Aucun financement à déclarer.

La procédure de muscle squelettique comme décrit suit les lignes directrices de l&#39;Institutional Review Board Appalachian State University. NOTE: L&#39;équipe se compose d&#39;un opérateur (Ph.D. ou MD formés à la technique de biopsie), et au moins un, mais idéalement, trois ou plusieurs techniciens. L&#39;exploitant est responsable de la conduite et la supervision de tous les aspects de la procédure de biopsie de muscle squelettique. Un technicien (technicien n ° 1) est immédiatement chargé d&#39;aider l&#39;opérateur à tous les aspects de l&#39;extraction du muscle. Il doit notamment être les &quot;mains non stériles&quot; et appliquer une aspiration avec une seringue stérile. Un deuxième technicien (technicien n ° 2) engage la conversation avec le sujet et massages des jambes en face de l&#39;objet durant la procédure afin de minimiser l&#39;anxiété du sujet. Le troisième technicien (technicien 3 #) est responsable de la gestion et de traitement de l&#39;échantillon de muscle squelettique. Mesures analytiques en aval dictent combien de suppional techniciens sont nécessaires pour le traitement / la préparation de l&#39;échantillon de muscle squelettique. 1 Sous réserve Préparation <ol><li> Recueillir, préparer et organiser les matériaux spécifiés pour la procédure de biopsie musculaire (tableau 1). Décontaminer et stériliser l&#39;aiguille Bergström (de canule externe et interne trocart) et le piston selon la pratique standard 16. </li><li> Examiner le formulaire de consentement avec le sujet. La partie de la biopsie du muscle squelettique du consentement à la forme utilisée à l&#39;Appalachian State University Participer est fourni en supplément en ligne 1. <ol><li> Parlez-en à la question sur les aspects généraux de la procédure de biopsie musculaire avec un accent sur les risques possibles de la procédure, la préparation de la peau, l&#39;application de l&#39;anesthésie, des sensations typiques. Demandez au sujet de lire attentivement le consentement à participer forme et signer pour confirmer que la conception et les procédures étude sont compris. </li></ol></li><li> Assurez-vous que les sous réserve n&#39;est pas allergique à &quot;___ caine&quot; médicament de type (par exemple, la lidocaïne). </li><li> Demandez au sujet de mentir sur le dos sur une table matelassée avec la cuisse exposée. Placez deux alèses absorbantes jetables avec support en plastique sous la jambe du sujet. Placez la jambe d&#39;une manière détendue avec un petit rouleau de serviette sous le talon, de sorte que le genou est en extension complète (élevé ~ 1 cm), plaçant ainsi le vaste externe dans une position raccourcie. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur de charger l&#39;objet de contracter momentanément le muscle de la cuisse exposés, afin que le site de la biopsie peut être visualisée. Remarque: le vastus lateralis site de biopsie est juste en avant du fascia lata (la bande illiotibial), environ un tiers de la distance entre le haut de la rotule et du grand trochanter 7. </li><li> Porter la marque de l&#39;opérateur juste en dessous (~ 0,5 cm), le site de l&#39;incision avec un marqueur permanent pointe fine. </li><li> Avez l&#39;opérateur de déterminer l&#39;épaisseur du pli cutané approximative par pinching le pli. </li><li> Avoir l&#39;opérateur et techniciens se lavent les mains avec de l&#39;eau tiède et du savon et enfiler des gants jetables. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur enlever les poils d&#39;une région ~ 15 cm x 15 cm autour du site de la biopsie (via tondeuses). Remarque: tondre les poils du site de biopsie empêche les cheveux de pénétrer dans l&#39;incision au cours de la procédure et lors de la fermeture, et l&#39;épilation permet un meilleur contact entre les fermetures de bande et de la peau (voir 3.4). </li><li> Demandez à l&#39;opérateur stériliser la zone avec des tampons pré-imbibé d&#39;un antiseptique topique, (comme la povidone-iode ou le gluconate de chlorhexidine pour les sujets allergiques à l&#39;iode / coquillages). Commencez par le centre et travailler en cercles concentriques vers le bord extérieur de la zone rasée. Au minimum, répéter deux fois avec un nouveau coton-tige pré-imbibé chaque fois. </li></ol> 2. procédure de biopsie <ol><li> Demandez à l&#39;opérateur enlever des gants jetables, se laver les mains avec de l&#39;eau chaude et au savon, et Don gl chirurgical stérileoves utilisant une technique aseptique. </li><li> Avez-technicien n ° 1 présente le drapé fenêtré stérile à l&#39;opérateur. Avoir l&#39;opérateur, en utilisant une technique aseptique, placer le drap sur le site de la biopsie pour maintenir un champ stérile. </li><li> Avez-technicien n ° 1 présente l&#39;opérateur une seringue de 5 ml munie d&#39;une aiguille 21 G, tout en maintenant une technique aseptique. Nettoyez le dessus du flacon de lidocaïne avec un tampon imbibé d&#39;alcool. <ol><li> Demandez à l&#39;opérateur retire immédiatement 5 ml de lidocaïne. Retirez l&#39;aiguille 21 G de la seringue et jeter la seringue dans un récipient prévu à. </li><li> Avez-technicien n ° 1 présente l&#39;opérateur avec une aiguille G 1 ½ pouce 25, tout en maintenant une technique aseptique. Avoir la place de l&#39;opérateur de l&#39;aiguille