Yüksek Polarize İnsan Retinal Pigment Epitel Kültürlerinde Geliştirilmiş Lipofussin Modelleri ve Dış Segment Fagositoz Kapasitesinin Ölçülmesi

Lipofussin yaşlanma ile birlikte RPE'de evrensel olarak birikirken, toksisitesini ayırt etmek zor olmuştur. Burada, lipofuscin'in RPE fizyolojisi üzerindeki etkilerini ayırt etmeye yardımcı olmak için yüksek polarize ve olgun RPE kültürlerinde lipofussin benzeri birikim geliştirmemize izin veren protokoller geliştiriyoruz. İnsanlarda lipofussin toksisitesinin incelenmesi, RPE öldükçe lipofuscinin azalması gerçeğiyle karıştırılmaktadır.

Lipofussin toksisitesinin hayvan modelleri çok farklı sonuçlara sahiptir. Lipofussin toksisitesinin incelenmesini kolaylaştırmak için lipofussin benzeri materyal birikiminin in vitro modellerini dikkatlice oluşturduk. Modellerimizin başarısının anahtarı, lipofuscin in vivo'yu tetikleyen aynı işlemle, yani fotoreseptör dış segmentlerinin fagositozuyla lipofussin genezini indüklerken, oldukça farklılaşmış kültürleri korumaktır.

İn vitro protokolümüz, lipofussin benzeri materyalin, RPE'yi in vivo olarak sadık bir şekilde taklit etmek için oldukça farklılaşmış RPE kültürlerinde birikmesi bakımından benzersizdir. Bu koşullarda, RPE kültürünün lipofusin birikimine ve lipofuscinin toksik etkisine karşı oldukça dirençli olduğunu bulduk. Ek olarak, RPE kültürlerimizde lipofussin benzeri birikimin neden olduğu fenotipler için tahlil sürecinde, toplam tüketim kapasitesi adı verilen yeni bir fagositoz testi türü oluşturduk.

Bu tahlil, RPE'nin dış segmentleri fagositoz haline getirme kapasitesinin tamamını belirlememize izin verirken, klasik nabız kovalama fagositoz tahlilleriyle birlikte gelen bazı kafa karıştırıcı yorumlardan kaçınmamızı sağlar. RPE stresörlerinin normalde inert lipofuscin'i RPE hücre ölümlerinde daha patolojik bir role sokabileceğini daha iyi anlamak için bu lipofussin benzeri materyal birikimi modelini kullanmaktan heyecan duyuyoruz.