מדגסקר שריקה מקק בתור מודל אלטרנטיבי של בעלי חיים שאינם מידע יונקים לחקור התקפה אלימה, פתוגנזה ואת יעילות התרופה

Summary

אנו מציגים את פרוטוקול לנצל את המדגסקר שריקה מקק בתור מודל אלטרנטיבי של בעלי חיים שאינם מידע יונקים לבצע התקפה אלימה חיידקי, פתוגנזה, רעילות התרופה, יעילות התרופה ולאחר מחקרים תגובה חיסונית מולדת.

Abstract

היבטים רבים של מולדת חסינות נשמרים בין יונקים וחרקים. חרק, ממדגסקר שריקה מקק מן הסוג Gromphadorhina, יכול להיות מנוצל כמו במודל חיה חלופיים לצורך המחקר של התקפה אלימה, אינטראקציה פתוגן-פונדקאי, תגובה חיסונית מולדת יעילות התרופה. פרטים לגידול, טיפוח והשבחה של השריקה המקק הינם מסופקים. אנחנו גם מדגימים איך זה יכול להיות נגוע עם חיידקים כגון פתוגנים תאיים Burkholderia mallei, נולד ב- pseudomallei, נולד ב- thailandensis. השימוש המקק השריקה זולה, מתגבר על בעיות רגולטוריות התמודדות עם השימוש של יונקים במחקר. בנוסף, תוצאות נמצאו באמצעות מודל מקק השריקה הם דומים לאלו שהושגו באמצעות מודלים בתרבית של הדירים. לפיכך, המקק השריקה מדגסקר מייצג מארח הפונדקאית אטרקטיבי שיש לבחון בעת עריכת מחקרים שנעשו בבעלי חיים.

Introduction

השימוש של חרקים כמו חלופי שאינו מידע יונקים חייתיים ללמוד פתוגנזה חיידקי והגנה מארח מולדת צובר תאוצה בשנים האחרונות. לוגיסטית, זאת בשל העלות זולה יחסית שלהם ואת ההקלות קבלת טיפול, דאגה חרקים לעומת יונקים. יש גם אין מדיניות רגולטוריים המפקחים על השימוש חרקים במחקר; הוא אינו כפוף לתחומו או מגבלות שנקבעו על ידי בעל חיים להשתמש סוכנות הוועדה או הממשלה. חרקים בתור פונדקאית חייתיים נתונות במיוחד הקרנה מקיפה ללימודי הגורמים התקפה אלימה אינטראקציות פתוגן-פונדקאי, הערכות של יעילות התרופה אנטי מיקרוביאליים. השימוש בהם יכול להפחית את המספר של יונקים המשמש למחקר ובכך להתגבר על חלק דילמות אתיות הגלום להתנהגותו של ניסויים בבעלי חיים ^1,2.

חרקים עשוי לשמש פונדקאית המארחים כי יש רמה גבוהה של אחידות בין מערכות החיסון מולדים של ^1,של חרקים, יונקים-³. Plasmatocytes חרק וגם בתרבית של מקרופאגים phagocytose מיקרואורגניזמים ⁴. לכנף חרקים נויטרופילים הוא ^5,hemocyte⁶. פרץ חמצוני תאיים מסלולים חרק, בתרבית של תאים דומים; מינים חמצן תגובתי והן מופקים על ידי orthologous p47^phox ו- p67^phox חלבונים ⁵. למפל איתות במורד הזרם של רצפטורים אגרה חרקים, רצפטורים כמו אגרה, Interleukin-1 יונקים הם גם דומה להפליא; שניהם תוצאה של הייצור של פפטידים מיקרוביאלית, כגון defensins ⁷. לפיכך, חרקים יכול להיות מנוצל כדי לחקור מנגנונים חיסוניים מולדת כללי שמשותפות metazoans.

