MAK признает поддержку для этой работы национальных институтов здравоохранения / Национальный институт рака предоставить номер - 1R15CA152985-01A1. Этот проект также был поддержан Майами Undergraduate исследований премии программы университета, возможности доктора-бакалавриат университета Майами для стипендиальной программы и программы ученых летнего университета Майами.

процедур осуществляется в видео и описанные ниже были одобрены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) в Университете Майами.
 1. Подготовка и стимул тест <ol><li>создать две отдельные области для хирургической процедуры, операционный стол и таблицу после операции. Этап обеих областях со всеми материалами и необходимая посуда.
	Таблица <ol><li>стадии операционной под вентилируемого капота. Организовать таблицы с оборудованием таким образом, который обеспечивает непрерывный и беспрепятственный производительность процедуры.</li>
		<li>Устанавливают послеоперационной таблицу в той же комнате и вблизи главной таблицы операции. Поддерживать обе таблицы как стерильные среды во всей процедуре.</li>
	</ol></li> <li>Место следующие поставки на операционном столе: один стеклянную банку с крышкой, один из 15 мл трубки, одна пара Ножницы хирургические, один бутыль на 70% спирте, две пены доски, два щипцы, два шприцев колеи 1 мл 21, две трубы 50 мл, один из пластиковых пробирок , один криогенный флакон, четыре хирургические колодки, десять контактов, диспенсером для стерилизации салфетки и Шарпс контейнер.</li>
	<li>Место следующие поставки на таблице после операции: одна аналитические весы, один 4 L Дьюара жидким азотом, широкий неглубокой рот Дьюар, плавающий Микропробирка стойку, одна пара Ножницы хирургические, два щипцы, четыре криогенных флаконов и Диспенсер Стерильные салфетки.</li>
	<li>Заполнения 50 мл и один 15 мл до 75% объема с формалином.</li>
	<li>С помощью ПИН-кода в каждом углу, аффикс один хирургический pad приблизительно 30 см x 30 см доска пены в качестве Совет рассечение. Используйте оставшиеся четыре булавки в ходе операции. Подготовить меньше доска пены с хирургической площадку для передачи органов к таблице послеоперационное. 
	Предупреждение: Изофлюрановая (99,9%) токсичных химических веществ и должны использоваться в вентиляционные вытяжки для обеспечения максимального уровня безопасности от очистки отходов анестезирующий газ 8. Дополнительная информация относительно рисков для исследователей, связанные с использованием метода open-drop, с помощью изофлюрановая можно найти в статье Тейлор и мук 8.</li>
	<li>Место один хирургический площадку в стеклянную банку и замочить с несколько капель изофлюрановая (99,9%) и поместите бумажное полотенце поверх для предотвращения прямого контакта мыши с изофлюрановая. Аналогичным образом, использовать пусковую площадку хирургические для линии оставшиеся трубки и замочить с несколько капель изофлюрановая и разместите дополнительную накладку над верхней частью для предотвращения прямого контакта между мышью и изофлюрановая.</li>
	<li>Вылейте жидкий азот в мелкой широкий рот Дьюар до тех пор, пока максимальный заполнить линии достигается.</li>
	<li>Место мыши, отобранных для рассечения в анестезии камеры, т.е. стеклянную банку салфеткой, смоченной несколько капель изофлюрановая (99,9%) с крышкой, на ~ 1 мин 
	Примечание: Это время варьируется от мышь. Когда мышь находится в бессознательном состоянии, удалите его из камеры и поместить его на эксплуатации Совет.</li>
	<li>Ориент мыши, таким образом, чтобы он лежал вентральной стороне вверх и с ее головы, указал вдали от ученого. Установите головку внутри трубки выстроились хирургической салфеткой, смоченной несколько капель изофлюрановая (99,9%) и выполнить тест стимул, щепотку ноги, чтобы убедиться, что мышь не реагирует на раздражители.
	<ol><li>Если этот тест завершается неудачей и мышь реагирует на ноги щепотку тест, повторите шаг 1.8.</li>
	</ol></li></ol> 2. Первоначальный разрез, пункции сердца и эвтаназии <ol><li>Pin конечностей мыши в Правление хирургического пены и мокрой вентральной стороне мыши с 70% этанол.</li>
