A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
המטרה הכוללת של נוהל זה היא לספק טכניקה מאוד לשחזור להערכת ויוו של ערעור מחסום הדם - מוח במודלים עכברוש של שבץ איסכמי.
שבץ איסכמי מוביל בצקת במוח vasogenic פגיעה במוח העיקרי עוקבות, אשר מתווך דרך הרס מחסום הדם - מוח (BBB). חולדות עם שבץ איסכמי המושרה הוקמה ומשמשת כמודלים ויוו לחקור את שלמות פונקציונלית של BBB. Spectrophotometric זיהוי של אוונס כחול (EB) הדגימות המוח עם איסכמי יכול לספק הצדקה אמינה עבור מחקר ופיתוח של שיטות טיפוליות הרומן. שיטה זו יוצרת תוצאות לשחזור, ישימה במעבדה כלשהי ללא צורך בציוד מיוחד. כאן, אנו מציגים קו מנחה מטמיעים וטכני על זיהוי extravasation של EB בעקבות אינדוקציה של שבץ איסכמי בחולדות.
Vasogenic בצקת במוח עקב הפרעה מחסום הדם - מוח (BBB) נותר סיבוך חשוב של שבץ איסכמי של דטרמיננטה העיקריים של שיעור ההישרדות שבץ בחולים1,2. מחסום הדם - מוח (BBB), אשר נוצר על ידי תאי אנדותל נימי המוח (BCECs), המורכבת מרכיבים נוירו-וסקולריים נפרדות (למשל, צמתי צר בין BCECs, pericytes, astroglial ותאים עצביים3), מספק מתמחה ודינאמיים ממשק בין מערכת העצבים המרכזית (CNS) לבין מחזור הדם ההיקפיים4,5. עלבונות כמו פציעות איסכמיה-פגיעה reperfusion יכול לשבש את שלמות פונקציונלית של BBB, להוביל חדירה עוקבות של מחזורי לויקוציטים אל parenchyma המוח המפעילות בסופו של דבר דלקת מוחית ופגיעות מוח ראשוניים 6 , 7. מודלים בעלי חיים יש צורך זיהוי מדויק תפקוד לקוי של BBB בעקבות התרחשות של אירוע מוחי. כאלה הן חשיבות רבה ללימוד שבבסיס מנגנונים הקשורים pathophysiological ולהציג neuroprotective אסטרטגיות חדשות. במבחנה תא תרבות מבוססי מודלים של BBB יש כבר מאוד שפותחו ונמצאות בשימוש במחקר מולקולרי של ה BBB physiopathology8,9,10. ובכל זאת, ויוו חייתיים, אשר מייצרים נזק איסכמי של BBB הדומה תנאים קליניים האנושי, הם גם משתלם מאוד בהקשר הזה. זיהוי כמותית extravasation של אוונס כחול (EB) היא טכניקה מקובלת היטב ורגיש שבו נעשה שימוש עבור הערכה של BBB תקינות ותפקוד מחלות ניווניות, לרבות שבץ איסכמי11, 12 , 13 , 14. שיטה זו היא חסכונית, ריאלי, הדירים החלים לחלוטין במעבדה כל ניסיוני. יישומה אינו דורש ציוד מתקדם, כגון קליעים נותבים רדיואקטיביים15 או תהודה מגנטית (MRI)16, כי הם התנאים המוקדמים עבור שיטות אחרות. במאמר זה נדגים באופן מקיף תהליכים טכניים בסיסיים של BBB הערכה באמצעות EB extravasation במודלים עכברוש של שבץ איסכמי.
כל ההליכים בוצעו בהתאם להנחיות באוניברסיטת ארדביל מועצת המחקר הרפואי-מדעי עבור מחקרים בבעלי חיים (מספר הקוד האתי: IR. ARUMS. REC.1394.08)-במחקר זה דמיינו, השתמשנו למבוגרים זכר ספראג-Dawley חולדות (300-350 גר') המתקבל המכון מספוא (טהראן, איראן).
1. Flowmetry והרדמה
2. אינדוקציה של איסכמיה מוקד Cerebra
3. ומוחלף תעלות אוונס הכחול הזרקה (EB)
4. הערכה של החדירות מחסום דם המוח
5. ייצור של העקומה סטנדרטי EB
6. מבצע המזויפים
היה הבדל משמעותי ברמות EB בהאונה הימנית לעומת האונה השמאלית של החולדות המופעלים דמה (1.06 ± 0.1 µg/g ו- 1.1 ± 0.09 µg/g, בהתאמה). כפי שמוצג דמויות 2A-2B, אינדוקציה של איסכמיה ארעי (איסכמיה 90 דקות / פגיעה reperfusion 24 שעות ביממה) גרם הבדל משמעותי ברמות EB (10.41 ± 0.84 µg/g, p < 0.001) באונה השמ...
עד כה, בשיטות שונות כגון autoradiography וזיהוי של קליעים נותבים רדיואקטיביים24,25, immunofluorescence מיקרוסקופ26,27, EB extravasation טכניקה20, 23 השתמשו כדי להעריך את הנזק מחסום הדם - מוח. EB לצבוע בחום מסוגל לקשור אלבומי?...
המחברים אין לחשוף.
המחברים מודים בסגן הקנצלר לחקר ארדביל האוניברסיטה למדעי הרפואה (ארדביל, איראן) לקבלת סיוע כספי (גרנט לא: 9607).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Isoflurane | Piramal | AWN 34041100 | 20 - 25 °C |
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Molekula | 31216368 | 4 years |
Sprague–Dawley rats | Pasture Institute (Tehran, Iran) | 300-350g | |
Evans Blue | Sigma-Aldrich | 314-13-6 | |
Trichloroacetic acid | Sigma-Aldrich | 76-03-9 | 2 years |
Bupivacaine HCl (0.5%) | Delpharm Tours | below 25 °C | |
Bupernorphine | Exir (Iran) | ||
Sodium Carbonate | Sigma-Aldrich | 497-19-8 | |
Sodium chloride | Sigma-Aldrich | 7647-14-5 | |
Di- Sodium hydrogen phosphate | EMD Millipore | 231-448-7 | |
Potassium chloride | Sigma-Aldrich | 7447-40-7 | |
Ethanol | Sigma-Aldrich | 64-17-5 | |
silicone(Xantopren) | Heraeus | EN ISO 4823 | |
Activator universal plus | Heraeus | 66037445 | |
Micro-Dissecting forceps | Stoelting | 52100-41 | |
Spring Scisors | Stoelting | 52130-00 | |
Operating Scissors | Roboz | 52140-70 | |
Brain matrix | Stoelting | 51390 | |
Anesthesia Machine for Small Animals | | Kent Scientific | SS-01 | |
Power Lab system | AD Instruments | ML880 | |
Laser Doppler flowmeter | AD Instruments | ML191 | |
Heating feed back system | Harvard Appratus | 72-7560 | |
Vascular micro clamp | FineScience Tools | 18055-03 | |
Silk 5-0 suture thread | Ethicon | 682G | |
Ethilon 4-0 suture thread | Ethicon | EH6740G |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved