דגימה רעלני של זגוגית השן פחמתי פחמן יציב וניתוח איזוטופ החמצן

Summary

יציב הפחמן והחמצן איזוטופ ניתוח של קרבונט אמייל השן האדם ושל בעלי החיים שימש כמדד עבור דיאטה בודדים ושיחזור הסביבה. כאן, אנו מספקים תיאור מפורט, תיעוד חזותי של בכמות גדולה ורציפה השן אמאייל דגימה, כמו גם רעלני של דגימות כפליאונטולוג הממצאים הארכיאולוגיים.

Abstract

יציב הפחמן והחמצן איזוטופ ניתוח של קרבונט אמייל השן האדם ושל בעלי החיים הוחל paleodietary, paleoecological, ומחקר paleoenvironmental מתקופות היסטוריות האחרונות לחזור לפני 10 מליון שנה. גישות בצובר מספקים מדגם מייצג עבור התקופה של מינרליזציה אמייל, בעוד דוגמאות רציפים בתוך שן ניתן לעקוב אחר שינויים תזונתיים וסביבתיים בתקופה זו. בעוד מתודולוגיות אלה יש כבר נרחב שהוחל, שמתואר לארכיאולוגיה, אקולוגיה, פלאונטולוגיה, היו הנחיות מפורשות אין כדי לסייע בבחירה של ציוד מעבדה הכרחי וכדי לתאר ביסודיות מעבדה מפורט דגימה ו פרוטוקולים. במאמר זה, ואנחנו מתעדים וככתבה, באופן חזותי, התהליך כולו מן הדגימה דרך ההקרנה pretreatment ומהירות diagenetic כדי לבצע את המתודולוגיה זמינים באופן נרחב יותר חוקרים בהתחשב היישום שלה במגוון של הגדרות מעבדה.

Introduction

יציב הפחמן והחמצן איזוטופ ניתוחים של קרבונט אמייל השן שימש ללמוד אחרי צריכת התזונה האנושית, הגמילה, ניידות, וכן רוצפה הסתמכות על צמחייה, התנועה של בעלי חיים, חיות משק foddering. יישומים אלה יש כבר באופן מקיף דנו ונבדקים למגוון רחב של תנאים סביבתיים המציין את השפעת כאילוסטרציה מקומיים, טמפרטורה, מקורות מים, צמחייה יצירות^{1,2, 3,}-^4,-^5,-⁶. המגוון של יישומים אפשריים בארכיאולוגיה והיסטוריה פלאונטולוגיה, כמו גם שימור טובה קרבונט אמייל השן, הפכה אותו חומר אטרקטיבי של איזוטופ יציב עבודה³. שיטות דגימה, רעלני ו ההקרנה diagenesis מתוארות בקצרה במספר פרסומים קודמים^1,7. עם זאת, הפגנות מילולית וחזותית יסודית להישאר זמין במידה רבה, במיוחד לאנשים מחוץ ארכאולוגיה מעבדות ובקרב קבוצות מעבדה עם מוגבלת למימון שבו האינטרס השימוש בטכניקה זו גוברת ⁵.

אמייל השן בעיקר מורכב היידרוקסיאפטיט (bioapatite) וגידולו⁸ גדולים יותר מאלה של העצם, שהופך אותו עמידים יותר בפני החלפות יוניים diagenetic פוסט-מורטם וזיהום³. מחקרים מודרניים הראו כי המידות איזוטופ (אלפא¹³ג) פחמן יציב של השן רוצפה אמייל הרשומה באופן אמין בעל חיים תזונה והתנהגות^9,10. הערך איזוטופ (אלפא¹⁸O) חמצן יציב של זגוגית השן נקבעת על-ידי הרכב איזוטרופי חמצן של בלע מים, הכוללת מים צמח, מזונות בעלי חיים, מי שתייה, נשימה, כמו גם השפעות סביבתיות שונות על המים אשר יכול להוביל בהמשך איזוטרופי fractionation (למשל., חופיים, טמפרטורה, גובה, כמות המשקעים, מיקום הקונטיננטלי)¹¹. זו הפכה אותו שיטה פופולארית עבור שחזור תזונתיים וסביבתיים במחקר הארכיאולוגי, paleoecological, פליאונטולוגיה.