חרק הנקרא ממדגסקר שריקה מקק מן הסוג Gromphadorhina, הוא אחד המינים הג'וק הגדול ביותר שקיים, להגיע בדרך כלל 5-8 ס מ בעת הפירעון. היא רק ילידי האי מדגסקר, מאופיין על ידי קול השריקה שזה גורם - צליל המופק בעת המקק השריקה גירשה אוויר דרך פתחים הנשימה נקרא spiracles ⁸. היס ייחודי מגישה כסוג של תקשורת חברתית בקרב שריקה מקקים חיזור ותוקפנות ⁹ , ניתן לשמוע כאשר זכר מופר בסביבה שלה. מדגסקר שריקה מקק זז לאט בהשוואה תיקן אמריקני את ומינים מזיקים עירוניים אחרים. קל לטפל, להתרבות; מקק השריקה בהריון יכול לייצר צאצאים 20-30 בכל פעם. תינוק שריקה מקק, הנקרא נימפה, מגיע לבגרות מינית בתוך 5 חודשים אחרי שעברו 6 ומתנשל לדרגה הבאה, לחיות עד 5 שנים הן בטבע והן בשבי ⁸.

אנחנו נעזרו ממדגסקר שריקה מקק כמארח של הפונדקאית זיהום עם פתוגנים תאיים Burkholderia mallei, נולד ב- pseudomalleiו- thailandensis נולד ב- ^10,11. התקפה אלימה של אלה פתוגנים ב שריקה מקקים נמשל לאלימות ולגרימת שלהם במודל החייתי של בחינת ביצועים עבור Burkholderia, האוגר הסורי. מצאנו כי מנה קטלנית 50% (LD₅₀) נולד ב- pseudomallei , נולד ב- mallei היה דומה בשני מודלים ¹¹. מעניין, נולד ב- thailandensis, למרות avirulent במודל מכרסמים, הוא קטלני הג'וק השריקה ¹¹. ההבדל ביחס thailandensis דרב זיהום מדגישה את התועלת של המודל מקק השריקה; Thailandensis נולד ב- attenuating מוטציות ניתן לפתור בקלות רבה יותר בהמקק השריקה מאשר דגמים מכרסמים. יתר על כן, כפי thailandensis דרב משמש לעתים קרובות אורגניזם מודל עבור נולד ב- pseudomallei ו- mallei נולד ב- ^10,12,13, זיהוי מוטציות attenuating זה יכול להוביל מטרות דומות וקרוביו יותר מידבק.

למרות ההבדל התקפה אלימה של thailandensis דרב בהמקק השריקה נגד האוגר הסורי, מוטציות בגן הגורמים התקפה אלימה קריטיים, כגון אלה סוג 6 הפרשת המערכת-1 (T6SS-1), אשר הם attenuating, נולד ב- mallei , נולד ב- pseudomallei, הם בדומה attenuating thailandensis נולד ב- ¹¹. השריקה מקק מודל נוסף מאומת כי הפרט T6SS (T6SS-2 ל- T6SS-6) בו מוטציות pseudomallei דרב, אשר להם כל השפעה על התקפה אלימה על אוגרים סוריים, נשארים מידבק המקקים השריקה ¹¹. לפיכך, השריקה המקק הוא מודל בעלי חיים הפונדקאית קיימא עבור שלושה מינים Burkholderia . אנחנו לאחרונה מנוצל המקק השריקה כמו במודל חיה הפונדקאית לבחון את היעילות של כלורוקין סמים נגד מלריה (CLQ) נגד זיהום Burkholderia ¹⁰ ו שלה רעילות.

כאן, אנו מתארים את גידול וטיפול של מדגסקר שריקה מקק ולספק פרטים על איך להדביק את המזיק הזה עם שלושה מינים Burkholderia . יתר על כן, אנו ממחישים את המקק השריקה הוא מודל הפונדקאית קיימא ללמוד התקפה אלימה, יעילות התרופה זיהומים Burkholderia , כי סביר להניח יכול לשמש כמחשב מארח הפונדקאית עבור אחרים פתוגנים חיידקיים במחקרים דומים.