	<li>Ущипнуть мех/кожа возле уретры открытия с щипцами и потяните слегка вверх. Сделайте надрез с Ножницы хирургические через брюшную полость, начиная от уретры, открытие средней линии и заканчивая подбородок.
	<ol><li>Рядом с отправной точкой первоначального разреза, захватить одну сторону мех/кожа с щипцами и сделать еще один разрез с ножницами вниз и по диагонали к задней лапой.</li>
		<li>Повторить это таким же образом на противоположной стороне. 
		Примечание: Мех/кожа может быть возлагали для создания более широкого открытия, но не является обязательным.</li>
	</ol></li> <li>Сердце найдите и удалите перикарда, который является мешок вокруг сердца, чтобы избежать засорения иглу шприца.
	<ol><li>Понять перикарда с щипцами и резать с ножницами. Выполните пункции сердца, внимательно вставляя иглу шприца в бьющееся сердце и медленно начинают отозвать поршень.</li>
		<li>Для оптимальной крови коллекции, используйте поршень иглы имитировать насосное действие сердца и избежать рисунок слишком быстро. 
		Примечание: Обычно около 1 мл крови могут быть собраны.</li>
		<li>После завершения сбора крови, развеять крови в пластиковых пробирок и распоряжаться шприца в Шарпс контейнер.</li>
		<li>После пункции сердца, осуществлять эвтаназии путем удаления вложений, соединяющий сердце. 
		Примечание: Гепарин, анти коагулянт, не был добавлен в шприц в этой процедуре до пункции сердца чтобы позволить крови свертываться для сбора сыворотки в рамках этого конкретного исследования. Однако, если исследователь хочет предотвратить свертывание крови для сбора плазмы, гепарин могут быть добавлены к шприцу до пункции сердца.</li>
	</ol></li> <li>Если исследование включает генотипирования мыши, СНиП часть уха с помощью ножниц и поместить в пластиковых пробирок для проверки генотипа.</li></ol>
 3. Добыча поджелудочной <ol><li>найдите желудка на левой стороне мыши. Начните мягко (с тем чтобы избежать разрывов) отделение поджелудочной железы от желудка и двенадцатиперстной кишки с помощью двух щипцами. 
	Примечание: При отключении поджелудочной железы из желудка и кишечника, это очень важно, что щипцы используются осторожно направлять в ткани поджелудочной железы от органов и чтобы не раздавить или сорвать поджелудочной железы с щипцами.
	<ol><li>Продолжать отделить поджелудочной железы от секций тощую и подвздошную кишку и наконец от caecum толстой кишки.</li>
	</ol></li> <li>В caecum, переместите щипцы и продолжать разделение поджелудочной железы вдоль оставшиеся толстой кишки к прямой кишке. 
	Примечание: На данный момент, это удобно вырезать и удалить часть из желудка в регионе Колон, непосредственно предшествующий прямой кишки.</li>
	<li>Найти поджелудочной железы и селезенки прилагается. Слайд поджелудочной железы к правой стороне мыши. Отделить остальные соединения между поджелудочной железы и грудной полости с щипцами для полного отсоединения поджелудочной железы и селезенки примыкающими к нему.</li>
	<li>Удаление поджелудочной железы и разложил его для осмотра. Оставляйте Хандра, придает поджелудочной железы для целей идентификации.
	<ol><li>Удалить все соединительной ткани, жира и брыжеечных ткани поджелудочной железы. 
		Примечание: Эта ткань белее цвет и таким образом может быть легко отличить от ткани поджелудочной железы, что pinker цвета. Это особенно важно, если необходимо удалить весь поджелудочной железы. Например, если поджелудочная железа необходимо взвесить и сравнить с веса тела или между группами животных. В Ptf1a cre / +; LSL-крас G12D / + модель мыши, особенно в старых месяцев, жесткий фиброзной ткани поджелудочной железы может присутствовать. В этом случае тщательное удаление поджелудочной железы должны проводиться как кишечника может быть переплетенный в опухолевой ткани. В запущенных случаях, Аномальные селезенки и печени ткани могут также присутствовать.</li>
	</ol></li> <li>Если потребуется, удалять других органов на данный момент.</li></ol>
 4. сбора и хранения данных <ol><li>после извлечения органов, переместить образцы в послеоперационной области для сохранения.</li>
	<li>Вес каждого органа и поместить их в их соответствующих криогенных флаконе. 