de pouce de 1 ½ sur la seringue et évacuer les bulles d&#39;air de la seringue. </li></ol></li><li> Avoir le chlorure d&#39;éthyle technicien n ° 1 de pulvérisation sur le site de l&#39;incision (~ 0,5 cm au-dessus de la marque à l&#39;encre indélébile sur la peau) jusqu&#39;à ce que la peau semble «blanchir». <ol><li> Have l&#39;opérateur d&#39;insérer l&#39;aiguille à peu près horizontale à la peau dans le derme, aspirer l&#39;aiguille, puis infiltrer avec ~ 100 pi de la lidocaïne pour produire un &quot;bulle&quot; de 2-4 mm de diamètre. <ol><li> Avoir la ponction de l&#39;opérateur de l&#39;aiguille (légèrement retirer le piston de la seringue) pour confirmer que l&#39;aiguille n&#39;a pas été placé dans un vaisseau sanguin. Si du sang apparaît dans la seringue, retirer l&#39;aiguille, jetez dans un conteneur à aiguilles, et recommencer à 2,3. </li><li> Faire avancer l&#39;opérateur l&#39;aiguille dans le tissu sous-cutané, aspirer l&#39;aiguille, puis infiltrer le tissu avec ~ 1 ml de lidocaïne pour former une bulle. Une fois que la bulle a disparu, insérer l&#39;aiguille de 1 ½ pouce sur la seringue de lidocaïne chargé verticalement dans le site de l&#39;incision, l&#39;arrêt de surface du fascia lata. Remarque: Le sujet peut ressentir une légère sensation de picotement momentanée lors de l&#39;injection initiale de la lidocaïne (semblable à une piqûre d&#39;abeille). </li></ol></li><li> Assurez-vous que l&#39;opératou ne s&#39;infiltre pas le muscle avec lidocoine parce qu&#39;il est myotoxiques 17-19. </li><li> Avoir la ponction de l&#39;opérateur de l&#39;aiguille et injecter lentement les 4 ml restants de la lidocaïne tout en retirant l&#39;aiguille de la cuisse. Placer la gaze stérile sur le site d&#39;injection et laisser le sujet à se détendre tout en l&#39;anesthésique local prend effet. </li></ol></li><li> Après 2-3 min, avoir technicien n ° 1 présente l&#39;opérateur d&#39;un scalpel, tout en maintenant une technique aseptique. <ol><li> Avoir l&#39;opérateur sonder légèrement le site de la biopsie avec la pointe du scalpel pour confirmer que la zone est anesthésiée. Si nécessaire, injecter encore 3-4 ml de lidocaïne dans le site de l&#39;incision, voir 2.4.1.2. </li></ol></li><li> Demandez à l&#39;opérateur faire une ligne droite de 1 cm incision à travers la peau et des tissus sous-cutanés (~ 2-3 mm au-dessus de la marque d&#39;encre) parallèle au fémur. <ol><li> Demandez à l&#39;opérateur d&#39;insérer le scalpel profond de faire une incision à travers le fascia dans le muscle. Pour ce faire, une fois dans chaque direction<html> . Remarque: Le sujet peut se sentir un pincement ou une pression à la coupe plus profonde si la lame coupe de scalpel dans le muscle. </li><li> Avoir technicien # 2 engager le sujet dans la conversation et masser la jambe opposée. </li></ol></li><li> Avoir la place de l&#39;opérateur une quantité généreuse de gaze stérile sur le site de l&#39;incision et la biopsie et d&#39;appliquer une pression directe sur l&#39;incision pour réduire les saignements. <ol><li> Avez technicien # 1 connecter le robinet à 3 voies de métal à l&#39;jetable seringue de 60 ml et tube d&#39;extension de 30 cm (Figure 1). </li><li> Avez-technicien n ° 1 connectez une extrémité de la conique tube en plastique connecteur dans l&#39;extrémité libre du tube d&#39;extension et insérez fermement l&#39;autre extrémité de la conique tube en plastique connecteur dans la grande extrémité d&#39;une pointe de pipette 200 ul de ~ 15-18 mm de la pointe coupée. </li></ol></li></ol>jpg &quot;width =&quot; 500 &quot;/&gt; La figure 1 de l&#39;aiguille Bergström. (A) L&#39;aiguille Bergström (5 mm) est composé de (a) la canule externe et (b) un trocart interne, les composants associés comprennent (c) piston, (d) de 200 ul de la pointe de pipette avec ~ 15 à 18 mm coupé , (e) conique connecteur en plastique, (f) robinet à 3 voies de métal, (g) de la tubulure d&#39;extension de 30 cm, et (h) à usage unique de 60 ml seringue (B). L&#39;aiguille Bergström (5 mm) et des composants associés assemblé. ( C) Le trocart interne de l&#39;aiguille Bergström (5 mm) à environ 1 cm retiré ouvre la fenêtre de la canule externe. <ol start="9"><li> Après le saignement a cessé, ont technicien # 1 Ouvrir la pochette de stérilisée en autoclave et de présenter l&#39;aiguille de biopsie de 5 mm et trocart interne (Figure 1) à l&#39;opérateur tout en conservant une technique aseptique. <ol><li> Avez l&#39;opérateur monter l&#39;aiguille (canule extérieure et intérieure trocart), vérifier l&#39;alignement et de l&#39;action de glissement. </li> &lt;/ Ol&gt; </li><li> Avoir l&#39;opérateur fermement maintenir l&#39;ensemble de l&#39;aiguille (canule extérieure et intérieure trocart) avec les deux mains pour empêcher le trocart interne de tourner. Avez-technicien n ° 1 insérez fermement l&#39;embout de pipette de coupe dans le haut de la partie intérieur de trocart de l&#39;aiguille de biopsie avec un léger mouvement de rotation vers le bas. Assurez-vous que technicien n ° 1 ne touche pas l&#39;exploitant ou l&#39;aiguille de biopsie, que la pointe de la pipette. </li><li> Avoir l&#39;opérateur introduit l&#39;aiguille de biopsie dans le tissu à travers l&#39;incision. Localisez l&#39;incision dans le fascia (une «sensation» acquis) avec la pointe de l&#39;aiguille de biopsie. Avancer l&#39;aiguille juste après l&#39;angle de bord, puis l&#39;aiguille vers le bas vers le sol que l&#39;aiguille est avancé dans le muscle. Note: Les sujets peuvent ressentir une certaine gêne légère (par exemple, &quot;la pression profonde,&quot; ou légère sensation de crampes) que l&#39;incision à travers le fascia est situé à la pointe de l&#39;aiguille de biopsie et l&#39;aiguille est avancé dans le muscle. <ol> &lt;li&gt; Vous avez technicien # 2 instruire le sujet à rester «détendu» et de ne pas contracter leurs muscles de la cuisse tandis que l&#39;opérateur avance l&#39;aiguille dans le muscle. </li></ol></li><li> Une fois que l&#39;aiguille de biopsie est en position, que le signal de l&#39;opérateur N ° 1 technicien pour ouvrir la seringue jetable de 60 ml. <ol><li> Avez-technicien n ° 1 tirer rapidement le jetable seringue de 60 ml ouvert à la marque de 40-50 cc pour créer une dépression dans l&#39;aiguille de biopsie. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur tirer le trocart interne sur environ 1 cm pour ouvrir la fenêtre de la canule externe tout en maintenant la position du trocart extérieur dans le muscle. Demandez à l&#39;opérateur de fermer rapidement le trocart interne à couper (clip) et prélever l&#39;échantillon de muscle. Que le signal de l&#39;opérateur n ° 1 technicien pour libérer aspiration. </li><li> Avez-technicien n ° 1 ouvrir le robinet de la salle de libérer l&#39;aspiration. </li><li> Avoir l&#39;opérateur tourner l&#39;aiguille de biopsie 90 ° et répéter le processus. Si nécessaire, avoir le REPEA opérateurt la procédure de rotation jusqu&#39;à 3 fois (pour un total de quatre pinces). </li></ol></li><li> Demandez à l&#39;opérateur s&#39;applique contre-pression directe sur la plaie avec de la gaze stérile tout en retirant l&#39;aiguille de biopsie de la cuisse, en faisant attention de ne pas attraper fascia ou de la peau. Si une résistance importante se fait sentir, retailler tout en appliquant un mouvement de torsion pour le trocart interne. </li><li> Lors du retrait de l&#39;aiguille de biopsie de la cuisse, l&#39;opérateur dispose tirer le trocart interne arrière 1 cm à une inspection visuelle de la lumière de la canule extérieure à estimer si une quantité suffisante de tissu a été recueilli. <ol><li> Avoir la main de l&#39;opérateur de l&#39;aiguille de biopsie au technicien n ° 1. Pour maintenir une technique aseptique s&#39;assurer que technicien n ° 1 ne touche que l&#39;aiguille, pas l&#39;opérateur. Avez-technicien n ° 1 main l&#39;aiguille de biopsie au technicien # 3. </li></ol></li><li> Avoir technicien # 3 enlever le tissu de l&#39;aiguille de biopsie. <ol><li> Avoir technicien # 3 utilisation du piston (figure 1) et une paire de pince fine pointe defaire en sorte que tout le tissu musculaire est retiré du trocart interne et la canule externe. </li><li> Avez technicien # 3 peser rapidement l&#39;échantillon pour confirmer qu&#39;une quantité adéquate de tissu musculaire ont été recueillis et placer les échantillons sur un bloc de dissection glacée. </li></ol></li><li> Vous avez technicien # 3 disséquer soigneusement le tissu conjonctif et la graisse visible à partir des échantillons de muscle. Avez-technicien n ° 3 préparer les échantillons de muscle pour le stockage selon les analyses en aval. Par exemple, placer immédiatement les échantillons dans un tube cryogénique et enclenchez gel dans de l&#39;azote liquide, monter et congeler pour l&#39;histologie, ou dans un tube cryogénique avec un inhibiteur de RNase, etc </li><li> Si nécessaire, répétez la procédure avec une deuxième aiguille de biopsie stérilisé tout en conservant une technique aseptique. </li></ol> 3. Clôture <ol><li> Demandez à l&#39;opérateur appliquer une pression directe sur le site de la biopsie avec une gaze stérile et un sac de glace pendant 10-15 min. </li><li> Une fois l&#39;hémostase, demander au conducteur de la consommation d&#39;alcool prplaquettes de ep pour enlever le sang séché de la région autour de l&#39;incision. </li><li> Avez-technicien n ° 1 présente un tube de colle chirurgicale d&#39;actualité et d&#39;application à l&#39;opérateur. Demandez à l&#39;opérateur assembler le tube de colle chirurgicale et d&#39;application sans toucher le bout de l&#39;applicateur ou de la partie supérieure du tube. </li><li> Avoir l&#39;opérateur tire l&#39;incision fermée avec une main tout en appliquant une couche unique d&#39;adhésif chirurgical sur la partie supérieure de l&#39;incision à sec avec l&#39;autre main. Après l&#39;adhésif durcit (~ 90 sec), appliquer le ruban closuresperpendicular à l&#39;incision. Sinon, fermez l&#39;incision avec deux sutures 4-0 stériles. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur appliquer une pression directe en plaçant 3 à 4 fév &quot;x 2&quot; tampons de gaze non-stériles sur le site de l&#39;incision et le fixer avec une pellicule adhésive autocollante. </li><li> Demandez à l&#39;opérateur de fournir la matière verbale et des instructions écrites sur le soin des plaies appropriée, des réactions normales et anormales, et les lignes directrices de l&#39;activité pour les suivants de 1 à 4 jours (voir en ligne supplement 2). </li></ol>

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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+intense+interval+exercise+activates+AMPK+and+p38+MAPK+signaling+and+increases+the+expression+of+PGC-1alpha+in+human+skeletal+muscle.">Brief intense interval exercise activates AMPK and p38 MAPK signaling and increases the expression of PGC-1alpha in human skeletal muscle.</a> J Appl Physiol. 106, 929-934 (1985).</li><li>Phillips, S. M., Tipton, K. D., Ferrando, A. A., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+training+reduces+the+acute+exercise-induced+increase+in+muscle+protein+turnover.">Resistance training reduces the acute exercise-induced increase in muscle protein turnover.</a> Am J Physiol. 276, 118-124 (1999).</li><li>Davis, J. M., Murphy, E. A., Carmichael, M. D., Davis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quercetin+increases+brain+and+muscle+mitochondrial+biogenesis+and+exercise+tolerance.">Quercetin increases brain and muscle mitochondrial biogenesis and exercise tolerance.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 296, 1071-1077 (2009).</li><li>Vissing, K., Andersen, J. L., Schjerling, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+exercise-induced+genes+induced+by+exercise.">Are exercise-induced genes induced by exercise.</a> FASEB J. 19, 94-96 (2005).</li><li>Lundby, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+in+human+skeletal+muscle:+alternative+normalization+method+and+effect+of+repeated+biopsies.">Gene expression in human skeletal muscle: alternative normalization method and effect of repeated biopsies.</a> Eur J Appl Physiol. 95, 351-360 (2005).</li><li>Coyle, E. F., Coggan, A. R., Hemmert, M. K., Ivy, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+glycogen+utilization+during+prolonged+strenuous+exercise+when+fed+carbohydrate.">Muscle glycogen utilization during prolonged strenuous exercise when fed carbohydrate.</a> J Appl Physiol. 61, 165-172 (1985).</li></ol>

The authors have no conflicts of interest.

Cette vidéo présente un résumé étape par étape de la procédure de biopsie de muscle squelettique utilisée au Laboratoire de performance humaine ASU. Cette procédure, avec de petites modifications, a été utilisé pour recueillir environ 1 600 biopsies musculaires au cours des 13 dernières années. Les échantillons de biopsies musculaires ont fourni des données importantes dans les enquêtes sur la base de nutrition sportive, menant à des découvertes importantes de la recherche. <p class="jove_content"...

La technique de la biopsie percutanée ou «semi-ouverte» est utilisé pour obtenir des échantillons de tissus squelettiques musculaire de patients humains et des sujets de recherche. Duchenne (1806-1875) est considéré comme le premier à construire une aiguille avec un trocart pour obtenir le muscle squelettique de sujets vivants par biopsie percutanée 1. Dans les années 1960, Bergström introduit une aiguille de biopsie percutanée similaire à celle décrite par Duchenne 4.2. Vingt ans après, Evans et al. Jour 5 la technique en appliquant une aspiration à travers le trocart de coupe de l&#39;aiguille Bergström. Cette modification peut améliorer le rendement de tissu de 3 à 5 fois 6,7 et est utilisé dans le cadre de recherches cliniques et biomédicales. Cette technique a et continuera de favoriser le diagnostic des myopathies et notre compréhension de la structure et de la fonction du muscle squelettique. La technique de biopsie musculaire percutanée est straightforward. Une fois fait correctement, dans le respect strict de la technique aseptique, les risques associés sont minimes. La procédure de biopsie musculaire est considéré comme un outil expérimental pour des projets de recherche. Certains établissements d&#39;enseignement permettent une formation des chercheurs universitaires avec un doctorat, sous la supervision directe d&#39;un médecin, d&#39;obtenir des biopsies musculaires et d&#39;autres exigent un médecin conseil certifié pour effectuer la technique. L&#39;équipe de biopsie ASU a réalisé avec succès plus de 1600 biopsies musculaires au cours des 13 dernières années 8-15. Le but de cette vidéo est de décrire l&#39;aiguille Bergström modifié muscle percutanée technique de biopsie 5 pour obtenir des échantillons de tissus du muscle squelettique de muscle vaste externe de sujets humains.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="969">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:439px;">Name of Material / Equipment</td>
			<td style="width:185px;">Company</td>
			<td style="width:141px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:204px;">Comments /&#160; Description</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Bergstr&#246;m biopsy needle, 5 x 100mm</td>
			<td style="width:185px;">Stille Surgical Inc.</td>
			<td>119-29187-50</td>
			<td>1 ea</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Durasorb blue pad</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-031-340</td>
			<td>case of 300</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Prep Razor Disposable</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>89760</td>
			<td>1 ea</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Shave Cream</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>92869</td>
			<td>1 can</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Alcohol Swab</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>98721</td>
			<td>box/200</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Povidone-iodine Swabsticks (3 pack)</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>90691</td>
			<td>pack of 50</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Face masks</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>19-039-690</td>
			<td>case of 50</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Sterile Gloves; sz 6.5</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>68128</td>
			<td>box of 50 pairs</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Sterile Gloves; sz 7.0</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>68129</td>
			<td>box of 50 pairs</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Sterile Gloves; sz 8.5</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>68132</td>
			<td>box of 50 pairs</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Fenestrated Towel Drape</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>92712</td>
			<td>case of 50</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Lidocaine (1% HCl, w/o Epi</td>
			<td>Dealmed</td>
			<td>427902</td>
			<td>30cc vial</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Ethyl Chloride spray</td>
			<td>Dealmed</td>
			<td>386020</td>
			<td>3.5 fl. Oz. bottle</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">5 mL syringe w/ 21G needle</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-827-48</td>
			<td>case of 100</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">25G 5/8&#34; needle</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-826AA</td>
			<td>case of 100</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">25G 1 1/2&#34; needle</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-826-49</td>
			<td>case of 100</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Single-Use Scalpels&#160; w/ #11 blade</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>0-8927-5B</td>
			<td>box of 20</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">60 mL Syringe</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>13-689-8</td>
			<td>case of 40</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">~30 inch extension tubing</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-169-7A</td>
			<td>roll of 50ft</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Metal stopcock</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>01-290-38</td>
			<td>each</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Polypropylene tubing connector w/ tapered ends, 3.2 to 5.5 mm</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>15-315-28A</td>
			<td>case of 100</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Yellow pipette tips (1-200 &#181;L)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>02-681-2</td>
			<td>cut off&#160; ~15-18 mm of the tip</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Topical surgical adhesive</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MSC091076</td>
			<td>case of 36 tubes</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Topical surgical adhesive</td>
			<td>Medline</td>
			<td>MSC091076Z</td>
			<td>box of 6 tubes</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Butterfly stitches (adhesive strips) 1/2&#34; x 4&#34; (6 per pack)</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>93050</td>
			<td>box/300</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Bandadge, Strip, 3/4 x 3 in.</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>19-027-202</td>
			<td>pack of 100</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Adhesive bandage (5m rolls)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>19-027-768</td>
			<td>case of 36</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">1&#34; paper surgical tape</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>19-027-761</td>
			<td>case of 12</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Sutures (4-0 reverse cutting, FS2)</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>82926</td>
			<td>box of 36</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">4 x 4 sterile gauze pads</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>66949</td>
			<td>pkg/50</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">2 x 2 non-sterile gauze pads</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>37336</td>
			<td>pkg/200</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">3 x 4 Non-Adherent Pads</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>74389</td>
			<td>bx/100</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Autoclave bags 3.5 x 9</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>40390</td>
			<td>box of 200</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Autoclave bags 5.25 x 10</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>40391</td>
			<td>box of 200</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Autoclave indicator tape</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>31608</td>
			<td>box of 250</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Lab Coats&#8212;small</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-900-520A&#160;</td>
			<td>10/pk</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Lab Coats&#8212;medium</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-900-520B&#160;</td>
			<td>10/pk</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Lab Coats&#8212;large</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-900-520C&#160;</td>
			<td>10/pk</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Germicidal Disposable Cloth Wipes</td>
			<td>Moore Medical</td>
			<td>62879</td>
			<td>Can/160</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human skeletal muscle biopsy procedures using the modified bergstr&#246;m technique