Protocol

1. תכשירים לשמירה על מושבה מקק השריקה

1. להכין כלוב המקקים השריקה לחיות. למרוח שכבה דקה של וזלין, כ 20-30 מ מ רוחב, על ההיקף של הקירות הפנימיים בסמוך לחלקו העליון של הכלוב כדי למנוע את הג'וקים השריקה לטפס הכלוב, בריחה.
   הערה: שריקה ג'וקים יכולים להיות בבניין מגוון מכולות זה יש רווח גדול בקומה, הן של גובה מספיק, ויש העפעפיים. להשתמש בעכבר הכלובים (~ 43 ס"מ על 23 ס"מ x 20 ס"מ). עבור הכלובים המיועדים 37 ° C, אינן חלות וזלין.
2. כוללים קרטון קרטון ביצים מניחים הפוך בתוך הכלוב כדי לספק מקום מסתור עבור החרקים ביישן מטבעי. לא מחליפים את תבנית ביצים קרטון עם אחד העשויים פוליסטירן מוקצף כדי למנוע בליעה של פלסטיק.
3. אינם מספקים מצעים עבור קל יותר לנקות, כדי להגדיל את התצוגה של נימפות בימיו.
4. להשיג מזון כלבים יבש אשר מכיל הרכב של הפרוטאין הגולמי ~ 20%. גס לטחון את האוכל של הכלב עם מעבד מזון או בלנדר, לאחסן ב 4 º C.
5. להשיג מספר מנות רדוד, אקווריום אבנים או ספוג מים ומזון.
   הערה: צלחות פטרי הם מומלץ.

2. השריקה מקק טיפוח והשבחה

1. להשיג outbred מדגסקר שריקה ג'וקים (~ 5 ס מ) מ תרבית מסחרי. המין בשימוש פרוטוקול זה הוא Gromphadorhina laevigata. לפרוק את תיבת המשלוח המכילה את הג'וקים השריקה מיד עם קבלת.
2. פעל לפי ההנחיות מוסדי מתאים לשימוש של ציוד מגן אישי בטיפול בבעלי חיים.
   הערה: השתמש עבה כפפות חד פעמיות עבור טיפול תיקנים כמו ציפורניים tarsal של מקק השריקה החדה.
3. העברה עד 75 מקקים השריקה גדול (> 3 ס מ) לכל כלוב גדול. העברת הנימפות עתה בקעו וכבר קטן יותר (< 3 ס מ) לכלוב נפרד.
   הערה: שמירה באופן משמעותי יותר מ 75 גדול שריקה מקקים לכל כלוב עכבר יכול להוביל הידרדרות בריאותו של המושבה, יכול גם לגרום למותם.
4. לטפל מקק לאחרונה molted, אשר הוא אפור בצבע, בעדינות ולהימנע ללחוץ עליה. לחלופין, אפשר שלד חיצוני להכהות להקשיח לפני הטיפול.
   הערה: אין צורך להסיר קרדית, Gromphadorholaelaps schaeferi, המלוות לעיתים קרובות השריקה ג'וקים עם קבלת מן המגדלים. קרדית מועיל לשמור את הג'וקים השריקה נקי, מזיק לבני אדם.
5. הזנה שריקה ג'וקים עם קרקע מזון כלבים יבש בקערה רדודה פעם או פעמיים בשבוע. מספקים מספיק מזון לכלבים כדי לוודא הג'וקים השריקה אין די מזון עד ההאכלה הבאה. להתעלם כל מזון הפך רטוב לחות ועובש.
6. בנוסף מזון לכלבים, מספקים טחונים פירות וירקות, כגון תפוחים, תפוחי אדמה או חסה, בקערה רדודה. להשליך מזון מעופש או רקובים.
7. מספקים את מי השתייה פעם או פעמיים בשבוע בקערה רדודה, אך אל תמלא יותר מדי את המנה כדי למנוע זליגת בכלוב. הכנס המנה כדי לספק משטח נחיתה קטן נימפות אקווריום קטן אבנים או ספוג. השתמש מים אוסמוזה הפוכה, אם זמין.
8. לשמור על שריקה מקקים בחושך בטמפרטורות הנעות בין 21 ° C ל-30 מעלות צלזיוס. שמור גדול מקקים השריקה המיועדים ניסויים בטמפרטורה נמוכה יותר (~ 21 ° C) ~ 2 חודשים להקטין את הרבייה והריון. לעומת זאת, שמור נימפות בטמפרטורות גבוהות יותר (28 ° C עד 30 ° C) לזרז את הצמיחה.
   הערה: שמור הכלובים בטמפרטורת החדר (21 ° C) אפל הקבינט.
9. לספק לחות על-ידי הכללת במחבת נפרדת של מים, אם שריקה מקקים נשמרים בתוך אינקובטור.
10. לנקות את הכלוב על ידי חפנה את צואה יבשה באופן קבוע או על ידי העברת שריקה תיקנים כדי כלוב נקי כל 2-3 שבועות. שמור את תחתית הכלוב היבש. לנקות את הכלוב מיד אם המים העודפים מותר לערבב עם צואה בתחתית הכלוב ולצבור.

