MAK reconnaît le soutien pour ce travail de la National Institutes of Health / Institut National du Cancer grant nombre - 1R15CA152985-01 a 1. Ce projet a également été soutenu par le programme de prix recherche Undergraduate Université Miami, les possibilités de doctorat-premier cycle Université de Miami pour le programme de bourses et le programme des boursiers Miami University Summer.

les procédures effectuées dans la vidéo et décrites ci-dessous ont été approuvés par l’utilisation Comité (IACUC) à l’Université de Miami et d’institutionnels animalier.
 1. préparation et Test de stimulation <ol><li>établir deux zones distinctes pour l’intervention chirurgicale, la table d’opération et la table après l’opération. Scène de ces deux domaines avec tous les matériaux et tous les ustensiles nécessaires.
	Table <ol><li>stade d’exploitation sous une hotte ventilée. Organiser la table avec l’équipement d’une manière qui permet la performance continue et sans encombre de la procédure.</li>
		<li>Établit un tableau postopératoire dans la même pièce et près de la table principale de l’opération. Maintenir les deux tables comme des environnements stériles tout au long de la procédure.</li>
	</ol></li> <li>Place ce qui suit fournit sur la table d’opération : un bocal avec couvercle, un tube de 15 mL, une paire de ciseaux chirurgicaux, un flacon d’éthanol à 70 %, deux planches de mousse, deux pinces, deux seringues de 1 mL 21 jauge, deux tubes de 50 mL, tube à un centrifuger , un flacon cryogénique, quatre blocs chirurgicaux, dix quilles, un distributeur de lingettes stérilisants et un conteneur pour objets acérés.</li>
	<li>Placer les fournitures suivantes sur la table après l’opération : une balance analytique, une 4 L dewar d’azote liquide, un peu profond large bouche dewar, un rack de microtube flottante, une paire de ciseaux chirurgicaux, deux pinces, quatre flacons cryogéniques et un distributeur de lingettes stériles.</li>
	<li>Remplir un 50 mL et un tube de 15 mL à 75 % du volume de formaline.</li>
	<li>à l’aide d’une épingle dans chaque coin, apposer un tampon chirurgical à un panneau de mousse approximative de 30 cm x 30 cm pour servir le jury de la dissection. Utilisez les quatre broches restantes au cours de l’opération. Préparer un petit panneau de mousse avec un tampon de transférer les organes à la table après l’opération chirurgicale. 
	ATTENTION : Isoflurane (99,9 %) est un produit chimique toxique et doit être utilisé dans une hotte de ventilation pour assurer le niveau maximal de sécurité de l’opération de nettoyage de déchets gaz anesthésique 8. Informations supplémentaires au sujet des risques à des chercheurs associés à l’utilisation de la méthode open-déplacer l’isoflurane peuvent être trouvées dans un article par Taylor et Mook 8.</li>
	<li>Placer un patin chirurgical dans le bocal en verre et de trempage avec quelques gouttes d’isoflurane (99,9 %) et placer une serviette en papier sur le dessus pour empêcher tout contact de la souris avec l’isoflurane. De même, utilisez un bloc chirurgical pour ligne le tube restant et laissez tremper avec quelques gouttes d’isoflurane et placez un coussin supplémentaire sur le dessus pour empêcher tout contact entre la souris et l’isoflurane.</li>
	<li>Pour l’azote liquide dans la bouche large peu profonde dewar jusqu’au repère de remplissage maximum est atteint.</li>
	Chambre de <li>Place la souris sélectionnée pour la dissection dans l’anesthésie, c'est-à-dire le bocal en verre avec un tampon imbibé de quelques gouttes d’isoflurane (99,9 %), couvert avec le couvercle, pendant environ 1 min. 
	Remarque : Cette période varie de la souris à la souris. Une fois que la souris est inconsciente, retirez-la de la chambre et placez-la sur le Conseil d’exploitation.</li>
	<li>Orienter la souris de sorte qu’il est couché la face ventrale vers le haut et avec sa tête dirigé à l’opposé de la scientifique. Placez la tête à l’intérieur du tube, bordée d’un bloc chirurgical imbibé de quelques gouttes d’isoflurane (99,9 %) et effectuer un test de stimulation par une pincée de pied pour s’assurer que la souris ne répond pas aux stimuli.
	<ol><li>Si ce test échoue et que la souris répond pour le test du pincement pied, répétez l’étape 1.8.</li>