תקופת היווצרות אמייל השן קצרים יחסית (שנים), משתנה בהתאם השן להיות שנדגמו. על בני אדם, זגוגית שן טוחנת ראשונה mineralizes מלידתם ועד לגיל 3 שנים וטוחנות mineralize בין 1.5 ו-7 שנים של גיל, השן הטוחנת השנייה mineralize בגילאי 2.5 ו- 8, השן הטוחנת השלישית mineralize במהלך גיל ההתבגרות, בין 7 ל 16 שנים¹² . נתון המהווה אמייל השן באופן מצטבר מעל בתקופה של היווצרות, שניתן יהיה לטעום בצובר לאורך ציר הגידול כולו או נדגמים ברצף כדי לחקור את השינויים בדיאטה וסביבה שהתרחשו במהלך תקופת היווצרות¹³ . מסודר בסדר כרונולוגי שינוי תזונה בתוך השן נתון זה נצפות לבני אדם ולבעלי אחרים חיות^1,14, מתן מידע לגבי הבין-השנתי וריאציה עונתיות ותזונתיות.

בעוד אמייל עמיד בדרך כלל diagenesis, איזוטרופי שינויים הנובעים הסביבה קבורה אפשרי, נצפו^15,16, הפיכת בדיקות ניסויית והבחירות pretreatment שימושי. אמנם זה לא השיטה זמין רק, ספקטרוסקופיית פורייה (FTIR), במיוחד במצב שידור הקלוש, התפתחה בתור מהיר, זול, נגיש יחסית שיטה להערכת שינוי taphonomic אמייל השן. בפרט בהקשרים כפליאונטולוג^17,18,19,20. עם זאת, נתונים היסטוריים פרוטוקולים וסטנדרטים הקלטה נותרים יחסית נגיש לאנשים רבים מחוץ לתחומי המדע גאוכימיה או חומר.

זמני התגובה וכימיקלים המועסקים על ידי חוקרים רעלני של זגוגית השן גם משתנים באופן משמעותי בספרות, לעתים קרובות תוך התחשבות מוגבל לגבי מה ההשתנות לעשות פחמן יציב והערכים איזוטופ החמצן של המדגם^{21 ,22}. . הנה, מדווחים גישה שימושים לדלל חומצה אצטית (0.1 M) עבור רעלני דוגמאות אבקת האמייל. עם זאת, בהתחשב בכך ההבדלים במדידות איזוטרופי הנובע רעלני הם קלים יחסית על זגוגית השן, זה הכי טוב עבור החוקרים לעקוב אחר הפרוטוקולים עבור datasets שבה הם רוצים להשוות את הנתונים שלהם ל-¹¹. יתר על כן, שבו נלקחים דגימות רציפים קטנים, במיוחד על דגימות Holocene, אין רעלני עשוי להיבחר (בעקבות בדיקות diagenetic פיילוט) כדי למנוע בזבוז הדגימה.

למרות השיטות שאנחנו מדווחים כאן בהחלט לא חדש, הידע שלנו, זו הפעם הראשונה בה תיעוד הכתוב יסודית של תפזורת, דיגום רציף, בחירות pretreatment שיטות הסימון diagenetic (בדמות FTIR) השן אמייל נעשו נרחב זמין לקהל אקדמיים מגוונים. בעוד אנו מקווים המאמצים שלנו יגרום גישה זו יותר נגישים למספר רחב יותר של אנשים פרטיים, מעבדות, חוקרים שרוצים להחיל ולפרסם טכניקה זו חייב להיות מודע מינימום תקן, שיקולים diagenetic, דיווח, מצגת דרישות overviewed במקום²⁰, וכן המורכבויות המפרש פוטנציאל להיות ייחודי לאזור המחקר שלהם, taxa ניתח, ולאחר זמן מחזור⁵.