La technique de la biopsie percutanée permet aux chercheurs et aux cliniciens de recueillir des échantillons de tissus du muscle squelettique. La technique est sûre et très efficace. Cette vidéo décrit la technique de biopsie percutanée à l&#39;aide d&#39;une aiguille Bergström modifié pour obtenir des échantillons de tissus squelettiques musculaire du muscle vaste externe de sujets humains. L&#39;aiguille est constituée d&#39;un Bergström canule extérieure avec une petite ouverture («fenêtre») sur le côté de la pointe et un trocart intérieur avec une lame de coupe à l&#39;extrémité distale. Dans des conditions d&#39;asepsie et d&#39;anesthésie locale, l&#39;aiguille est avancée dans le muscle squelettique par une incision dans la peau, le tissu sous-cutané, et le fascia. Ensuite, l&#39;aspiration est appliquée à la trocart interne, le trocart extérieur est tiré vers l&#39;arrière, le tissu musculaire squelettique est aspiré dans la fenêtre de la canule extérieure par l&#39;aspiration, et le trocart intérieur est rapidement fermé, coupe ou clipsage l&#39;échantillon de tissu musculaire squelettique ainsi . L&#39;aiguille est tourné de 90 °60, et une autre coupe. Ce processus peut être répété trois fois de plus. Cette technique de coupe multiple produit habituellement un échantillon de 100-200 mg ou plus chez des sujets sains et peut se faire immédiatement avant, pendant, et après une période d&#39;exercice ou d&#39;une autre intervention. Après pansement post-biopsie du site de l&#39;incision, les sujets reprennent généralement leurs activités de la vie quotidienne tout de suite et puissent participer pleinement à l&#39;activité physique vigoureuse dans les 48-72 heures. Les sujets doivent éviter lourde exercice de résistance pendant 48 heures pour réduire le risque de hernie du muscle à travers l&#39;incision dans le fascia.

La biopsie musculaire tel que décrit ci-dessus permet au chercheur de recueillir rapidement et de manière cohérente des échantillons de tissu du muscle squelettique. Le rendement typique chez des sujets sains de sport est de 200 mg ou plus en une seule passe avec 3-4 clips. La procédure prend 15 à 20 min, la majeure partie est consacrée à la préparation de l&#39;incision. Dans les études à base de l&#39;exercice physique, des échantillons de muscle sont souvent prises avant et après l&#39;exercice, avec une...

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Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&amp;#246;m Technique

The purpose of this video is to present the modified Bergstr&#246;m skeletal muscle biopsy technique on human subjects.

Procédures Muscle squelettique humain biopsie aide de la technique de modification Bergström

The percutaneous biopsy technique enables researchers and clinicians to collect skeletal muscle tissue samples. The technique is safe and highly ...

human-skeletal-muscle-biopsy-procedures-using-modified-bergstrm

Research

JoVE Journal

Medicine

Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

39.5K vues.  Appalacian State University. The purpose of this video is to present the modified Bergström skeletal muscle biopsy technique on human subjects. 

Vidéo: Human Skeletal Muscle Biopsy Procedures Using the Modified Bergstr&#246;m Technique

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force generation and fatigability in treated muscle. We describe a detailed approach to evaluating myo-mechanical properties in freshly explanted hindlimb muscle from the mouse. We describe the atraumatic harvest of mouse extensor digitorum longus muscle, mounting the muscle in a muscle strip myograph (Model 820MS; Danish Myo Technology), and the measurement of maximal twitch and tetanic tension, contraction time, and half-relaxation time, using a square pulse stimulator (Model S48; Grass Technologies). Using these measurements, we demonstrate the calculation of specific twitch and tetanic tension normalized to muscle cross-sectional area, the twitch-to-tetanic tension ratio, the force-frequency relationship curve and the low frequency fatigue curve 4. This analysis provides a method for quantitative comparison between therapeutic interventions in mouse models of muscle disease 1,2,3,5, as well as comparison of the effects of genetic modification on muscle function 6,7,8,9.

