אבי העורקים צמצום רוחבי של עכברים

Summary

היצרות העורקים רוחבי (TAC) על העכבר הוא מודל ניסיוני נפוץ ללמוד המנגנונים היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב הפיתוח. כאן אנו מתארים נהלים להתכווץ אבי העורקים כדי ליצור תואר לשחזור של היפרטרופיה לב בעכברים.

Abstract

היצרות העורקים רוחבי (TAC) על העכבר הוא מודל ניסיוני נפוץ ללחץ עומס יתר הנגרמת היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב.

Protocol

חלק 1: הכנת שדה הפעלה

1. השדה ההפעלה ולחטא עם אלכוהול איזופרופילי 75%.
2. ודא את כרית החימום פועל בטמפרטורה הנכונה. המערכת המומלצת היא משאבת מים Gaymar במחזור מחובר כרית טיפול זה נשמר ב 37 ° C ± 1 ° C. חשוב לשמור על חום גוף תקין במהלך הניתוח כדי למנוע ירידה מהירה בקצב הלב.
3. כלים כירורגיים הם מעוקרים מעקר חרוז חם לפני הניתוח. עבור הליך זה, תזדקק מכשירי ניתוח הבאים: מספריים קהים, מעוקל כמובן מלקחיים X 2, קנס 45 ° מלקחיים זווית X 2, מספריים באביב זוויתי, מפשק החזה, בעל מחט.
4. Applicators כותנה צריך להיות על היד במקרה של דימום.

חלק 2: הכנה אינטובציה של עכברים

1. עכברים מורדמים בתא אינדוקציה עם 2% isoflurane מעורבב עם 0.5 -1.0 L / min 100% O _2.
2. קוצץ שיער משמשים לגלח את הפרווה מן הצוואר עד גובה החזה באמצע.
3. העכבר ממוקם בתנוחה אופקית על גבי כרית חימום על מנת לשמור על טמפרטורת הגוף.
4. גומייה מונחת על השיניים הקדמיות של החיה להאריך את הצוואר. בעזרת מלקחיים מעוקל ביד אחת, הלשון היא מניפולציה בעדינות הצידה. עם זאת, אינטובציה endotracheal מבוצע באמצעות צינורות PE 90. הצינורית מחוברת endotracheal מכן אופניים נפח באופניים מכרסם הרווארד ההנשמה ב 125-150 נשימות / דקה נפח אדיר של 0.1-0.3ml. במהלך ההליך הכירורגי, הרדמה נשמר 1.5-2% isoflurane עם 0.5-1.0 L / min 100% O _2. נכון ברמה של הרדמה מאומת על ידי הפעלת לחץ על המיטה עכבר מסמר (הבוהן קמצוץ רפלקס).
5. בתחום כירורגית ולחטא עם פתרון בבטאדין ואחריו אלכוהול 70%. הליך זה חוזר על עצמו שלוש פעמים.
6. כדי למנוע זיהום של שדה כירורגי במהלך המבצע, לעטוף סטרילית מושם על העכבר ומשאיר רק את שדה הניתוח נחשף.
7. סט של כפפות סטריליות משמש עכבר בנפרד.

חלק 3: קשירת של האאורטה רוחבי

1. פתיחת בית החזה חלקי הצלע השנייה מבוצעת תחת מיקרוסקופ ניתוחי עצם החזה חזר בו באמצעות מפשק החזה.
2. טיפ פיין 45 ° זווית מלקחיים המשמשים בעדינות להפריד את רקמת בלוטת התימוס ושומן מן קשת אבי העורקים.
3. בעקבות זיהוי של האאורטה רוחבי, חתיכה קטנה של תפר 6.0 משי ממוקם בין עורקי הראש innominate ושמאל (איור 1).
4. שני קשרים רופפים קשורות סביב האאורטה רוחבי פיסה קטנה של 27 ½ מחט קהה מד ממוקם במקביל האאורטה רוחבי. הקשר הראשון קשור במהירות נגד מחט, ואחריו השני המחט להסיר מיד כדי להניב צמצום של 0.4mm קוטר. בעכברים דמה השליטה, ההליך כולו הוא זהה, למעט קשירת של האאורטה.
5. מפשק חזה מוסר לבין יצוא של מהמנשים צבט למשך 2 שניות מחדש לנפח את הריאות.
6. כלוב הצלעות נסגר באמצעות תפרים 6.0 prolene עם דפוס תפר קטע.
7. העור הוא נסגר באמצעות תפרים 6.0 prolene עם דפוס תפר מתמשך.

חלק 4: לאחר ניתוח שחזור

1. עבור כאבים שלאחר הניתוח, העכבר מוזרק עם עצירות (0.1 מ"ג / ק"ג) intraperitoneally. אם יש סימנים של התייבשות לאחר הניתוח, תמיסת מלח סטרילית ניתנת intraperitoneally.
2. הרדמה היא הורידה בהדרגה למצב כבוי ואת הצינור endotracheal מוסר כאשר סימנים של נשימה ספונטנית להתרחש.
3. העכבר הוא עבר לתפקיד המועדים ואיפשר להתאושש על כרית חימום.