Protocol

להלן כללי התנהגות עוקב אחר הקווים המנחים של המעבדה ספקטרומטר מסה של איזוטופ אור במכון מקס פלאנק על המדע של ההיסטוריה האנושית. אתיקה המתאים הרשאות מוועדות לאומיות ובינלאומיות יש לחפש על ניתוחים המערבים בסכנת הכחדה דגימות רוצפה מודרני או היסטורית ועל השימוש וחומר הארכיאולוגי רוצפה עניין בפני בעלי עניין עכשווי . בנייר זה, הדגימות השתמשו היו דגימות הארכיאולוגי של מאובנים. . בני אדם לא חיים השתמשו במחקר זה, מלא אתית, מוסדי, ממשלתי והרשאות הרווחנו דבר עבור כל ניתוח הרסני.

1. נפח דגימה

הערה: לבני אדם ולבעלי חיים, השיטה הבסיסית של צובר השן אמאייל הדגימה הוא היישום של תרגיל לקצה buccal של השן.

1. לנקות את המשטח החיצוני של השן (~0.1 מ"מ) באמצעות אלומיניום ירה blaster, או על ידי שחיקה עדין באמצעות הגדרת את התרגיל. השתמש תרגיל ידניים עם מקדח יהלום נקי שקצהו נשך (ראה להלן), צורה אפילו, המחוברים באמצעות צ'אק שיבנו התרגיל. להבטיח שחיקה אפילו ועדין מתבצע כמו חריץ מקביל לציר הצמיחה כולה (איור 1 , איור 2).
2. ניסיון, במידת האפשר להחיל את שיטת באותו חלק השן עבור כל אדם או חיה שנדגמו.
   הערה: במחקר paleodietary אדם, השן הטוחנת השלישית הם בדרך כלל העדיף בתור נציג של המנוח לנוער/מבוגר דיאטה בזמן השן הטוחנת הראשונה הם נמנעו בגלל הגמילה אפקטים²³. השן המועדפת עבור כל טקסון, ואת תקופת החיים מיוצג, תשתנה בהתאם השאלה שנבחנה ודוגמאות זמינים.
3. תרגיל בחדר מאוורר היטב בעת לבישת מסיכה כדי למנוע שאיפת אבקת אמייל השן. ללבוש משקפי מגן כדי להגן על העיניים. שימו לב כי כמות האבקה מדגם קדח משתנה בהתאם הציוד המשמש עבור ניתוח, פרוטוקול pretreatment וגודל של השן. תרגיל במהירות נמוכה על מנת למנוע חימום הדגימה.
   הערה: כ, 4-8 מ ג של אבקת הדגימה היא יעד המתאים עבור ניתוחים מרובים באמצעות מערכת גז באינטרנט הקדמה והכנה איזוטופ יחס ספקטרומטר מסה ולבדיקה diagenetic. להיות מודע כי המהירות שבחרת התרגיל יהיה תלוי השבריריות של המדגם, דורש רמה מסוימת של ניסוי וטעייה. באופן כללי, על תרגיל ידניים, שתיים מתוך חמש ברים של כוח הן מספקות. לקדוח את אבקת שיניים בגלל חתיכת נייר אלומיניום נקי או שקילה נייר.
4. לאסוף את אבקת האמייל וכתוצאה מכך ולהעביר אותו לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה 1.5 mL זה יש כבר tared על איזון מדויק כראוי לפני הקידוח. תווית כל שפופרת עם הכינוי מדגם (איור 3). להקליט את המשקל של מספרים, אמייל מדגם מחברת מעבדה, כמו גם מסד נתונים אלקטרוניים.
5. לפני קידוח כל שן חדשה, נקה את סיביות קודח שימוש קודם באמצעות 0.5 M HCl על רקמה חזקים. לאחר מכן לשטוף את המקדחה עם הממס האורגני (כמו אצטון, מתנול או אתנול) באמצעות רקמה חזקים.
6. בעקבות של קידוח יושב, לנקות את סביבת העבודה ביסודיות באמצעות ייעודי שואב אבק, או יעה עם מברשת. נגב את החלל הדגימה עם מתנול. ואקום או בקלילות לרסס את התרגיל עם אוויר דחוס כדי להסיר אבקה ואבק לדוגמה בין דגימות.

