés chez les rats et les souris: intraluminale suture OACM et embolique OACM. Bien que les modèles MCAO via la technique de suture intraluminale ont été largement utilisés dans la recherche de la course mécanisme axé, ces modèles de suture n&#39;imitent pas la situation clinique et ne sont pas adaptés pour les études thrombolytiques. Parmi ces modèles, le modèle OACM embolique imite étroitement AVC ischémique humaine et est adapté pour enquête préclinique d&#39;un traitement thrombolytique. Ce modèle embolique été d&#39;abord développé chez le rat par Overgaard et al. 1 en 1992 et caractérisé en outre par Zhang et al., en 1997 2. Bien embolique OACM a gagné plus d&#39;attention, il ya des problèmes techniques rencontrés par de nombreux laboratoires. Pour répondre aux besoins croissants en matière de recherche thrombolytique, nous présentons un modèle hautement reproductible de embolique OACM chez le rat, qui peut se développer un volume de l&#39;infarctus prévisible dans le territoire de l&#39;ACM. En bref, un tube de PE-50 modifié est doucement avancé à partir de l&#39;artère carotide externe (ECA) dans la lumière de l&#39;artère carotide interne (ICA) jusqu&#39;à ce que la pointe du cathéter atteigne l&#39;origine de la MCA. Par le cathéter, un seul caillot de sang homologue est placé à l&#39;origine de la MCA. Pour déterminer le succès d&#39;occlusion de la MCA, le débit sanguin cérébral régional a été contrôlée, des déficits neurologiques et des volumes d&#39;infarctus ont été mesurées. Les techniques présentées dans le présent document devraient aider les chercheurs à surmonter les problèmes techniques pour la création de ce modèle pour la recherche de la course. &lt;/ P&gt;

Laser Doppler (LDF) a été utilisé pour surveiller DSCr pendant l&#39;induction de l&#39;ischémie cérébrale 6,7. Beaucoup de laboratoires, y compris notre laboratoire ont utilisé DSCr pour identifier les animaux avec succès occlusion MCA, mais les seuils de référence varient entre les laboratoires qui sont liés au site de mesure. La sonde de la LDF est positionné à 2 mm en arrière et latéralement par rapport à 5 mm du bregma, comme décrit précédemment 6. DSCr a été contrôlée ?...

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Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Embolique Artère cérébrale moyenne occlusion (MCAO) pour AVC ischémique avec homologues caillots sanguins chez les rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

26.8K vues.  Louisiana State University Health Science Center, Shreveport. In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke. 

Vidéo: Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Course de modélisation chez la souris - Moyen-occlusion artérielle cérébrale avec le modèle filamentaire

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Recherche

Médecine

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Modèle murin d&#39;occlusion artère cérébrale moyenne

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Intraluminale Occlusion Artère cérébrale moyenne (MCAO) Modèle pour l&#39;AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez la souris

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Occlusion bilatérale de l&#39;artère carotide commune comme un stimulus suffisant pour provoquer le préconditionnement précoce Tolérance ischémique à une ischémie cérébrale focale

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

L&#39;endothéline-1 induite Moyen Modèle occlusion de l&#39;artère cérébrale pour AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez le rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

L&#39;utilisation d&#39;une fenêtre crânien à la Visualisez l&#39;artère cérébrale moyenne pendant l&#39;endothéline-1 induite par l&#39;occlusion Artère cérébrale moyenne

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Système optimisé pour la surveillance de la perfusion cérébrale chez le rat des maladies du intraluminale occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Modélisation des maladies chez les souris: Coagulation permanente de l&#39;artère cérébrale moyenne distale

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Exécution distale permanente Moyen cérébrale avec l&#39;artère carotide commune occlusion chez les rats âgés pour étudier corticale ischémie avec une incapacité prolongée

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.