3. מקק הכנה לניסויים

1. העברת מספר מתאים של מקקים השריקה בכלוב חממה humidified 37 ° C 1 עד 3 שבועות לפני ניסוי עבור והפיזיולוגי. כולל קבוצת בקרה עבור הזרקה. תקופה זו להתאקלמות היא קריטית עבור הימנעות הלם טמפרטורה במהלך ניסויים.
2. אל תחיל וזלין לכלובים המיועדים 37 ° C כי הטמפרטורה גבוהה יותר ממיסה את הג'לי.
3. בדוק את הג'וקים השריקה כל 1-2 ימים להחליף מזון ומים. ולנקות את הכלוב.
4. להשיג את מיכלי מזון פלסטיק חד פעמיות ברורה בשלמותם קיבוץ המקקים השריקה במהלך ניסויים. אוורור, לנקב חורים המכסה או בצידי המיכל עם מסמר, פטיש.
   הערה: שימוש מכולות בורג מכסה על הצמד קאפ מכולות בהגדרת אבטחה ברמה 3. כובע הצמד מכולות יכול לחזק עם הקלטת, במידת הצורך.
5. ביום של הזרקת, להפיץ מקקים השריקה שחייה בטמפרטורה משתנה 6-12 קבוצות לכל מיכל, להבטיח חלוקה שוויונית על ידי סקס, מסת הגוף.
6. לקבוע את המין של הפרט מקקים השריקה. לקבוע את המין על ידי חשיבותו של קרניים נמצאו על הזכרים ועל העדר הימנו על הנקבות.
7. שוקלים את הג'וקים השריקה בודדים. כדי להקל על שקילת מקק השריקה על האיזון, הקף אותו בתוך שתי סירות שוקלים את זה יש כבר tared.
   הערה: עקביות בין ניסויים, השתמש תיקנים השריקה עם משקל של 4 עד 8 g. עם זאת, אין הבדל בהישרדות לאחר ההדבקה נמצאו בין קטן (1.5-2 גרם) ג'וקים השריקה גדול (6-8 גרם). ללימודים סמים, השתמש תיקנים השריקה עם משקל של ~ 5 g בריכוז התרופה עקבית יותר לכל הגוף המונית.
8. במקום צלחת המים, כולל מים גבוהה תוכן פירות או ירקות, כמו פרוסת תפוח או תפוחי אדמה. להתעלם אוכל רקוב. אינם מספקים מים נוספת לשמור על המכולה יבש.
9. לחזור מקקים השריקה 37 ° C עד זריקות.