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for muscle disease, methods are needed to quantitate force generation and fatigability in treated muscle. We detail an approach to evaluating myo-mechanical properties in explanted mouse hindlimb muscle. This analysis provides a robust approach to quantitating the effects of genetic modification on muscle function, as well as comparison of therapies in mouse models of muscle disease.

Myo-mécanique Analyse des muscles squelettiques isolés

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

Recherche

Médecine

Skeletal Muscle Gender Dimorphism from Proteomics

Gross contraction in skeletal muscle is primarily determined by a relatively small number of contractile proteins, however this tissue is also remarkably adaptable to environmental factors1 such as hypertrophy by resistance exercise and atrophy by disuse. It thereby exhibits remodeling and adaptations to stressors (heat, ischemia, heavy metals, etc.)2,3. Damage can occur to muscle by a muscle exerting force while lengthening, the so-called eccentric contraction4. The contractile proteins can be damaged in such exertions and need to be repaired, degraded and/or resynthesized; these functions are not part of the contractile proteins, but of other much less abundant proteins in the cell. To determine what subset of proteins is involved in the amelioration of this type of damage, a global proteome must be established prior to exercise5 and then followed subsequent to the exercise to determine the differential protein expression and thereby highlight candidate proteins in the adaptations to damage and its repair. Furthermore, most studies of skeletal muscle have been conducted on the male of the species and hence may not be representative of female muscle. 
In this article we present a method for extracting proteins reproducibly from male and female muscles, and separating them by two-dimensional gel electrophoresis followed by high resolution digital imaging6. This provides a protocol for spots (and subsequently identified proteins) that show a statistically significant (p &lt; 0.05) two-fold increase or decrease, appear or disappear from the control state. These are then excised, digested with trypsin and separated by high-pressure liquid chromatography coupled to a mass spectrometer (LC/MS) for protein identification (LC/MS/MS)5. This methodology (Figure 1) can be used on many tissues with little to no modification (liver, brain, heart etc.).

A straight-forward set of methods to isolate and determine the identity of the most abundant proteins expressed in skeletal muscle. About 800 spots are discerned on a two-dimensional gel from 10 mg muscle; this allows for the determination of gender-specific protein expression. These methods will give equivalent results in most tissues.

Skeletal Muscle dimorphisme des sexes de la protéomique

Gross contraction in skeletal muscle is primarily determined by a relatively small number of contractile proteins, however this tissue is also remarkably ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts in this protocol have been successfully used in the derivation of induced pluripotent stem cells to model disease1. Early passages of these fibroblasts can also be used for cell-based functional assays to study specific disease pathways, mechanisms2 and subsequent drug screening approaches. The advantage of the presented protocol over enzymatic procedures are 1) the reproducibility of the technique from small amounts of tissue derived from older patients, e.g. patients affected with Parkinson's disease, 2) the technically simple approach over more challenging methodologies using enzymatic treatments, and 3) the time consideration: this protocol takes 15-20 min and can be performed immediately after biopsy arrival. Enzymatic treatments can take up to 4 hr and have the problems of overdigestion, reduction of cell viability and subsequent attachment of cells when not handled properly. This protocol describes the dissection and preparation of a 4-mm human skin biopsy for derivation of a fibroblast culture and has a very high success rate which is important when dealing with patient-derived tissue samples. In this culture, keratinocytes migrate out of the biopsy tissue within the first week after preparation. Fibroblasts appear 7-10 days after the first outgrowth of keratinocytes. DMEM high glucose media supplemented with 20% FBS favors the growth of fibroblasts over keratinocytes and fibroblasts will overgrow the keratinocytes. After 2 passages keratinocytes have been diluted out resulting in relatively homogenous fibroblast cultures which expresses the fibroblast marker SERPINH1 (HSP-47). Using this approach, 15-20 million fibroblasts can be derived in 4-8 weeks for cell banking. The skin dissection takes about 15-20 min, cells are then monitored once a day under the microscope, and media is changed every 2-3 days after attachment and outgrowth of cells.

The fibroblast explant culture protocol from human skin punch biopsies is a technically robust and simple way to derive skin cells within 4-8 weeks for banking of about 15-20 million cells at a low passage number.

Peau biopsie explantation Culture pour la dérivation de fibroblastes humains primaires

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. Although originally developed and used extensively in the rat due to its larger size, the tibial nerve in mice is big enough that it can be easily manipulated with either crush or transection, leaving the peroneal and sural nerve branches of the sciatic nerve intact and thereby preserving their target muscles. Thus, this model offers the advantages of inducing less morbidity and impediment of ambulation than the sciatic nerve transection model and also allows investigators to study the physiologic, cellular and molecular biologic mechanisms regulating the process of muscle atrophy in genetically engineered mice. The tibial nerve supplies the gastrocnemius, soleus and plantaris muscles, so its transection permits the study of denervated skeletal muscle composed of fast twitch type II fibers and/or slow twitch type I fibers. Here we demonstrate the tibial nerve transection model in the C57Black6 mouse. We assess the atrophy of the gastrocnemius muscle, as a representative muscle, at 1, 2, and 4 weeks post-denervation by measuring muscle weights and fiber type specific cross-sectional area on paraffin-embedded histologic sections immunostained for fast twitch myosin.

