Ce protocole peut être utilisé pour prédire et atténuer les effets néfastes des pesticides sur les abeilles solitaires. Le principal avantage de cette technique est de simuler l’alimentation larvaire avec des pesticides résiduels dans les provisions. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle car les caractéristiques biologiques d’Osmia excavata sont uniques par rapport aux abeilles sociales, et peu de recherches ont été menées sur O.excavata, en particulier la larve.
Pour préparer le tube d’alimentation, percez un trou de 0,3 millimètre de diamètre dans le couvercle d’un tube de centrifugeuse de deux millilitres à l’aide d’un fer à enroulement électrique. Pour préparer le pesticide, dissoudre le pesticide de qualité technique dans de l’acétone pour acquérir des solutions mères de 10 milligrammes par millilitre, puis effectuer des dilutions de gradient de la solution à plus de cinq concentrations. Ensuite, acquérez des tubes d’abeilles en plastique contenant des provisions et des larves d’Osmia excavata nouvellement écloses d’un programme d’élevage de masse.
À l’aide d’une brosse douce, séparez doucement la larve des provisions, sélectionnez les larves femelles en fonction de la taille de l’approvisionnement et de la position de la cellule dans le nid, puis placez les provisions de taille uniforme avec la larve femelle sélectionnée dans des boîtes de Petri de 60 millimètres de diamètre et mettez-les de côté pour utilisation. Avant de procéder au traitement au pesticide, peser les dispositions. Pour traiter les provisions avec des pesticides, il faut d’abord mesurer le volume de la solution de pesticide.
Ensuite, faites tremper les provisions sélectionnées uniformément dans les solutions de pesticides diluées pendant 10 secondes. Après avoir traité les provisions avec le pesticide, mesurez à nouveau le volume des solutions pesticides. Après séchage à l’air libre des provisions sur une table de travail stérile, ajoutez-les aux tubes de centrifugeuse préparés avec des trous.
Ensuite, pesez 60 larves femelles et, à l’aide d’une brosse douce, transférez les larves à la surface des provisions séchées naturellement, en ajoutant une larve par tube. Élevez les larves dans une chambre de croissance dans l’obscurité à plus ou moins deux degrés Celsius avec une humidité relative de 65 à 75%. Pour l’essai de toxicité létale aiguë, mesurer la mortalité de la larve après avoir été placée sur le traitement et les dispositions de contrôle pendant 48 heures.
Ensuite, peser les provisions restantes après 48 heures d’élevage d’insectes pour déterminer la quantité de provisions consommée par chaque larve, puis en utilisant cette formule, calculer la dose de pesticide à chaque concentration consommée par chaque larve en fonction du pourcentage de fourniture consommée et de la teneur en pesticide dans chaque disposition. Pour le test de toxicité sublétale, observez l’O.excavata quotidiennement pendant le cocooning sous des lampes à lumière noire pour mesurer la durée de développement larvaire. Pesez ensuite les larves après 14 jours de traitements pour déterminer le gain de poids larvaire.
Ensuite, peser les provisions restantes après 14 jours d’alimentation pour calculer la consommation et l’efficacité de la conversion des aliments ingérés. Et examinez le nombre d’éclosions en tirant sur les cocons à l’aide d’un petit ciseau lorsque les abeilles témoins émergent chez les adultes. L’essai de toxicité létale aiguë a montré que la DL50 du chlorpyrifos pour les larves d’O.excavata était de 0,001 microgramme par abeille.
Dans l’essai de toxicité sublétale, à mesure que la dose augmentait, les valeurs d’indice du gain de poids larvaire, de la consommation et de l’efficacité de la conversion des aliments ingérés diminuaient pour les traitements, les valeurs les plus basses par rapport au témoin observées dans les 0,013 microgrammes de chlorpyrifos par abeille. Inversement, la durée de développement larvaire la plus longue a été observée dans 0,016 microgramme de chlorpyrifos par abeille, par rapport au traitement témoin. L’évaluation de l’impact du chlorpyrifos sur le taux d’eclosion a révélé une relation linéaire négative significative entre les doses ingérées de chlorpyrifos et le taux d’eclosion d’O.excavata.
Le taux d’éclosion était considérablement plus faible lorsque les doses ingérées dépassaient 0,02 microgramme par abeille que celles du traitement témoin. Dans ce protocole, il est essentiel de vérifier les dispositions de taille uniforme afin de minimiser l’erreur de test. Cette technique est utile pour explorer les effets des pesticides sur le vol adulte et la fécondité des abeilles solitaires, résolvant ainsi les problèmes de faible taux de récupération et de déclin de la population.