4. חיידקי תרבות, ההכנות

הערה: המין בקטריאלי בשימוש פרוטוקול זה הם mallei נולד ב- pseudomallei נולד ב-, נולד ב- thailandensis. כל המניפולציות ועם mallei נולד ב- pseudomallei נולד ב- חייב להתבצע ב- Class II או ארונות בטיחות ביולוגית השיעור השלישי ממוקם ברמת אבטחה (BSL) מעבדה 3. לבצע מניפולציות עם thailandensis דרב בבטיחות ביולוגי דומה ארונות ממוקם גם במעבדה BSL2 או BSL3. בצע הליך מקובל מוסדיים לעבודה BSL3. בצע המוסדיים הנחיות לשימוש של ציוד מגן אישי בעת טיפול חיידקים.

1. להכין צלחת הבסיס של Burkholderia לפחות 3 ימים לפני זיהום. השתמש לוריא-Bertani (לנוקס) (LB) אגר נולד ב- pseudomallei או thailandensis דרב , שימוש LB אגר בתוספת 4% גליצרול עבור mallei דרב. פס מחיידקים מניה גליצרול 25% המאוחסנים ב- 80 ° c
   הערה: תמיד צובעות את הצלחת המאסטר ישירות מן המלאי גליצרול קפוא; למנוע מעבר סדרתי של החיידק מן צלחת על צלחת כמו זו עלולה לגרום מופחתת התקפה אלימה.
2. לחסן 10 עד 20 מ ל LB מרק עם מספר מושבות נולד ב- pseudomallei או thailandensis דרב מהצלחת הראשית. באופן דומה לחסן LB מרק בתוספת 4% גליצרול עבור mallei דרב.
3. לנער את התרבות מרק-175 עד 250 סל"ד ב 37 ° C עבור ~ 18 h.
4. צנטריפוגה 2-3 מ"ל של תרבות ב g x 5,000 למשך 10 דקות.
5. למחוק את תגובת שיקוע, resuspend בגדר חיידקי בתוך תמיסת מלח סטרילית פוספט buffered (PBS, 137 מ מ NaCl, מ מ 2.7 אשלגן כלורי, 10 מ מ נה₂PO₄, מ מ 1.8 ח'₂PO₄, pH 7.4).
6. לדלל את החיידקים עם PBS כדי להשיג צפיפות אופטית (OD) של 0.5, נמדד ב ספיגת על 600 nm בספקטרופוטומטר.
7. באופן סדרתי לדלל החיידקים ten-fold PBS ב מ OD ההתחלתי של 0.5. השתמש תרחיפים אלה עבור זיהום.
8. לקבוע את המושבה יוצרי יחידות (CFU) inoculum על ידי דילול טורי, ציפוי של 100 aliquots µL במדיה אגר. דגירה צלחות ב 37 מעלות צלזיוס במשך 24-48 שעות.

5. סמים ההכנות

1. לקבוע את הכמות המתאימה של התרופה תינתן לכל הגוף המונית. המינון CLQ שניתנה המקק השריקה התבססה על מינון רגיל עבור יונקים, אשר הוא 50 מ"ג/ק"ג/יום.
2. Resuspend או לדלל את התרופה עניין ברכב. לדוגמה, לדלל CLQ ב- PBS ב ריכוז של 12 מ"ג/מ"ל. ריכוז זה מספק 300 µg של התרופה כדי g ~ 6 שריקה מקק ב µL 25 מוזרק נפח.
3. במידת הצורך, לעקר את הפתרון סמים על ידי העברתו דרך מסנן 0.22 של מזרק מיקרומטר.
4. לאחסן את הפתרון סמים ב 4 ° C עד השימוש. חממו את הפתרון סמים לפחות 21 מעלות (טמפרטורת החדר) לפני זריקות.