	</ol></li></ol> 2. Première Incision, perforation du coeur et l’euthanasie <ol><li>Pin les membres de la souris sur le panneau isolant chirurgicale et mouiller la partie ventrale de la souris avec l’éthanol à 70 %.</li>
	<li>Pincer la fourrure/peau près de l’ouverture urétrale avec une pince et tirez légèrement vers le haut. Faites une incision avec des ciseaux chirurgicaux dans la cavité abdominale à partir de l’ouverture urétrale, la ligne médiane et se termine à menton.
	<ol><li>Près le point de départ de l’incision initiale, prends un côté de la fourrure/peau avec la pince et produit une autre incision avec des ciseaux vers le bas et en diagonale vers la patte arrière.</li>
		<li>Répéter cela de la même manière sur le côté opposé. 
		Remarque : La fourrure et la peau peut être épinglée pour créer une ouverture plus large, mais n’est pas nécessaire.</li>
	</ol></li> <li>Localiser le coeur et supprimer le péricarde, qui est le sac autour du coeur, pour éviter l’obstruction de l’aiguille de la seringue.
	<ol><li>Saisir le péricarde avec la pince et couper avec des ciseaux. Effectuer la ponction cardiaque en insérant avec précaution l’aiguille de la seringue dans le coeur battant et lentement commencer à rentrer le piston.</li>
		<li>Pour la collecte de sang optimale, utiliser le piston de l’aiguille afin d’imiter l’action de pompage du cœur et éviter de tirer trop vite. 
		Remarque : En général environ 1 mL de sang peuvent être collecté.</li>
		<li>à l’issue de la collection de sang, dissiper le sang dans le tube à centrifuger et jeter la seringue dans le récipient de dièses.</li>
		<li>Après la ponction cardiaque est effectuée, procéder à l’euthanasie en enlevant les attaches reliant cœur. 
		Remarque : L’héparine, un anticoagulant, n’a pas ajouté à la seringue dans cette procédure avant la ponction cardiaque pour permettre au sang de coaguler pour collection de sérum dans la présente étude spécifique. Toutefois, si le chercheur voulait empêcher la coagulation du sang afin de recueillir le plasma, héparine pourrait être ajouté à la seringue avant la ponction cardiaque.</li>
	</ol></li> <li>Si l’étude implique le génotypage de la souris, découper une partie de l’oreille avec les ciseaux et le placer dans un tube à centrifuger pour une vérification de génotype.</li></ol>
 3. Extraction de pancréas <ol><li>localiser l’estomac sur le côté gauche de la souris. Commencez doucement (afin d’éviter les déchirures) séparant le pancréas de l’estomac et du duodénum à l’aide de deux pinces. 
	Remarque : Lorsque le démontage du pancréas de l’estomac et des intestins, il est très important que les pinces servent doucement pour guider le tissu du pancréas loin des organes et à ne pas écraser ou déchirer le pancréas avec la pince.
	<ol><li>Continuent de diviser le pancréas provenant des sections jéjunum et iléon intestin grêle et enfin du caecum du gros intestin.</li>
	</ol></li> <li>Au caecum, repositionner la pince et continuer la séparation du pancréas le long du côlon restant vers le rectum. 
	Remarque : À ce stade, il est facile à couper et enlever la portion de l’estomac à la région du côlon qui précède immédiatement le rectum.</li>
	<li>Localiser le pancréas et joint rate. Faites glisser le pancréas vers le côté droit de la souris. Séparez les connexions restantes entre le pancréas et la cavité thoracique par la pince à détacher complètement le pancréas et la rate attenante.</li>
	<li>Enlever le pancréas et étalez-le à l’examen. Laissez la rate attachée au pancréas pour fins d’identification.
	Tissu conjonctif <ol><li>Supprimer tous, tissus gras et mésentériques par le pancréas. 
		Remarque : Ce tissu est plus blanc, en couleur et donc peut être aisément distingué des tissus du pancréas qui sont plus rose en couleur. Cela est particulièrement important si le pancréas entier doit être enlevé. Par exemple, si le pancréas doit être pesé et par rapport au poids corporel ou entre groupes d’animaux. Dans le Ptf1a cre / + ; LSL-Kras G12D / + modèle de souris, plus précisément dans les mois plus âgés, tissu pancréatique fibreux dur pourrait être présent. Dans ce cas, l’extraction soigneuse du pancréas doit être effectuée comme les intestins pourraient être entrelacées dans un tissu tumoral. Dans les cas avancés, rate anormale et le tissu hépatique peuvent également être présents.</li>