	Примечание: вдоль Витh массы каждого образца, любые нарушения должны быть записаны для дальнейшего использования.</li>
	<li>Как только органы взвешиваются, поместите их в жидкого азота для замораживания оснастки.</li>
	<li>После привязки замораживания, хранения органов-80 ° c для длительного хранения.</li>
	<li>Место формалин хранятся образцы на вершине скамейке на ночь и на следующее утро формалин изменить их решение на 70% этиловом спирте. 
	Примечание: Эти образцы должны храниться при температуре 4 ° C для долгосрочного хранения.</li>
	<li>Для длительного хранения, заморозить кровь и уха удар-80 ° c.. Для сбора сыворотки из крови позволяют крови свертывается на 30 минут, а затем центрифуга его. Удалите часть сыворотки с помощью пипетки и затем хранить на -80 ° C.</li>
</ol> 5. Очистить <ol><li>Sanitize рассечение инструменты с стерильным салфетки. Крышка трубки, выстроились с изофлюрановая пропитанные хирургические колодки. Замените хирургические площадки на плате пены свежие хирургические площадку. Распоряжаться части мыши, которые не были собраны в объекте &#39; s животных удаления политики.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+Survival+by+Histologic+Type+of+Pancreatic+Cancer.">Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).</li><li>Jackson-Grusby, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+in+mice.">Modeling cancer in mice.</a> Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).</li><li>Heid, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+requirement+of+Rac1+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preinvasive+and+invasive+ductal+pancreatic+cancer+and+its+early+detection+in+the+mouse.">Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse.</a> Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).</li><li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRAS2+Mutations+in+Human+Pancreatic+Acinar-Ductal+Metaplastic+Lesions+Are+Limited+to+Those+with+PanIN+Implications+for+the+Human+Pancreatic+Cancer+Cell+of+Origin.">KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin.</a> Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).</li><li>LaConti, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+serum+metabolomics+profiles+associated+with+malignant+progression+in+the+KrasG12D+mouse+model+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).</li><li>Ludwig, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveying+the+serologic+proteome+in+a+tissue-specific+kras(G12D)+knockin+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer.</a> Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).</li><li>Taylor, D. K., Mook, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+Waste+Anesthetic+Gas+Concentrations+Associated+with+the+Open-Drop+Method.">Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas.">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).</li><li>Auer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+frozen+tissue+storage+conditions+on+the+integrity+of+RNA+and+protein.">The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein.</a> Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).</li><li>Ma, J., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limbic+System+Participates+in+Mediating+the+Effects+of+General+Anesthetics.">Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics.</a> Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).</li><li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-&#946;+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression.">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-&#946; signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li><li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer.">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li><li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data.">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li><li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis:+Clinical+Profile,+Histology,+and+Natural+History+After+Resection.">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li></ol>

Авторы не имеют ничего сообщать.

Значение в отношении существующих методов В то время как существуют другие неофициальные видео мыши Анатомирование, это видео статья предусматривает первого профессионального качества, рецензируемых, демонстрация всех подробные шаги, необходимые для извлечения и уборки п...

Мышь стала важным животной модели людского поджелудочного рака1,2. В Ptf1acre / +; LSL-красG12D / + модель мыши, Кристен, крыса саркома (K-Ras) онкогена активируется исключительно в поджелудочной железы, что приводит к инициации предраковых поражений в поджелудочной железе, известный как поджелудочной железы интраэпителиальные неоплазии (Панины), что прогресс для протока поджелудочной аденокарциномы часто называют PDACs3. Эта система модель мыши обеспечивает один из лучших доступных животных моделей для людского поджелудочного рака4,5, с дополнительным преимуществом, что Панины появляются в течение первых пяти месяцев жизни, и часто прогресс PDAC внутри один год4,5, тогда как рак поджелудочной железы чаще всего происходит в организме человека 60-70 лет.
Извлечение поджелудочной железы путем рассечения от Ptf1acre / +; LSL-красG12D / + мышей в различном возрасте позволяет для подробного продольной гистологического исследования развития рака в поджелудочной железе, начиная с самых ранних этапов Панин через прогрессии PDAC3,4 , 5. заготовка поджелудочной железы в возрасте от пяти до пятнадцати месяцев может также использоваться для подготовки ткани экстракты характеризовать глобальные изменения в поджелудочной железы4 метаболизм, возникающие во время перехода от здоровых пораженной ткани 6,7.
Эта статья представляет собой полный визуальный руководство шагов, необходимых для выполнения извлечения поджелудочной железы мыши и обеспечивает руководящие принципы для хранения поджелудочной железы для дальнейшего анализа. Это руководство будет одинаково ценны для лиц, проведение исследований на другие заболевания поджелудочной железы, в том числе диабета типа и должны быть особенно полезны для студентов и следователи, новые исследования, с участием уборки поджелудочной железы мыши с помощью рассечение метаболические профили или гистологических анализов.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="790">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass Jar&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">3140-150</td>
			<td style="width:167px;">The glass jar used in the video has been discontinued.&#160; This is its replacement.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Lid of Glass Jar</td>
			<td style="width:288px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">9985-150</td>
			<td>The glass jar lid used in the video has been discontinued.&#160; This is its replacement.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">15 mL Falcon Tubes</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">9201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Squeeze bottle&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">03-409-10DD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">100% Ethanol</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">22-032-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">245-684</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Foam Boards</td>
			<td style="width:288px;">Therapak</td>
			<td style="width:119px;">562908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Forceps</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">200205SHN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1 mL 21G Syringes</td>
			<td style="width:288px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309624</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">50 mL Falcon Tubes</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2.0 mL Microcentrifuge Tubes&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">02-681-258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Surgical Pads</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">S67011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">T-Pins Length:&#160; 2&#34;&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Advance Store Products</td>
			<td>X32T-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sterilizing Wipes</td>
			<td style="width:288px;">Professional Disposables International Inc.</td>
			<td style="width:119px;">Q85084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sharps Container</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">14-827-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Analytical Balance</td>
			<td style="width:288px;">Marshall Scientific</td>
			<td style="width:119px;">ME-AE200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4L Dewar</td>
			<td style="width:288px;">Taylor-Wharton</td>
			<td style="width:119px;">4LD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shallow Wide Mouth Dewar</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">F3087-V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Floating Microtube Rack</td>
			<td style="width:288px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">60986-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile</td>
			<td style="width:288px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">10-500-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isothesia (Isoflurane)&#160;</td>
			<td style="width:288px;">Henry Schein Animal Health</td>
			<td style="width:119px;">050033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Liquid Nitrogen</td>
			<td style="width:288px;">Wright Brothers</td>
			<td style="width:119px;">NIT-60-XX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mouse Kras Strain</td>
			<td style="width:288px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:119px;">OO8179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Mouse Cre Strain</td>
			<td style="width:288px;">MMRRC</td>
			<td style="width:119px;">OOO435-UNC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of the mouse pancreas for histological analysis and metabolic profiling

Мы исследовали поджелудочной железы конкретных транскрипционный фактор, 1a cre рекомбиназа; жидкий кислород стоп lox Кристен крыса саркома, глицин аспарагиновой кислоты на 12 кодон (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) мыши штамм как модель людского поджелудочного рака. Цель нашего текущего исследования — определить Роман метаболических биомаркеров прогрессирования рака поджелудочной железы. Мы выполнили, метаболические профили мочи, Кала, крови и экстракты ткани поджелудочной железы, а также гистологический анализ стадии прогрессии рака поджелудочной железы. Поджелудочной железы мыши не четко твердые органов как в организме человека, но скорее диффузно распределенных мягких тканей, который не определен, легко люди знакомы с внутренней анатомии мыши или отдельными лицами, которые имеют мало или нет опыта выполнения Анатомирование орган мыши. Целью этой статьи является предоставить подробный скачкообразно демонстрация для новичков в удаления поджелудочной железы мыши рассечение. Эта статья должна быть особенно ценной для студентов и следователи новые исследования, который требует уборки поджелудочной железы мыши путем рассечения метаболические профили или гистологических анализов.

