La métabonomie mesure les réponses métaboliques globales et dynamiques et est cohérente avec la détermination de l’efficacité globale de la médecine traditionnelle chinoise. Les changements dans les composants du médicament dus à la réponse métabolique du corps peuvent être déterminés avec la métabonomique. La portée du criblage des ingrédients actifs de la MTC peut être réduite en utilisant cette technique.
L’unilatéralité peut être évitée en étudiant les constituants individuels. Cette méthode peut être simultanée, déterminer les métabolites endogènes et les constituants exogènes absorbés dans le sang. La métabonomie a été largement utilisée dans des études sur la MTC, la toxicologie des médicaments, la gestion de la santé, le sport, l’alimentation et d’autres domaines.
Pour commencer, déterminez l’extrait requis de Cyperi rhizoma, ou CR, ou Cyperi rhizoma traité avec du vinaigre, ou CRV, pour traiter un groupe de six rats Sprague Dawley pendant trois jours. Calculez le volume de CR ou CRV à appliquer par rat à l’aide de cette équation. Pour traiter le CRV, mélangez soigneusement 100 grammes de CR et 20 grammes de vinaigre, qui contient plus de 5,5 grammes d’acide acétique pour 100 millilitres, et incuber pendant 12 heures.
Après l’incubation, faites sauter le mélange dans une poêle en fer pendant 10 minutes à 110 à 120 degrés Celsius. Ensuite, retirez le mélange et laissez-le refroidir à température ambiante. Pour préparer l’extrait CR, faites tremper le CR pendant deux heures avec de l’eau pure 10 fois la quantité de CR prise, en vous assurant que les matières médicinales sont inférieures au niveau du liquide.
Ensuite, portez le mélange d’eau et de médicament à ébullition à feu vif et maintenez-le bouillir à feu doux pendant 20 minutes. Ensuite, filtrez le contenu à travers une toile filtrante à 100 mailles et collectez le filtrat. Ensuite, concentrez le filtrat recueilli dans un extrait avec un évaporateur rotatif à raison d’un gramme par millilitre.
Pour préparer l’extrait CRV, effectuez les étapes de trempage, d’ébullition et de concentration comme démontré pour l’extraction CR. Pour tester les extraits CR et CRV, pipeter 500 microlitres de l’extrait à 500 microlitres de méthanol dans des tubes microcentrifuges de 1,5 millilitre et vortex pendant 30 secondes pour mélanger. Centrifuger les échantillons pendant 15 minutes à 16 500 g à quatre degrés Celsius.
Ensuite, retirez le surnageant et transférez-le dans le flacon d’échantillon pour le test. Après avoir testé les échantillons, effectuez l’analyse en composantes principales, ou ACP, et la modélisation à l’aide du logiciel d’analyse. Importez les données standardisées des métabolites dans le logiciel, puis utilisez Autofit pour créer le modèle d’analyse.
Enfin, utilisez les scores pour obtenir le nuage de points de l’ACP. Pour effectuer l’analyse discriminante orthogonale partielle du moindre carré, ou OPLS-DA, importez les données normalisées sur les métabolites et les groupes CR et CRV dans le logiciel. Ensuite, importez les données CR et CRV dans leurs groupes respectifs créés.
Ensuite, utilisez Autofit pour générer le modèle d’analyse et utilisez le score pour obtenir le nuage de points de score de l’OPLS-DA. Enfin, utilisez VIP pour obtenir la signification variable dans la projection ou la valeur VIP dans l’OPLS-DA. Pour identifier les métabolites potentiellement différentiels, éliminez les métabolites dont la valeur VIP est supérieure à un.
Ensuite, utilisez le logiciel statistique pour calculer la valeur P des métabolites dépistés par le test T de l’élève. Ensuite, pour identifier les métabolites différentiels, utilisez les métabolites annotés et filtrez les métabolites différentiels à apparier dans la base de données KEGG. Montrer les changements dans les métabolites différentiels dans les groupes CR et CRV en dessinant une carte thermique.
Pour examiner les voies métaboliques potentielles, consultez la base de données MetaboAnalyst. Utilisez l’analyse des voies pour télécharger les différents métabolites afin d’obtenir les voies métaboliques potentielles. Téléchargez les différents métabolites dans la base de données KEGG pour analyser les voies métaboliques potentielles.
L’expérience de modèle de dysménorrhée analysée a montré des différences significatives dans les niveaux de prostaglandines. Les rats des groupes CR et CRV modèles ont présenté des réactions de torsion substantielles après l’injection d’ocytocine. Les résultats de l’analyse de l’ACP ont démontré que les grappes de RC et de CRV par rapport aux groupes modèles étaient significativement séparées dans les modes d’ions positifs et négatifs.
L’OPLS-DA a été utilisé pour dépister les différences métaboliques, et les résultats du nuage de points ont démontré que les groupes RC et CRV étaient séparés. Des analyses statistiques univariées ont été effectuées pour identifier les variations métaboliques. Un tracé de volcan est montré, dans lequel chaque point correspond à un métabolite différent.
Des changements significatifs ont été observés dans 63 métabolites en mode positif et 30 en mode négatif. Les métabolites différentiels ont été déterminés à l’aide des bases de données KEGG et HDMB, et les composés appariés avec précision ont été répertoriés. Les valeurs quantitatives des métabolites différentiels entre les groupes CR et CRV ont été calculées et regroupées.
Les taches de couleur indiquent comment chaque métabolite est exprimé par rapport aux autres. Par rapport au groupe CR, les niveaux de quatre métabolites différentiels dans le groupe CRV ont augmenté tandis que 11 métabolites ont diminué en mode ion positif. Dans le cas du mode ion négatif, quatre métabolites différentiels ont augmenté et sept métabolites ont diminué.
Les résultats de l’analyse de la voie KEGG ont montré que les métabolites différentiels étaient associés à neuf voies dans les modes positif et négatif. Plus il y a de métabolites différentiels, meilleurs sont les résultats, de sorte que suffisamment de voies métaboliques peuvent être liées et que les principales voies métaboliques criblées seront plus précises.