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of skeletal muscle atrophy. The model surgical protocol is described and demonstrated in C57Black6 mice. &#160;

Tibial Nerve Transection - un modèle standardisé pour dénervation induit l&#39;atrophie musculaire chez les souris

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

Murin col de l&#39;utérus Cœur, la transplantation en utilisant une technique de modification de manchette

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases in children and adults. These antibodies have been used to guide diagnosis and treatment. Cell-based assays have improved the detection of antibodies in patient serum. They are based on the surface expression of brain antigens on eukaryotic cells, which are then incubated with diluted patient sera followed by fluorochrome-conjugated secondary antibodies. After washing, secondary antibody binding is then analyzed by flow cytometry. Our group has developed a high-throughput flow cytometry live cell-based assay to reliably detect antibodies against specific neurotransmitter receptors. This flow cytometry method is straight forward, quantitative, efficient, and the use of a high-throughput sampler system allows for large patient cohorts to be easily assayed in a short space of time. Additionally, this cell-based assay can be easily adapted to detect antibodies to many different antigenic targets, both from the central nervous system and periphery. Discovering additional novel antibody biomarkers will enable prompt and accurate diagnosis and improve treatment of immune-mediated disorders.

Over the recent years, live cell-based assays have been used successfully to detect antibodies against surface and conformational antigens. Here, we describe a method using high-throughput flow cytometry enabling the analysis of large cohorts of patients. Detection of novel antibodies will improve diagnosis and treatment of immune-mediated disorders.

Haut-débit cytométrie en flux test cellulaire pour détecter les anticorps de la N-méthyl-D-aspartate Receptor ou récepteur de la dopamine-2 dans le sérum humain

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Preparation and Respirometric Assessment of Mitochondria Isolated from Skeletal Muscle Tissue Obtained by Percutaneous Needle Biopsy

Respirometric profiling of isolated mitochondria is commonly used to investigate electron transport chain function. We describe a method for obtaining samples of human Vastus lateralis, isolating mitochondria from minimal amounts of skeletal muscle tissue, and plate based respirometric profiling using an extracellular flux (XF) analyzer. Comparison of respirometric profiles obtained using 1.0, 2.5 and 5.0 &#956;g of mitochondria indicate that 1.0 &#956;g is sufficient to measure respiration and that 5.0 &#956;g provides most consistent results based on comparison of standard errors. Western blot analysis of isolated mitochondria for mitochondrial marker COX IV and non-mitochondrial tissue marker GAPDH indicate that there is limited non-mitochondrial contamination using this protocol. The ability to study mitochondrial respirometry in as little as 20 mg of muscle tissue allows users to utilize individual biopsies for multiple study endpoints in clinical research projects.

Methods for biopsy of Vastus lateralis, preparation of purified mitochondria, and respirometric profiling are described. The use of small muscle volume makes this technique suitable for clinical research applications.

Préparation et respirométrique évaluation des mitochondries isolées de tissu musculaire squelettique Obtenu par biopsie percutanée aiguille

Respirometric profiling of isolated mitochondria is commonly used to investigate electron transport chain function. We describe a method for obtaining ...

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and well tolerated technique. The Weil-Blakesley conchotome has a sharp biting tip with a 4 - 6 mm wide hollow. It is inserted through a 5 - 10 mm skin incision and can be maneuvered for controlled tissue penetration. The tip is opened and closed within the tissue and then rotated through 90 -180&#176; to cut the muscle. The amount of muscle obtained following repeated sampling can vary from 20 mg to 290 mg which can be processed for both histology and molecular studies. The wound needs to be kept dry and vigorous physical activity kept to a minimum for approximately 72 hr although normal levels of activity can restart immediately following the procedure. This procedure is safe and effective when close attention is paid to the selection of subjects, full asepsis and post procedure care. &#160;Both right and left vastus lateralis are suitable for biopsy dependent on participant preference.

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

This video demonstrates the technique of percutaneous muscle biopsy of the human vastus lateralis using the Weil-Blakesley conchotome.

Humain<em&gt; Vaste externe</em&gt; Biopsie de muscle squelettique Utilisation de la Weil-Blakesley Conchotome

Percutaneous muscle biopsy using the Weil-Blakesley conchotome is well established in both clinical and research practice. It is a safe, effective and ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

Phosphore-31 Spectroscopie par résonance magnétique: un outil de mesure<em&gt; In Vivo</em&gt; Capacité mitochondrial phosphorylation oxydative dans le muscle squelettique humain

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.