La micropropagation des coraux en est encore à ses balbutiements. L’optimisation des protocoles de sauvetage des polypes est essentielle pour combler cette lacune permettant aux scientifiques d’utiliser les polypes comme modèles pour étudier les coraux dans des environnements de laboratoire. Le renflouement des polypes permet de créer de multiples multiplications à partir de petits fragments de corail.
Les polypes peuvent être utilisés dans différentes expériences facilitant l’observation de processus microscopiques chez les coraux, par exemple. Les récifs coralliens sont menacés. Notre objectif est d’utiliser ce modèle reproductible pour développer des stratégies visant à protéger les coraux du blanchiment et d’autres menaces environnementales de manière efficace et non invasive.
Cette méthode pourrait aider à étudier la physiologie du corail, les interactions du microbiome de l’hôte et les mécanismes impliqués dans le blanchiment. De telles découvertes peuvent contribuer à l’optimisation des probiotiques coralliens, par exemple. L’utilisation d’eau de mer avec une salinité adéquate est la clé.
La salinité doit commencer au niveau de l’environnement naturel du corail et augmenter lentement afin que le stress ne soit pas excessivement nocif. Collecter les polypes au bon moment et choisir ceux qui sont les plus intacts est crucial pour leur survie. Une démonstration visuelle peut être vitale pour comprendre ces indices.
Tout d’abord, utilisez des pinces de coupe diagonales pour couper de petits fragments d’une colonie de corail, puis placez-les dans de petites boîtes de Pétri remplies de 12 millilitres d’eau de mer auxquelles la colonie de corail a été acclimatée. Laissez la plaque ouverte pendant environ 24 heures à température ambiante afin que l’eau s’évapore et que sa salinité augmente progressivement. Lorsque la digestion des tissus est observable entre les polypes, utilisez une pipette de transfert de 1 millilitre pour créer un écoulement doux près du tissu corallien.
L’écoulement aidera lentement à compléter le détachement des polypes qui ont déjà digéré le tissu autour d’eux du squelette, puis avec la pipette, échangez lentement l’eau dans la boîte de Petri avec de l’eau isosmotique. Pour préparer de l’eau de mer à haute salinité, prenez de l’eau de mer normale et ajoutez du chlorure de sodium à l’eau de mer pour préparer trois litres d’eau de mer à haute salinité jusqu’à ce que la salinité augmente de 85% Après avoir coupé de petits fragments de corail comme démontré précédemment, mettez-les dans un récipient de 10 litres avec trois litres d’eau de mer isosmotique connecté à une pompe péristaltique. Remplissez ce récipient avec trois litres d’eau de mer à haute salinité préalablement préparée pendant 24 heures à raison de 126 millilitres par heure pour augmenter la salinité d’environ 40% À l’aide d’une pipette, créez un flux d’eau doux pour libérer les polypes du squelette.
Échangez lentement l’eau dans le récipient avec de l’eau de mer isosmotique. Ajouter 26,29 grammes de chlorure de sodium, 0,872 gramme de chlorure de potassium, 2,16 grammes de sulfate de magnésium, 11,94 grammes de chlorure de magnésium, 3,42 grammes de sulfate de sodium et 0,26 gramme de bicarbonate de sodium à un litre d’eau désionisée pour préparer de l’eau de mer sans calcium, puis remplir les boîtes de Petri avec cette eau de mer sans calcium. Après avoir coupé de petits fragments de corail, immergez-les dans de l’eau de mer sans calcium dans les boîtes de Pétri.
Mettez les plats dans un incubateur orbital pendant trois heures à une vitesse de rotation de 80 tr / min, puis transférez les fragments dans des boîtes de Petri remplies de 20% de DMEM préparées avec de l’eau de mer artificielle de 40 unités de salinité pratiques et contenant 100 milligrammes par litre d’ampicilline. Incuber les fragments à 26 degrés Celsius et 80 tr/min. Échangez le milieu tous les jours jusqu’à ce que la digestion des tissus soit observable entre les polypes et que les polypes individuels commencent à se détacher du squelette, puis transférez les polypes dans de l’eau de mer stérilisée et incubez pendant une heure.
Une fois que les polypes sont renvoyés dans de l’eau de mer filtrée avec une salinité non stressante, sélectionnez les polypes viables en observant l’intégrité des tissus et le mouvement causés par l’écoulement ciliaire sous un stéréomicroscope. Placez les polypes sélectionnés dans une boîte de Pétri et recouvrez la boîte de Pétri d’un filet planctonique de 200 micromètres afin que les polypes ne flottent pas loin du plat. Placez la boîte de Petri à l’intérieur d’un aquarium avec des conditions appropriées pour les espèces de coraux utilisées.
Pour éviter la prolifération d’algues, ouvrez la boîte de Petri au moins une fois par semaine pour renouveler l’eau et nettoyer la boîte. Après avoir sélectionné les polypes comme indiqué précédemment, à l’aide d’une pipette de transfert, placez-les dans une fiole de cellule de surface de 75 centimètres carrés remplie de 50 millilitres d’eau de mer isosmotique, puis fermez la fiole et mettez-les dans un incubateur réglé à des cycles de lumière de 12 heures, 26 degrés Celsius et 40 tr / min. Si la fiole est remplie d’algues ou de biofilms, transférez le contenu dans une fiole propre.
Dans cette étude, le renflouement des polypes a été induit par trois méthodes différentes. La méthode d’évaporation de l’eau a entraîné un renflouement complet dans les 24 heures suivant l’incubation, et la salinité est passée de 40 à 59 unités de salinité pratiques après 24 heures. La méthode d’approvisionnement en eau salée a également entraîné le sauvetage des polypes après 24 heures d’incubation.
Ici, la salinité est passée de 40 à 52 unités de salinité pratiques après 12 heures d’incubation, puis à 59 unités de salinité pratiques après 24 heures. L’induction de sauvetage par incubation dans de l’eau de mer sans calcium était terminée après trois heures d’incubation de polypes, suivie de 20 heures d’incubation dans le milieu DMEM à 20%, Dans les trois méthodes, des polypes coralliens individualisés ont pu être générés. Les polypes coralliens générés par la méthode d’évaporation pourraient survivre pendant six semaines, tandis que ceux produits par la méthode d’approvisionnement en eau de mer à haute salinité pourraient survivre pendant huit semaines dans des boîtes de Pétri à l’intérieur des aquariums.
Les polypes obtenus à partir de la méthode d’évaporation de l’eau de mer conservés dans des flacons de culture cellulaire à l’intérieur des incubateurs ont survécu jusqu’à trois semaines sans dissociation complète de leurs tissus. Lors du détachement des polypes du squelette, il est important d’être doux. S’ils ne sont pas complètement détachés, forcer le détachement en pipetant fortement l’eau causera des dommages et des taux de survie plus faibles.
En utilisant ces méthodes, le tassement des polypes peut être induit. La colonisation des polypes peut répondre aux questions sur ses processus de calcification et de croissance. Après le développement de l’induction du renflouement des polypes, les chercheurs ont pu étudier la formation initiale du squelette de corail et visualiser directement le blanchiment des coraux à l’échelle des polypes.