6. הרכבה של מזרק

1. הגדר את המצביע כדי לנפח הרצוי (25 µL) על-ידי סיבוב הבורג התאמה על פיפטה חוזרות.
2. לדחוף פנימה הבר שחרור של פיפטה החוזרות על עצמן ולמשוך הסוחר כלפי חוץ. פיפטה חוזרות עכשיו הוא מוכן לאכלוס מזרק טעון.
   הערה: כיילו את אמצעי האחסון נפלט באמצעות פיפטה החוזרות על עצמן על ידי מדידת כמות המים נפלט על איזון.
3. ממלאים מזרק 1 מ"ל ההשעיה המכיל חיידקים או סמים.
4. לצרף מזרק סטרילי 26 או 27 G x ½ אינץ ' (או קצרים יותר) של מחט.
5. הקש על המזרק כדי להציף את בועות האוויר למעלה ולהוציא הבועות ומתלים קצת לתוך מיכל מלא עם 10% מלבין.
6. הצמד את המזרק אל הסרטון מזרק של פיפטה החוזרות על עצמן עם שפוע המחט פונה כלפי מעלה.
7. משוך בשורת השחרור כלפי חוץ ולחץ על לחצן מנפק בחוזקה כדי לבצע זריקות ריקה לתוך מיכל מלא עם אקונומיקה 10% עד הבוכנה מזרק נגד הסוחר.
8. לבצע 1 או 2 זריקות ריקים נוספים כדי להבטיח להיות הוצאת נוזל החוצה המזרק. פיפטה החוזרות על עצמן מוכן לזריקות.

7. מקק זריקות

1. לבצע כל מקק זריקות Class II או III בכיתה בטיחות ביולוגית הקבינט ב- BSL2 או BSL3 הגדרה באמצעות המוסדיים מומלץ ציוד מגן אישי.
2. ניקוי משטחי עבודה בבטיחות ארון זה עשוי לבוא במגע עם המקקים השריקה. משתמשת במלבין 10% ואחריו אתנול 70% כדי להסיר שאריות אקונומיקה. לאפשר למשטח אוויר יבש.
3. עם יד אחת, אחיזה המקק השריקה לצידו. לשתק מקק השריקה כך שאין ביכולתה ובצינתם במהלך ההזרקה. לכופף את המקק השריקה מעט כך הקרומים עורית בין terga בטן חשופים.
4. עם היד השנייה, החזק את פיפטה חוזרות כך המחט היא על 0° זווית 30 מעלות מעל האמצע dorso-הגחוני / של השריקה המקק. לנקב את הקרום עורית סמוכים של 3^rd, 4^thאו 5^th tergum מהקצה האחורי.
   הערה: הפוסט של המחט לתוך המקק השריקה בזווית המצוין מבטיחה המחט לא לעבור דרך יציאה של השריקה המקק. ההזרקה מבטיחה כי החומר בשניה נכלל בתוך חלל הבטן מלאה hemolymph. תרגול מחזיק את הג'וקים השריקה, הזרקת מים לפני שיחתמו זריקות עם חיידקים חיים או סמים.
5. לחצו על הכפתור dispense בחוזקה כדי להזריק את אמצעי האחסון. למשוך בעדינות את המחט באותה הזווית המשמשים להזנת.
6. המקום המקק השריקה מוזרק במיכל נפרד כדי להבדילה המקקים השריקה זה לא עדיין היה להזריק. . תנגב את כל hemolymph כי אולי יש נדפה החוצה מן ההזרקה.
7. המשך הזרקת אחרים מקקים השריקה בתוך קבוצה באמצעות מזרק באותה המחט. להפסיק להזריק לפני המשאבה מזרק מגיע לתחתית החבית למניעת מינון לא הושלמה ב הזריקה האחרונה.
8. עבור מספר זריקות מקק השריקה יחיד, כגון אלה עם חיידקים, סמים, להזריק-צדדים שונים של tergum בצד הגבי של המקקים השריקה. לחלופין, לבצע זריקות מרובות באמצעות הזרקת-terga שונים (3^rd 5^th).
9. ודא כי המכסים של המכולות מהודקות. מחזקים את המכסים עם הקלטת, במידת הצורך.
10. דגירה שריקה המקקים חממה humidified-37 מעלות צלזיוס.