2. רציפים דגימה

הערה: דיגום רציף ניתן לצפות במגוון של צורות, יהיה תלוי טקסון להיות שנדגמו, בגודל של השן, כמו גם את הרזולוציה הזמנית הרצויה.

1. לנקות את השטח של השן להיות שנדגם על-ידי הסרת מאוד דק (~0.1 מ"מ) שכבה של זגוגית השן החיצוניים.
2. תרגיל הדגימות על פני buccal בניצב לציר צמיחה של השן, פועל מצומת שורש אמייל לחלק העליון של הכתר. לקדוח בניצב לציר צמיחה, פסים אופקיים עם כל מדגם וכתוצאה מכך חריץ רחב 1-2 מ מ לאורך השכבה אמייל (איור 1 , איור 4). לטפל כדי למנוע קודחים דרך האמאיל לתוך dentine כפי זה לזהם את המדגם, וכתוצאה מכך המדידה.
   הערה: מספר דגימות שנלקחו ישתנו בהתאם לרזולוציה הרצויה אך ג 10 מייצג יעד המתאים ללמוד שינויים עונתיים אלפא¹³C וערכי¹⁸O אלפא עבור hypsodont בגודל של ביות הבקר.
3. לבחור את המקדחה המתאימה עבור כל דגימה, כמו מרוחב הקו דגימה נקבעת לפי הקוטר של המקדחה.
4. השתמש מלכודת מעטה עדין יותר שיניים הדורשים מספר רב יותר של דוגמאות מצטבר (איור 2) (למשל., שיניים אנושיות), כמו גם עבור קידוח יציב יותר. להגדיר את הדוכן המתקן שמחזיק את התרגיל בצורה מאובטחת, עם המקדחה מצביע כלפי מטה.
   הערה: בעוד הארבעה ניתן להשיג בקלות שן טוחנת האנושי קבוע שימוש בגודל כף יד גישה²⁴, דגימה מעודנת יותר דורש מעטה או CO₂ לייזר אבלציה הגישה כי לא דנו כאן¹⁴. גישה נפוצה אחרת היא שימוש של חצי אוטומטיות microsampling²⁵.
5. להחזיק את השן או להצמיד מלחציים. הקש את זגוגית השן נגד המקדחה והפעילו לחץ. דוגמאות הן קדח בהדרגה על פני buccal מהקודקוד (השיניים. הטוחנות) לבסיס של הכתר במיקום של הצומת אמייל-root (ERJ). שכפל באותה דגימת זרע קידוח אסטרטגיה מספר פעמים קידוח במקביל קו רצוף כל השורה לדוגמה הקודמת. השתמש מקדחה קטנות דיאמונד גלילי השיניים עדינים, כגון כבשים הטוחנות, בקוטר של 1 מ מ (איור 1C).
6. למדוד את המרחק של כל שורה דגימה מן ERJ באמצעות מחוגה ולהקליט במרחק הזה להשוואה.
7. בצע את השלבים 1.3-1.6 לעיל.
   הערה: אם שיניים קטנות, עדינות נבחנים, שיטות הסימון pretreatment ומהירות diagenetic לא החלת דגימות קטן כמו 1-4 מ"ג יפיק תוצאות אמינות על הגדרת הקדמה והכנה גז ופשוט לניתוח קרבונט. מערכות אוטומטיות-ציוד היקפי השינוי יכול להקל על השימוש של משקולות מדגם אפילו נמוכה יותר, אך באופן בלתי נמנע מוגבלים על ידי היחס קרבונט^26,למדה אמייל (4-5% wt)²⁷. חוקרים כדאי להתייעץ עם המעבדה איפה דגימות הולכים ניתן למדוד כדי לקבוע את כמות הדגימה הדרושה.