	</ol></li> <li>Si vous le souhaitez, supprimer des autres organes à ce stade.</li></ol>
 4. collecte de données et stockage <ol><li>après l’extraction des organes, déplacer les échantillons dans la zone postopératoire pour préservation.</li>
	<li>Peser chaque organe et rangez-les dans leur flacon cryogénique respectif. 
	Remarque : le long de with la masse de l’échantillon, d’irrégularités doivent être enregistrées pour référence ultérieure.</li>
	<li>Une fois que les organes sont pesés, placez-les dans l’azote liquide pour snap gel.</li>
	<li>Après le snap gel, stocker les organes à-80 ° C pour le stockage à long terme.</li>
	<li>Placer les échantillons de formol stocké sur le comptoir toute la nuit et le lendemain matin changer leur solution de formol à l’éthanol à 70 %. 
	Remarque : Ces échantillons doivent être stockés à 4 ° C pour le stockage à long terme.</li>
	<li>Pour le stockage à long terme, figer le sang et l’oreille punch à-80 ° C.. Pour la collecte de sérum du sang, permettent au sang de coaguler pendant 30 min puis centrifuger à elle. Retirer la partie de sérum à l’aide d’une pipette et ensuite stocker à -80 ° C.</li>
</ol> 5. Clean Up <ol><li>désinfectez tous la dissection des outils avec les lingettes stérilisants. Capuchon du tube doublé avec l’isoflurane imbibé bloc chirurgical. Remplacer le plateau chirurgical sur le panneau isolant avec un coussin frais chirurgicaux. Éliminer les parties de la souris qui n’ont pas recueillis par la facilité de &#39; politique d’élimination des animaux s.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+Survival+by+Histologic+Type+of+Pancreatic+Cancer.">Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).</li><li>Jackson-Grusby, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+in+mice.">Modeling cancer in mice.</a> Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).</li><li>Heid, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+requirement+of+Rac1+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preinvasive+and+invasive+ductal+pancreatic+cancer+and+its+early+detection+in+the+mouse.">Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse.</a> Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRAS2+Mutations+in+Human+Pancreatic+Acinar-Ductal+Metaplastic+Lesions+Are+Limited+to+Those+with+PanIN+Implications+for+the+Human+Pancreatic+Cancer+Cell+of+Origin.">KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin.</a> Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).</li><li>LaConti, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+serum+metabolomics+profiles+associated+with+malignant+progression+in+the+KrasG12D+mouse+model+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).</li><li>Ludwig, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveying+the+serologic+proteome+in+a+tissue-specific+kras(G12D)+knockin+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer.</a> Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).</li><li>Taylor, D. K., Mook, D. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+System+Participates+in+Mediating+the+Effects+of+General+Anesthetics.">Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).</li><li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-&#946;+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression.">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-&#946; signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li><li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer.">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li><li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data.">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li><li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis:+Clinical+Profile,+Histology,+and+Natural+History+After+Resection.">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li></ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Signification en ce qui concerne les méthodes existantes Parmi les autres vidéos informels des dissections de souris, cet article vidéo fournit la première qualité professionnelle, des pairs, démonstration visuelle de toutes les étapes détaillées nécessaires pour l’extraction et la récolte du pancréas de souris par dissection10 . Avec le pancréas est un organe principal de l’activité métabolique et l’insuline production, la dissection et la récolte du panc...