8. הקלטה שריקה מקק התחלואה והתמותה

1. לבצע כל בחינות מקק השריקה Class II או III בכיתה בטיחות ביולוגית ארון עם המוסדיים מומלץ ציוד מגן אישי. ניקוי המשטחים בבטיחות ארון עם 10% מלבין ואחריו 70% אתנול. לאפשר מרחב העבודה אוויר יבש.
2. ציון השריקה מקקים פעם או פעמיים בכל יום על פני תקופה של שבועות 1 עד 2 באמצעות התחלואה ניקוד טבלה (טבלה 1).
3. הסר ג'וקים מתים השריקה מהגורם והקלט מספר הניצולים.
4. העברת הנותר חי שריקה מקקים במיכל נקי אם לחות עודפת צבר בתחתית המיכל. לחלופין, השתמש מגבות חד פעמיות כדי לנגב את לחות עודפת.
5. להחליף אוכל רקוב יומיות ולחזור שריקה תיקנים כדי החממה humidified-37 מעלות צלזיוס.
6. בסוף המחקר, מקום הניצולים שנותרו בשקית הביולוגי ומקפיאים ב-80 מעלות צלזיוס לבצע המתת חסד.
7. מבחינה סטטיסטית לנתח את הנתונים¹⁴ כדי לקבוע LD₅₀ ועל ידי קפלן-מאייר וניתוח יומן-דרגה להישרדות. כמו עם כל ניסויים חרקים, כמה מקרי מוות עלולה להתרחש בקבוצת הביקורת. מקרי מיוחסות התמותה הטבעית של חרקים ¹⁵. לדיון מפורט יותר על איך חשבון מקרי מוות בקבוצת הביקורת, ראה הפניה¹⁵.

תוצאות

סעיף זה ממחיש את התוצאות התקבלו כאשר ג'וקים השריקה מדגסקר נדבקו בנגיף נולד ב- mallei, נולד ב- pseudomallei, או thailandensis דרב; התוצאות מציגות כי המזיק הזה הוא צייתן מודל בעלי חיים מינים שונים של Burkholderia בלימוד התקפה אלימה, רעילות התרופה ואת יעילות התרופה נגד זיהום חיידקי. ?...

Discussion

תנאים אופטימליים ניסיוני להתחיל מושבה מקק בריא השריקה, המחייב מינימלית אבל במועד העקבי מחויבות. למרות שריקה ג'וקים יכולים ללכת במשך תקופה ארוכה יחסית של זמן (~ שבועות) ללא מזון ומים, יש לספק כלוב שבועיות או דו-שבועיות תחזוקה. זה כולל בדיקת אספקת מים ואוכל את שהייתך הכלוב היבש. שמירה על תנאי מ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Madagascar hissing cockroach	Carolina Biological Supply Co, Burlington, NC	143668
Kibbles n Bits, any flavor	Big Heart Pet Brands, San Francisco, CA	UPC #079100519378
Snap on disposable plastic containers or equivalent	Rubbermaid, Huntersville, NC	UPC #FG7F71RETCHIL
Screw on disposable plastic containers or equivalent	Rubbermaid, Huntersville, NC	UPC #FG7J0000TCHIL
Tridak STEPPER series repetitive pipette	Dymax Corporation www.dymax.com	T15469
Syringe (1 mL)	Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ	309659
Needle (26 or 27G x 1/2)	Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ	305109, 305111
Chloroquine diphosphate	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	C6628
Phosphate buffered saline	Gibco/ Thermo Fisher Scientific, Gaithersburg, MD	10010023
Difco Luria- Bertani (Lennox)	Becton Dickinson, Sparks, MD	240230
Agar	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	A1296
Glycerol	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	G6279