3. פורייה להפוך אינפרא-אדום מסות/Attenuated הכולל השתקפות שיטה

1. עבור פעולת השירות השתקפות הכולל הקלוש, להקים רקע קאמרית מדגם, או תחת ואקום או בתנאים אטמוספרי רגיל.
2. מניחים כ- 1 מ ג של זגוגית השן מעל הקריסטל יהלום בבית הבליעה מדגם בעזרת מרית. להוריד ולאבטח את ההודעה לדוגמה עד שיש חיבור המשרד בין ה-post, הדגימה את הצלחת יהלום. סגור את תא הדגימה, עם או בלי ואקום בהקמה, בהתאם הקמה או זמינות.
3. למדוד את ספקטרום FTIR המדגם 64 פעמים עבור מספר גל הנע בין 400 ל 4,000 ס מ^-1. המספר הרצוי של משכפל ישתנו בהתבסס על מטרות המחקר, על פי הניתוח של משכפל שלוש, אידיאלי עם aliquots שונים להיות נלקח וחזרתי כדי הצינור microcentrifuge דיור המדגם, יבטיח תוצאות חזקות.
4. לנקות את המרית עם מתנול בין כל aliquot לבין כל דגימה.
5. לבצע תיקון בסיסית בעזרת התוכנה זמינה. התוכנה מפחית אוטומטית את הרקע קאמרית מדגם מהפרופיל FTIR וכתוצאה מכך. כדי להבטיח הפארמצבטית טוב יותר, רק אמייל ספקטרה עם ספיגת המינימלי של 0.06 ללהקה פוספט הגבוה ביותר ב- ~ס מ 1035^-1 צריכים להילקח בחשבון.
6. לפקח על הנוכחות של קלציט קרבונט מזהם משני נפוץ כל הדגימות על-ידי בדיקה לשיא-711 ס מ^-1.
7. לאחר הניתוח, בזהירות לחזור הדגימות שלהם צינורות microcentrifuge שימוש בהתקן מרית או יניקה ולקחת אל השלב הבא של רעלני או ניתוח.
8. לייצא את הנתונים הגולמיים של הגל והעוצמה כקובץ csv (או דומה) ולהשתמש כדי לחשב את מדדי עניין (מדדים נפוצים כוללים אינדקס אתר פוספט, B-אתר אינדקס פוספט, פוספט Crystallinity אינדקס, מים-אמיד במדד פוספט, ו CO-₃-/PO-₄ אינדקס^17,18,19) (טבלה 1).
9. השווה FTIR נובעת הדגימות מאובנים או ארכיאולוגי גדל datasets של זגוגית השן רוצפה מודרני עכשיו זמין^19,הספרות²⁰ כדי לקבוע את האופי וההיקף של שינוי diagenetic אמייל שנדגמו.