La souris est devenue un important modèle animal du cancer pancréatique humain1,2. Dans le Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modèle murin, la Kristen oncogène de rat sarcoma (K-Ras) intervient exclusivement dans le pancréas, aboutissant à l’initiation des lésions précancéreuses dans le pancréas, appelés les néoplasies intraépithéliales pancréatiques (paninés), que les progrès pour les adénocarcinomes canalaires pancréatiques, communément appelé PDACs3. Ce système de modèle de souris offre l’un des meilleurs modèles animaux disponibles pour cancer pancréatique humain4,5, avec l’avantage supplémentaire que les paninés émergent dans les cinq premiers mois de la vie et souvent progrès à PDAC dans un seule l’année4,5, alors que le cancer du pancréas survient plus fréquemment chez l’homme 60-70 ans.
Extraction du pancréas par dissection de la Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + souris à divers âges permet un examen histologique détaillé longitudinal du développement du cancer du pancréas, allant dès les premiers stades de PanIN grâce à la progression à l’ACPE3,4 , 5. récolte du pancréas à des âges allant de cinq à quinze mois peut également servir à préparer les tissus extraits pour caractériser les changements globaux dans le métabolisme des4 pancréas qui se produisent pendant la transition de santé à des tissus malades 6,,7.
Cet article présente un guide visuel complet des étapes requises pour effectuer une extraction de pancréas de souris et fournit des lignes directrices pour le stockage d’un pancréas pour une analyse ultérieure. Ce guide sera également utile pour les personnes effectuant des recherches sur d’autres maladies du pancréas, y compris diabète de type I et devraient être particulièrement utiles aux étudiants et aux chercheurs de nouveau à la recherche impliquant la cueillette du pancréas de souris à l’aide dissection des profils métaboliques ou des analyses histologiques.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="790">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass Jar&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3140-150</td>
			<td style="width:167px;">The glass jar used in the video has been discontinued.&#160; This is its replacement.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Lid of Glass Jar</td>
			<td style="width:288px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">9985-150</td>
			<td>The glass jar lid used in the video has been discontinued.&#160; This is its replacement.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">15 mL Falcon Tubes</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">9201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Squeeze bottle&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">03-409-10DD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">100% Ethanol</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">22-032-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">245-684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foam Boards</td>
			<td style="width:288px;">Therapak</td>
			<td style="width:119px;">562908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">200205SHN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL 21G Syringes</td>
			<td style="width:288px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL Falcon Tubes</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2.0 mL Microcentrifuge Tubes&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">02-681-258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Pads</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S67011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">T-Pins Length:&#160; 2&#34;&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Advance Store Products</td>
			<td>X32T-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sterilizing Wipes</td>
			<td style="width:288px;">Professional Disposables International Inc.</td>
			<td style="width:119px;">Q85084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sharps Container</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-827-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Analytical Balance</td>
			<td style="width:288px;">Marshall Scientific</td>
			<td style="width:119px;">ME-AE200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4L Dewar</td>
			<td style="width:288px;">Taylor-Wharton</td>
			<td style="width:119px;">4LD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shallow Wide Mouth Dewar</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">F3087-V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Floating Microtube Rack</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">60986-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10-500-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isothesia (Isoflurane)&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:119px;">050033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Liquid Nitrogen</td>
			<td style="width:288px;">Wright Brothers</td>
			<td style="width:119px;">NIT-60-XX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mouse Kras Strain</td>
			<td style="width:288px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">OO8179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mouse Cre Strain</td>
			<td style="width:288px;">MMRRC</td>
			<td style="width:119px;">OOO435-UNC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of the mouse pancreas for histological analysis and metabolic profiling

