Amélioration des modèles de lipofuscine et quantification de la capacité de phagocytose du segment externe dans des cultures épithéliales de pigments rétiniens humains hautement polarisés

Alors que la lipofuscine s’accumule universellement dans l’EPR avec le vieillissement, discerner sa toxicité a été difficile. Ici, nous développons des protocoles qui nous permettent de développer une accumulation de type lipofuscine dans des cultures d’EPR hautement polarisées et matures pour aider à discerner les effets de la lipofuscine sur la physiologie de l’EPR. L’étude de la toxicité de la lipofuscine chez l’homme est confondue par le fait que la lipofuscine diminue à mesure que l’EPR meurt.

Les modèles animaux de toxicité de la lipofuscine ont eu des résultats très disparates. Nous avons soigneusement créé des modèles in vitro d’accumulation de matériaux de type lipofuscine pour faciliter l’étude de la toxicité de la lipofuscine. La clé du succès de nos modèles est de maintenir des cultures hautement différenciées tout en induisant la genèse de la lipofuscine via le même processus qui déclenche la lipofuscine in vivo, à savoir la phagocytose des segments externes des photorécepteurs.

Notre protocole in vitro est unique en ce sens que le matériel de type lipofuscine s’accumule dans des cultures d’EPR hautement différenciées pour imiter fidèlement l’EPR in vivo. Dans ces circonstances, nous avons constaté que les cultures d’EPR sont très résistantes à l’accumulation de lipofuscine et à l’effet toxique de la lipofuscine. De plus, dans le processus d’analyse des phénotypes induits par l’accumulation de type lipofuscine dans nos cultures d’EPR, nous avons créé un nouveau type de test de phagocytose appelé capacité totale de consommation.

Ce test nous permet de déterminer la capacité totale de l’EPR à phagocyter les segments externes tout en évitant certaines des interprétations confondantes qui accompagnent les tests classiques de phagocytose par pouls. Nous sommes ravis d’utiliser ce modèle d’accumulation de matériaux de type lipofuscine pour mieux comprendre quels facteurs de stress RPE peuvent amener la lipofuscine normalement inerte à jouer un rôle plus pathologique dans la mort des cellules EPR.