4. פשוט חומצה אצטית (0.1 M) רעלני

1. שוקלים את אבקת האמייל עבור כל מדגם צינור microcentrifuge באמצעות איזון לפי הצורך. תווית הצינור בהתאם. אבקת האמייל חייב להיות הקרקע במידה שווה, עם חלקיקים בגודל דומה.
   הערה: חוקרים רבים לנצל את סוכן חמצון, כגון אקונומיקה שתדללו (NaClO) או 30% חמצן (H₂O₂) כדי להסיר אורגניקס מדגם וזה אמור להתווסף בשלב זה. עם זאת, ייתכן ריאגנטים אלה לשנות את הפחמן יציב ואת הערכים איזוטופ החמצן של מדגם אלא ספקטרום של עצם דגימות קולגן בכל מערכת גז ופשוט הקדמה והכנה להדגים כי החומצה הזרחנית 100% מנוצל קרבונט מדידה אינו מגיב עם דגימות אורגניות (איור 5), רומז כי השלב זה לא הכרחי.
2. להוסיף 0.1 מ"ל של 0.1 M חומצה אצטית (לכל 1 מ ג של האמייל) כל דגימה באמצעות פיפטה. להימנע מלגעת הדגימות עם פיפטה. אם הדגימה של פיפטה באים במגע, להשתמש פיפטה חדש עבור הדוגמה הבאה כדי למנוע זיהום לחצות.
3. להתסיס, או באמצעות טלטול או תועמלן אלקטרונית (איור 3), ועוזבים את הדגימות לשבת במשך 10 דקות אבקת האמייל לא אמורים להישאר בחומצה אצטית לתקופה ממושכת של זמן (> 4 שעות).
4. מקם את הדגימות microcentrifuge למשך 2 דקות ב 13,700 x g.
   הערה: חלופה בעלות נמוכה היא השימוש צנטריפוגה מיני במשך 4 דקות ב- g x 3,500, אשר מחזיקה פחות דגימות, אבל הוא פחות זמן רב בהתמודדות עם ערכות מדגם גדולים.
5. כאשר התוכנית microcentrifuge עוצר, החלף 2 מיליליטר מים הנדסה גנטית באמצעות פיפטה נקי, ואז microcentrifuge את הדגימות למשך 2 דקות ב g 13,700 x לחומצה אצטית.
6. להחליף את המים הנדסה גנטית פעמיים נוספות, כמו קודם, ובדוק על נייטרליות. הסר את הנוזלים הנותרים בעזרת פיפטה (מבלי להפריע את תגובת שיקוע).
   הערה: בסך הכל שלושה שוטף עם מים הנדסה גנטית היא הליך רגיל כדי להגיע נייטרליות. צריך לרחוץ את הדגימה עד נייטרליות.
7. לחתוך יריעות מצלמות-מיקרוסקופים (1 ס"מ × 1 ס מ) ומניחים מעל כל שפופרת microcentrifuge. תעשה חור קטן במרכז באמצעות חפץ חד כך המדגם מתייבש כראוי.
8. מקום הצינורות להקפיא יבש כדי להסיר את כל הנוזלים הנותרים.
   הערה: אם להקפיא יבש אינו זמין, עדין תנור ייבוש (40 ° C) גם אפשרות, לא צריך שום תופעות לוואי על פחמן יציב ונתונים איזוטופ החמצן.
9. פעם יבש, להסיר את מצלמות-מיקרוסקופים ולסגור את המכסים microcentrifuge. ודא כי צינור תיוג נכון לכתוב מחדש במידת הצורך.
   הערה: זהו השלב האחרון לפני אחסון עבור שוקל, אשר במעבדות עם קרנות מוגבל עשוי להיות השלב האחרון לפני חלוקת הדגימות לניתוח במקום אחר.