Nous avons enquêté sur le facteur de transcription spécifique de pancréas, 1 a cre-recombinase ; sarcome de LOX-stop-lox-Kristen rat, glycine, acide aspartique au codon 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) souche de souris comme un modèle de cancer pancréatique humain. L’objectif de nos études actuelles est d’identifier de nouveaux biomarqueurs métaboliques de la progression du cancer du pancréas. Nous avons effectué des profils métaboliques d’urine, selles, sang et extraits de tissus du pancréas, ainsi que des analyses histologiques du pancréas à l’étape de la progression du cancer. Le pancréas de souris n’est pas un organe solid bien défini comme chez les humains, mais il s’agit plutôt d’un tissu mou diffusément distribué qui n’est pas facilement identifiable par des individus peu familiers avec l’anatomie interne de la souris ou par des individus qui ont peu ou aucune expérience en spectacle dissections de souris d’orgue. Le but de cet article est de fournir un détail lavage démonstration visuelle pour guider les novices dans l’élimination du pancréas de souris par la technique. Cet article devrait être particulièrement utile aux étudiants et aux chercheurs de nouvelles pour la recherche qui nécessite la récolte du pancréas de souris par la technique de profilage métabolique ou des analyses histologiques.

La figure 1 montre une vue d’ensemble de la zone d’environnement d’exploitation et la Figure 2 montre la zone de fonctionnement du poste. Bien que ce paramètre fournit la quantité minimale de matériel et mise en scène, les personnes peuvent choisir de modifier ceci pour mieux répondre à des besoins individuels. Le protocole doit être optimisé selon les besoins spécifiques de l’expérience. Cette procédure est me...

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Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Cet article vidéo fournit une démonstration détaillée des procédures requises pour réussir à éliminer le pancréas de souris par la technique pour faire une analyse histologique et profils métaboliques.

Dissection du pancréas de souris pour faire une analyse histologique et profilage métabolique

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

36.2K vues.  Miami University. Cet article vidéo fournit une démonstration détaillée des procédures requises pour réussir à éliminer le pancréas de souris par la technique pour faire une analyse histologique et profils métaboliques.

Vidéo: Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions between vitreous substructures and the retina underlie several vitreoretinal diseases, including retinal tear and detachment, macular pucker, macular hole, age-related macular degeneration, vitreomacular traction, proliferative vitreoretinopathy, proliferative diabetic retinopathy, and inherited vitreoretinopathies. 1,2 The molecular composition of the vitreous substructures is not known. Since the vitreous body is transparent with limited surgical access, it has been difficult to study its substructures at the molecular level. We developed a method to separate and preserve these tissues for proteomic and biochemical analysis. The dissection technique in this experimental video shows how to isolate vitreous base, anterior hyaloid, vitreous core, and vitreous cortex from postmortem human eyes. One-dimensional SDS-PAGE analyses of each vitreous component showed that our dissection technique resulted in four unique protein profiles corresponding to each substructure of the human vitreous body. Identification of differentially compartmentalized proteins will reveal candidate molecules underlying various vitreoretinal diseases.

This video shows an effective technique for differentiating and dissecting the various semi-transparent structures of the human vitreous body in post mortem eyes.

Dissection de l&#39;homme des éléments du corps vitré de l&#39;analyse protéomique

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Recherche

Médecine

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

Protocole de collecte des pancréas humain

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

Whole Vitré Dissection d&#39;analyse Vitreodynamic

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide new expandable sources of beta cells to alleviate the donor scarcity in human islet transplantation as therapy for diabetes. Although recent advances have been made towards this aim, mechanisms that regulate beta cell expansion and differentiation from a stem/progenitor cell remain to be characterized. Here, we describe a protocol for an injury model in the adult mouse pancreas that can function as a tool to study mechanisms of tissue remodeling and beta cell proliferation and differentiation. Partial duct ligation (PDL) is an experimentally induced injury of the rodent pancreas involving surgical ligation of the main pancreatic duct resulting in an obstruction of drainage of exocrine products out of the tail region of the pancreas. The inflicted damage induces acinar atrophy, immune cell infiltration and severe tissue remodeling. We have previously reported the activation of Neurogenin (Ngn) 3 expressing endogenous progenitor-like cells and an increase in beta cell proliferation after PDL. Therefore, PDL provides a basis to study signals involved in beta cell dynamics and the properties of an endocrine progenitor in adult pancreas. Since, it still remains largely unclear, which factors and pathways contribute to beta cell neogenesis and proliferation in PDL, a standardized protocol for PDL will allow for comparison across laboratories.

This protocol describes an injury model involving the surgical ligation of the pancreatic duct in the adult mouse pancreas, resulting in severe injury that establishes an environment that allows beta cell neogenesis and proliferation. This model can be used as a tool to study mechanisms involved in beta cell formation.

Blessure chirurgicale au pancréas de souris par ligature du canal pancréatique tant que modèle de endocrines et exocrines Reprogrammation et prolifération

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

Do's and Don'ts in the Preparation of Muscle Cryosections for Histological Analysis

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of neuromuscular disorders. However, in order to do so, proper care needs to be taken when excising and preserving tissues to achieve optimal staining. One method of tissue preservation involves fixing tissues in formaldehyde and then embedding them with paraffin wax. This method preserves morphology well and allows for long-term storage at RT but is cumbersome and requires handling of toxic chemicals. Further, formaldehyde fixation results in antigen cross-linking, which necessitates antigen retrieval protocols for effective immunostaining. On the contrary, frozen sectioning does not require fixation and thus retains biological antigen conformation. This method also provides a distinct advantage in quick turn around time, making it especially useful in situations needing quick histological evaluation like intraoperative surgical biopsies. Here we describe the most effective method of preparing muscle biopsies for visualization with different histological and immunological stains.

