Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des neurosciences comportementales quant à savoir si une mutation génétique ou une variable environnementale peut avoir un impact sur les comportements sociaux ou l’acquisition et la rétention de souvenirs spacial. Les principaux avantages de ces techniques sont que les deux études peuvent être simplement construites avec un investissement financier minimal et qu’aucun des deux protocoles n’oblige les animaux à éprouver des stimuli extrêmes ou stressants. La méthode Demoiselle en détresse peut donner un aperçu des comportements pro-sociaux des souris, mais elle peut aussi être utilisée comme mesure d’empathie chez d’autres organismes modèles mammifères.
Avant de commencer la procédure d’essai barnes maze, nettoyer tous les composants du labyrinthe avec de l’eau et 70% d’éthanol. Lorsque les composants sont secs, assemblez le labyrinthe et assignez chaque souris au hasard à un trou cible à utiliser tout au long de la période d’essai. Les trous peuvent être étiquetés un à 20 sur le fond du labyrinthe ou à l’extérieur du périmètre du labyrinthe où ils ne sont pas visibles de l’intérieur du labyrinthe.
Pour commencer un test d’entraînement, remplacez le disque de trou assigné par une boîte noire de 23 par 11 centimètres et utilisez des élastiques et des crochets pour fixer fermement la boîte au labyrinthe. Ensuite, placez une souris au centre du labyrinthe Barnes sous une tasse et laissez la souris s’acclimater pendant 30 secondes. À la fin de la période d’acclimation, commencer l’enregistrement vidéo et allumer le fabricant de bruit léger et ultrasonique.
Soulevez la tasse à l’aide d’un mécanisme de corde pour éviter de biaiser le cap initial de l’animal et démarrez une mise à jour derrière un rideau d’observation. Suivez les mouvements de l’animal sur un morceau de papier à l’aide d’un diagramme du labyrinthe et utilisez le diagramme pour analyser les stratégies de recherche de la souris ainsi que pour déterminer le nombre de trous qui ont été explorés dans le quadrant en face de la cible. Lorsque la souris entre dans le trou cible, couvrez le trou d’un liant opaque lourd et éteignez le générateur de bruit ultrasonique.
Si la souris n’est pas entrée dans la cible après cinq minutes, corral l’animal dans le trou cible. Ensuite, laissez la souris rester dans la boîte cible pendant une minute intacte, en s’assurant d’éteindre le bruit ultrasonique. Ensuite, retournez l’animal dans sa cage.
Lorsque toutes les souris ont été testées, examinez manuellement leur enregistrement pour suivre le mouvement global de la souris afin de déterminer le nombre de trous incorrects explorés avant et après la présence de la cible, ainsi que le nombre de trous du trou cible au premier trou exploré et tout comportement de toilettage notable. Pour le comportement exploratoire Damsel en test de détresse, placez une chambre de stress fermée et vide au centre d’une arène d’empathie et commencez à enregistrer avec la caméra suspendue. Placez doucement une souris mâle sous une tasse dans le coin inférieur gauche de l’arène pendant 30 secondes.
Ensuite, retirez la tasse via un mécanisme de chaîne et laissez la souris explorer pendant 10 minutes en prenant soin de rester hors du champ de vision pendant l’enregistrement. À la fin de la période d’exploration, déplacez la souris de l’arène dans une cage de détention pendant cinq minutes et arrêtez-vous et enregistrez l’enregistrement. Pour la réactivité sociale Demoiselle dans les tests de détresse, retenez doucement manuellement une souris femelle et abaissez la souris dans une chambre de retenue.
Fermez l’extrémité ouverte de la chambre derrière la souris et confirmez que la souris est incapable de faire demi-tour. Commencez à enregistrer avec la caméra suspendue et placez la chambre de retenue à l’intérieur au centre de l’arène. Laissez l’animal s’acclimater pendant 10 minutes en prenant soin de rester hors du champ de vision.
Ensuite, transférez la souris mâle de la zone de fixation dans l’arène de l’empathie pendant 10 secondes et laissez à la souris mâle cinq minutes supplémentaires pour explorer l’arène en prenant soin de rester hors du champ de vision. À la fin de la période d’exploration, arrêtez-vous et enregistrez le fichier vidéo et retournez les deux souris dans leurs cages. Ensuite, remplacez la literie de maïs et assainir l’aréna et la chambre de stress par 70 % d’éthanol.
Pour analyser les données, ouvrez le fichier vidéo dans le logiciel de suivi approprié et placez une feuille transparente sur l’écran. Décrivent le carré de l’arène avec un marqueur et divisez le carré de l’arène en neuf compartiments égaux. Passez en revue les données vidéo pendant les cinq premières minutes de la mesure exploratoire initiale enregistrant le nombre de compartiments traversés, le temps passé dans la place centrale de l’arène, le nombre d’épisodes de creusement et de toilettage, et le nombre de fois où la souris a touché la chambre de retenue centrale vide.
Ensuite, passez en revue les données vidéo pendant les cinq minutes de la mesure de réactivité sociale immédiatement après que le mâle est réintroduit dans l’arène avec la femelle piégée enregistrant les mêmes données que pour la mesure exploratoire initiale, mais en ajoutant le suivi du nombre de fois que la souris mâle a touché le nez avec la souris femelle piégée. Lorsque les nouveau-nés formés par Barnes Maze sont exécutés à l’âge adulte dans le cadre d’un seul essai à long terme, les souris injectées à l’éthanol ont plus de difficulté à se rappeler où se trouvait le trou cible que les animaux témoins injectés salins. Les souris traitées à l’éthanol explorent également beaucoup plus de trous dans le quadrant opposé de la cible, ce qui indique qu’elles ne se souviennent pas de l’emplacement spacial général correct et utilisent un trou séquentiel pour trouer la recherche de façon en forme d’anneau jusqu’à ce que le trou soit trouvé.
Dans le modèle Damsel in Distress, les souris plus âgées traversent plus de carrés que les souris plus jeunes. En présence d’une femelle piégée cependant, les souris mâles des deux âges passent moins de temps à explorer l’arène. Les mâles juvéniles passent plus de temps à creuser pendant leur temps dans l’arène en présence d’une souris femelle piégée que lorsqu’ils sont seuls à suggérer de l’anxiété ou un comportement pro-social envers la femelle piégée.
En revanche, les souris mâles touchent le tube contenant la femelle piégée et initient le contact femelle emprisonné beaucoup plus fréquemment à l’âge adulte qu’en tant que juvéniles. Tout en essayant cette procédure, il est important de se rappeler de maintenir les conditions constantes entre et à l’intérieur des essais pour s’assurer que les variables environnementales ne confondent pas les résultats de l’étude. Après l’utilisation initiale de ces analyses comportementales, les mêmes animaux peuvent être retestés à différents moments au cours du développement pour répondre à des questions sur la mémoire à long terme et les changements possibles dans les comportements sociaux.