חלק 5: אישור של קשירת מוצלח של האאורטה רוחבי

1. שבוע לאחר TAC, העכבר מחדש מרדים כדי לקבוע את מידת עומס יתר לחץ המושרה על ידי קשירת של האאורטה רוחבי. כפי שתואר לעיל, הרדמה נשמר 1.5-2% isoflurane עם 0.5-1.0 L / min 100% O ₂ ו - טמפרטורת הגוף נשמר על 37 ° C ± 1 ° C.
2. 20 MHz דופלר בדיקה מושם על הצדדים על ימין ועל שמאל של הצוואר ב 45 ° זווית לזהות מהירויות הזרימה. מחשב מבוסס מעבד אות דופלר (האינדוס מכשירים, ביוסטון, טקסס) שימש כדי להציג ולאחסן אותות דופלר. ⁵
3. בהתאם למידת העומס הלחץ הנדרש עבור פרוטוקול הניסוי, עכברים רק עם הראש ימינה (RC) / שמאל התרדמה (LC) יחס תזרים בטווח מסוים נכללות לניתוח נוסף. לדוגמה, מידה מתונה של עומס יתר לחץ מוביל ביחס של 5-8, בעוד ההתכווצות הדוקה וכתוצאה מכך עומס יתר לחץ חמור מוביל toa יחס של 10/08 (איור 5.3A). חיה דמה (אך לא פעלה ligated), לעומת זאת, צפויה להיות יחס של ~ 1 (איור 5.3B).

6: תוצאות נציג

הישרדות כירורגית טיפוסי הבאים TAC ב wild-type עכברים הוא כ 80-90%. קשירת כירורגי מוצלח של האאורטה רוחבי תוביל יחס מהירות זרימת דופלר בין העורק הראשי על ימין ועל שמאל (RC / LC) של 50-10 (איור 1). בהשוואה דמה פעולה עכברים (איור 2 א), בעכברים עם עומס הלחץ צפויים לפתח היפרטרופיה לב בתוך 1-2 שבועות, התרחבות הלב אחרי שבוע 6-8, בהתאם אטימות של התכווצות (איור 2B). התמותה בחודש הראשון לאחר TAC היא נמוכה בדרך כלל (<20%) ב wild-type עכברים, אם כי שונה גנטית עכברים עשוי להפגין שיעורי ההישרדות שונים. ^6,7

באיור 1. אישור של קשירת העורקים רוחבי באמצעות מדידת מהירות דופלר. הנציג אותות דופלר מהירות של הימין (RC) והשאיר התרדמה (LC) בעורקים 6 ימים שלאחר TAC. הקלטות אלה להפגין קשירת מוצלח עם יחס RC / LC זרימה של ~ 6.8. אנא לחץ כאן כדי לראות גרסה גדולה יותר של דמות 1.

איור 2. נציג Heart תמונות שלמות בעקבות TAC. ב. שאם המופעלים לב פראי סוג העכבר.. לב פראי עכבר מסוג 16 שבועות לאחר TAC. כל שורה = 1mm.

Discussion

TAC, אשר מחקה היצרות מסתם אאורטלי האדם, היא שיטה נפוצה כדי לגרום היפרטרופיה לב ואי ספיקת לב בעכברים. אתרים חלופיים התכווצות העורקים כוללים את אבי העורקים העולה ואת הבטן. עולה התכווצות העורקים מהווה עומס יתר קיצונית ומהירה יותר על החדר השמאלי (LV). לעומת זאת, התכווצות אבי ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Gaymar T/pump	Harvard Apparatus	Model TP-500	Circulating water pump
Temp. therapy pads	Harvard Apparatus	60-3414
Hot bead sterilizer	Fine Science Tools	18000-45
Blunt scissors	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5980
Angled spring scissors	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5668
Chest retractor	Fine Science Tools	17002-02
Course curved forceps	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5138
Dumont fine 45° angled forceps	Fine Science Tools	11253-25
Needle holder	Fine Science Tools	12565-14
Electric shaver	GE Healthcare		For shaving mouse fur
PE 90 tubing	BD Biosciences	427420	For intubation
MiniVent (ventilator)	Harvard Apparatus	Type 845
Betadine	Fisher Scientific	19-027132	May be purchased at medical supply store
Sterile gloves	Mckesson	20-1565
Stereo microscope	Unico	ZM186
6-0 silk suture	Fine Science Tools	18020-60
27 ½ gauge needle	BD Biosciences	305109
6-0 prolene suture	Mckesson	3286
Buprenorphine	Institutional Animal Facility