Here we demonstrate the most efficient methods for freezing, embedding, cryosectioning, and staining of muscle biopsies to avoid freezing artifacts.

À faire et à ne pas faire dans la préparation de Muscle cryosections pour l&#39;analyse histologique

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

Modèle de souris pour une Transplantation du pancréas en utilisant une Technique mis à jour le brassard

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed in mice is high. Phenotypic characterization of these mouse models also requires the examination of cardiac function and morphology. Echocardiography and magnetic resonance imaging (MRI) are commonly used approaches to characterize cardiac function and morphology in mice. Echocardiographic and MRI equipment specialized for use in small rodents is&#160;expensive and requires a dedicated space. This protocol describes cardiac measurements in mice using a clinical echocardiographic system with a 15 MHz human vascular probe. Measurements are performed on anesthetized adult mice. At least three image sequences are recorded and analyzed for each animal in M-mode in the parasternal short-axis view. Afterwards, cardiac histological examination is performed, and cardiomyocyte diameters are determined on hematoxylin-eosin- or wheat germ agglutinin (WGA)-stained paraffin sections. Vessel density is determined morphometrically after Pecam-1 immunostaining. The protocol has been applied successfully to pharmacological studies and different genetic animal models under baseline conditions, as well as after experimental myocardial infarction by the permanent ligation of the left anterior descending coronary artery (LAD). In our experience, echocardiographic investigation is limited to anesthetized animals and is feasible in adult mice weighing at least 25 g.

Echocardiographic examination is frequently used in mice. Expensive high-resolution ultrasound devices have been developed for this purpose. This protocol describes an affordable echocardiographic procedure combined with histological morphometric analyses to determine cardiac morphology.

Examen échocardiographique et histologique de morphologie cardiaque chez la souris

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental insults that disturb placenta development or function can cause early pregnancy loss in mice and humans. Nevertheless, simple in vitro assays to screen for potential effects on placenta formation are lacking. Here, we focus on modeling the first and critical step in placenta formation, which consists of the attachment of the allantois to the chorion. We describe a method to rapidly assess the attachment of allantoic explants on immobilized &#945;4&#946;1 integrin, which serves as a chorio-mimetic substrate.This in vitro approach enables a qualitative evaluation of the attachment and spreading behavior of multiple allantois explants at different consecutive time points. The protocol may be used to investigate the effect of targeted mouse mutations, drugs, or various environmental factors that have been linked to pregnancy complications or fetal loss on allantois attachment ex vivo.

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

We describe an in vitro assay to model chorioallantoic attachment, the first step in placenta formation. The protocol demonstrates the dissection and explant culture of murine allantoides on immobilized &#945;4&#946;1 integrin. Allantois attachment is evaluated microscopically at pre-determined time points.

Dissection et la Culture Explant allantoïde murin pour l’analyse In Vitro de l’attachement allantoïdien

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of aortic disease exist, in vivo imaging of the vasculature has been limited. In recent years, micro-computerized tomography (micro-CT) has emerged as a preferred modality for imaging both large and small vessels both in vivo and ex vivo. In conjunction with a method of vascular casting, we have successfully used micro-CT to characterize the frequency and distribution of aortic pathology in &#946;-aminopropionitrile-treated C57/Bl6 mice. Technical limitations of this method include variations in the quality of the perfusion introduced by poor animal preparation, the application of proper methodologies for vessel size quantification, and the non-survivability of this procedure. This article details a methodology for the intravascular perfusion of a lead-based radiopaque silicone rubber for the quantitative characterization of aortopathy in a mouse model of aneurysm and dissection. In addition to visualizing aortic pathology, this method may be used for examining other vascular beds in vivo or vascular beds removed post-mortem.

This article describes a detailed methodology of using a radiopaque lead-based silicone rubber to perfuse the murine vasculature for aortic diameter quantification in a mouse model of aortic aneurysm and dissection.

Analyse quantitative de Micro-CT de Aortopathy dans un modèle murin d’anévrisme de l’aorte induite par la β-aminopropionitrile et Dissection

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

Mécanismes sous-jacents Gut sécrétion de l’Hormone à l’aide de l’isolé perfusé intestin grêle de Rat

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Dissection du pancréas de souris pour faire une analyse histologique et profilage métabolique

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