Рисунок 1 показывает обзор области операционной среды и Рисунок 2 показывает область операции пост. Хотя этот параметр обеспечивает минимальное количество оборудования и постановка, люди могут выбрать изменить это лучше всего подходя?...

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling at JoVE.com

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Это видео статья предоставляет подробную демонстрацию процедуры, требуемые для успешного удаления поджелудочной железы от мыши рассечение гистологический анализ и метаболические профили.

Рассечение поджелудочной железы мыши для гистологического анализа и метаболические профили

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

dissection-mouse-pancreas-for-histological-analysis-metabolic

Research

JoVE Journal

Medicine

36.2K Views.  Miami University. Это видео статья предоставляет подробную демонстрацию процедуры, требуемые для успешного удаления поджелудочной железы от мыши рассечение гистологический анализ и метаболические профили.

Video: Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Dissection of Human Vitreous Body Elements for Proteomic Analysis

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions between vitreous substructures and the retina underlie several vitreoretinal diseases, including retinal tear and detachment, macular pucker, macular hole, age-related macular degeneration, vitreomacular traction, proliferative vitreoretinopathy, proliferative diabetic retinopathy, and inherited vitreoretinopathies. 1,2 The molecular composition of the vitreous substructures is not known. Since the vitreous body is transparent with limited surgical access, it has been difficult to study its substructures at the molecular level. We developed a method to separate and preserve these tissues for proteomic and biochemical analysis. The dissection technique in this experimental video shows how to isolate vitreous base, anterior hyaloid, vitreous core, and vitreous cortex from postmortem human eyes. One-dimensional SDS-PAGE analyses of each vitreous component showed that our dissection technique resulted in four unique protein profiles corresponding to each substructure of the human vitreous body. Identification of differentially compartmentalized proteins will reveal candidate molecules underlying various vitreoretinal diseases.

This video shows an effective technique for differentiating and dissecting the various semi-transparent structures of the human vitreous body in post mortem eyes.

Препарирование прав Стекловидное Элементы орган для анализа протеомных

The vitreous is an optically clear, collagenous extracellular matrix that fills the inside of the eye and overlies the retina. 1,2 Abnormal interactions ...

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

Коллекция протокол для поджелудочной железы человека

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Whole Vitreous Humor Dissection for Vitreodynamic Analysis

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous studies have shown the results of such dissections, the detailed steps have not been described, precluding researchers outside the field from replicating their methods. Other studies harvest vitreous either through aspiration, which does not maintain the vitreous structure anatomy, or through partial dissection, which only isolates the vitreous core. The proposed method isolates the whole vitreous body, with the vitreous core and cortex intact, while maintaining vitreous anatomy and structural integrity. In this method, a full thickness scleral flap in an enucleated porcine eye is first created and through this, the choroid tissue can be separated from the sclera. The scleral flap is then expanded and the choroid is completely separated from the sclera. Finally the choroid-retina tissue is peeled off the vitreous to leave an isolated intact vitreous body. The proposed vitreous dissection technique can be used to study physical properties of the vitreous humor. In particular, this method has significance for experimental studies involving drug delivery, vitreo-retinal oxygen transport, and intraocular convection.

The goal of this protocol is to show an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes.

Всего Стекловидное тело Рассечение для Vitreodynamic анализа

The authors propose an effective technique to isolate whole, intact vitreous core and cortex from post mortem enucleated porcine eyes. While previous ...

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide new expandable sources of beta cells to alleviate the donor scarcity in human islet transplantation as therapy for diabetes. Although recent advances have been made towards this aim, mechanisms that regulate beta cell expansion and differentiation from a stem/progenitor cell remain to be characterized. Here, we describe a protocol for an injury model in the adult mouse pancreas that can function as a tool to study mechanisms of tissue remodeling and beta cell proliferation and differentiation. Partial duct ligation (PDL) is an experimentally induced injury of the rodent pancreas involving surgical ligation of the main pancreatic duct resulting in an obstruction of drainage of exocrine products out of the tail region of the pancreas. The inflicted damage induces acinar atrophy, immune cell infiltration and severe tissue remodeling. We have previously reported the activation of Neurogenin (Ngn) 3 expressing endogenous progenitor-like cells and an increase in beta cell proliferation after PDL. Therefore, PDL provides a basis to study signals involved in beta cell dynamics and the properties of an endocrine progenitor in adult pancreas. Since, it still remains largely unclear, which factors and pathways contribute to beta cell neogenesis and proliferation in PDL, a standardized protocol for PDL will allow for comparison across laboratories.

This protocol describes an injury model involving the surgical ligation of the pancreatic duct in the adult mouse pancreas, resulting in severe injury that establishes an environment that allows beta cell neogenesis and proliferation. This model can be used as a tool to study mechanisms involved in beta cell formation.

Хирургическое Травма поджелудочной железы мыши через перевязка панкреатического протока в качестве модели для эндокринной и экзокринной перепрограммирования и распространения

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

Do's and Don'ts in the Preparation of Muscle Cryosections for Histological Analysis

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of neuromuscular disorders. However, in order to do so, proper care needs to be taken when excising and preserving tissues to achieve optimal staining. One method of tissue preservation involves fixing tissues in formaldehyde and then embedding them with paraffin wax. This method preserves morphology well and allows for long-term storage at RT but is cumbersome and requires handling of toxic chemicals. Further, formaldehyde fixation results in antigen cross-linking, which necessitates antigen retrieval protocols for effective immunostaining. On the contrary, frozen sectioning does not require fixation and thus retains biological antigen conformation. This method also provides a distinct advantage in quick turn around time, making it especially useful in situations needing quick histological evaluation like intraoperative surgical biopsies. Here we describe the most effective method of preparing muscle biopsies for visualization with different histological and immunological stains.

Here we demonstrate the most efficient methods for freezing, embedding, cryosectioning, and staining of muscle biopsies to avoid freezing artifacts.

И что нельзя делать в подготовке мышц криосрезы для гистологического анализа

Histological evaluation of muscle biopsies has served as an indispensable tool in the understanding of the development and progression of pathology of ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

Модель мыши для трансплантации поджелудочной железы с помощью модифицированных манжеты

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Echocardiographic and Histological Examination of Cardiac Morphology in the Mouse

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed in mice is high. Phenotypic characterization of these mouse models also requires the examination of cardiac function and morphology. Echocardiography and magnetic resonance imaging (MRI) are commonly used approaches to characterize cardiac function and morphology in mice. Echocardiographic and MRI equipment specialized for use in small rodents is&#160;expensive and requires a dedicated space. This protocol describes cardiac measurements in mice using a clinical echocardiographic system with a 15 MHz human vascular probe. Measurements are performed on anesthetized adult mice. At least three image sequences are recorded and analyzed for each animal in M-mode in the parasternal short-axis view. Afterwards, cardiac histological examination is performed, and cardiomyocyte diameters are determined on hematoxylin-eosin- or wheat germ agglutinin (WGA)-stained paraffin sections. Vessel density is determined morphometrically after Pecam-1 immunostaining. The protocol has been applied successfully to pharmacological studies and different genetic animal models under baseline conditions, as well as after experimental myocardial infarction by the permanent ligation of the left anterior descending coronary artery (LAD). In our experience, echocardiographic investigation is limited to anesthetized animals and is feasible in adult mice weighing at least 25 g.

Echocardiographic examination is frequently used in mice. Expensive high-resolution ultrasound devices have been developed for this purpose. This protocol describes an affordable echocardiographic procedure combined with histological morphometric analyses to determine cardiac morphology.

Эхокардиографических и гистологической экспертизы сердечной морфологии в мышь

An increasing number of genetically modified mouse models has become available in recent years. Moreover, the number of pharmacological studies performed ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental insults that disturb placenta development or function can cause early pregnancy loss in mice and humans. Nevertheless, simple in vitro assays to screen for potential effects on placenta formation are lacking. Here, we focus on modeling the first and critical step in placenta formation, which consists of the attachment of the allantois to the chorion. We describe a method to rapidly assess the attachment of allantoic explants on immobilized &#945;4&#946;1 integrin, which serves as a chorio-mimetic substrate.This in vitro approach enables a qualitative evaluation of the attachment and spreading behavior of multiple allantois explants at different consecutive time points. The protocol may be used to investigate the effect of targeted mouse mutations, drugs, or various environmental factors that have been linked to pregnancy complications or fetal loss on allantois attachment ex vivo.

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

We describe an in vitro assay to model chorioallantoic attachment, the first step in placenta formation. The protocol demonstrates the dissection and explant culture of murine allantoides on immobilized &#945;4&#946;1 integrin. Allantois attachment is evaluated microscopically at pre-determined time points.

Рассечение и экспланта культуры мышиных Аллантоис для анализа в пробирке Allantoic вложения

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of aortic disease exist, in vivo imaging of the vasculature has been limited. In recent years, micro-computerized tomography (micro-CT) has emerged as a preferred modality for imaging both large and small vessels both in vivo and ex vivo. In conjunction with a method of vascular casting, we have successfully used micro-CT to characterize the frequency and distribution of aortic pathology in &#946;-aminopropionitrile-treated C57/Bl6 mice. Technical limitations of this method include variations in the quality of the perfusion introduced by poor animal preparation, the application of proper methodologies for vessel size quantification, and the non-survivability of this procedure. This article details a methodology for the intravascular perfusion of a lead-based radiopaque silicone rubber for the quantitative characterization of aortopathy in a mouse model of aneurysm and dissection. In addition to visualizing aortic pathology, this method may be used for examining other vascular beds in vivo or vascular beds removed post-mortem.

This article describes a detailed methodology of using a radiopaque lead-based silicone rubber to perfuse the murine vasculature for aortic diameter quantification in a mouse model of aortic aneurysm and dissection.

Количественный анализ микро CT Aortopathy в мышиной модели β-aminopropionitrile индуцированной аневризмы аорты и рассечение

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, nutrient absorption and distribution, and post-prandial glucose excursions. Understanding the molecular mechanisms that regulate gut hormone secretion is fundamental for understanding and translating gut hormone physiology. Traditionally, the mechanisms underlying gut hormone secretion are either studied in vivo (in experimental animals or humans) or using gut hormone-secreting primary mucosal cell cultures or cell lines. Here, we introduce an isolated perfused rat small intestine as an alternative method for studying gut hormone secretion. The virtues of this model are that it relies on the intact gut, meaning that it recapitulates most of the physiologically important parameters responsible for the secretion in in vivo studies, including mucosal polarization, paracrine relationships and routes of perfusion/stimulus exposure. In addition, and unlike in vivo studies, the isolated perfused rat small intestine allows for almost complete experimental control and direct assessment of secretion. In contrast to in vitro studies, it is possible to study both the magnitude and the dynamics of secretion and to address important questions, such as what stimuli cause secretion of different gut hormones, from which side of the gut (luminal or vascular) is secretion stimulated, and to analyze in detail molecular sensors underlying the secretory response. In addition, the preparation is a powerful model for the study of intestinal absorption and details regarding the dynamics of intestinal absorption including the responsible transporters.

Here, we present a powerful and physiological model to study the molecular mechanisms underlying gut hormone secretion and intestinal absorption &#8212; the isolated perfused rat small intestine.

Лежащие в основе кишки гормона с помощью изолированных механизмов увлажненную крыса тонкой кишки

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Рассечение поджелудочной железы мыши для гистологического анализа и метаболические профили

PLAYLIST