5. שקילה ומדידת דוגמאות ותקנים

1. בעזרת מרית, שוקלים לצאת כ 2 מ ג של אבקת האמייל לדיסק פח על איזון רגיש 0.001 מ ג (איור 6). ואז בזהירות להעביר את הדגימה לתוך בקבוקון זכוכית בורוסיליקט עמידי חומצה זרחתית. כמות זו של האמייל נדרש להניב תוצאות אמינות בשל היחס קטן יחסית קרבונט ב אמייל השן.
2. לנקות את המרית בין דוגמאות שימוש מתנול להשתמש בדיסק טרי, נקי או שקילה קיבול עבור כל דגימה.
3. שוקלים לצאת 0.2 מ ג ברמה בינלאומית כגון NBS18 הבינלאומית לאנרגיה אטומית, 603 הבינלאומית לאנרגיה אטומית, CO8 הבינלאומית לאנרגיה אטומית או מרק קאקו₃. תקן ללא צורך במיקור חוץ מסיבים על אמייל homogenized של שן גדול יכול לשמש היטב²⁰. לריצה מלא של דגימות 76, תקנים, שימוש בדגימות 61 ותקני 15, אשר צריך להיות מופץ באופן שווה כל הפעלה. מספר מחקרים דיווחו על המספרים המתאימים סטנדרטים ופרטים המחקר הארכיאולוגי^20,28.
   הערה: רעלני חוזרות וניתוח אמייל בתקן הבית, על פני מספר הרצפים של דגימות הארכיאולוגי, היא גם עשויה לספק מדד המתאים של דיוק הדגימות נחקר²⁰.
4. הדק שתוכננה עפעפיו, נגיש המחט עד מחצה חזק אבל לא נשאב לתוך הבקבוקון. לא על הדק המכסה הלחץ על מחצה יקבל חזקה מדי, עלולה לגרום בסופו של דבר במחט שבורה במהלך ניתוח. מקם את הבקבוקונים סדר המפורטים בתוך בלוק חימום-70 מעלות צלזיוס. חייב להיות אמין עבור הערך לתוך התוכנה המחשב הקליט את ההזמנה ואת משקולות של דגימות.
5. למדוד את הדגימות לפי שלושה שלבים: 1) מיושרות למלא את הדגימות עם הליום טהור, 2) להוסיף חומצה זרחתית, 3) למדוד את הדגימה.
   1. לרוקן את הדגימות עם הליום טהור (כיתה 5.0) עם קיבולת של 100 מ ל/דקה במשך 5 דקות כדי לשטוף הסביבתית.
   2. להוסיף 4-5 טיפות של חומצה זרחתית (99%, צפיפות 1.85 g/mL) לדגימת המכילות קרבונט. התגובה בין מדגם H₃פו₄ מתחיל. במהלך התגובה, CO₂ משוחרר אשר נושאת את הערך איזוטרופי של יונים קרבונט CO₃^{2 -} המדגם.
   3. חכה h 1 עבור דגימה עד equilibration של CO₂ . לאחר 1 h, יש למדוד את הדוגמאות כדי להשיג תוצאות אמינות. במהלך הרכישה, תערובת של דגימת דלק הוא עובר על המכשיר. שלב הייבוש מסיר מים הדגימה תערובת.
   4. למדוד את הדגימה על-ידי הפעלת שלוש פסגות של CO₂ הפניה גז עם הרכב איזוטרופי ידוע. שיא עוצמת צריך להיות mV 4000 כדי להתאים את עוצמת הפסגות מדגם (בין 4000 עד 8000 mV). הפסגות גז התייחסות שלוש צריך להיות 20 s ארוכה ו-30 s בנפרד. בצע עם הגדרת מרווח הזמן מדידה של המדגם. למדוד את הדגימה 10 פעמים עבור 5 s כל ו- 55 s בנפרד. ודא כי שיא גובה פוחתת לאורך זמן המציינת תחבורה נאותה של תערובת מדגם/הליום (איור 5).
      הערה: במהלך המדידה, התוכנה מחשבת את ההרכב איזוטרופי המדגם על-ידי השוואת הערך איזוטרופי ידוע, את שיא הגובה, ואת אזור הפסגה של הגז הפניה עם שיא הגובה ואזור של הפסגות של הדגימות. Raw ¹³C /¹²C ו- ¹⁸O /¹⁶O ההרכב של המדגם מחושב.
6. לנרמל את הדגימות לאחר מדידה.
   הערה: זה חשוב כי הגז ההפניה אינו עובר אותו נתיב כימיים ופיזיים כמו הגז לדוגמה כאשר ספקטרומטר מסה. לכן חיוני כי הדגימות מכוילים בנוסף לסטנדרטים בינלאומיים (שלב 5.3) עוברים אותו הפיסיקליות והכימיות הטיפול תוך ריצה כמו הדגימה עצמה²⁰. סטנדרטים בינלאומיים קרבונט אלה מאפשרות הכיול לשתי נקודות של דוגמאות על קנה המידה דלתא בינלאומיים והערכה של דיוק, הדיר במהלך תקופה נתונה.

תוצאות

באמצעות ההליך דגימה שהוצגו לעיל, אמייל מצטבר bioapatite דגימות הוכנו. הניתוח של bioapatite ב אמייל תלוי הדיוק של דגימה, בין אם בתפזורת או מצטבר. במקרה זה, בחרנו להציג את התוצאות של דגימות הארכיאולוגי (שני כבשים) של אזורי אקלים שונים. דוגמאות מצטבר היו מנותח של השן הטוחנת השנייה כבשים...

Discussion

האתגרים של מוצלחת דגימה (בתפזורת, מצטבר) של שיניים מתבסס על הגישה לידע לגבי טכניקות קידוח ולטעום הכנה, לצד ההשקעה בציוד זול יחסית. האתגרים הללו הם surmountable בקלות כאשר ברור ההוראות זמינים בנוגע גישות pretreatment מדגם. במאמר זה, אנו מקווים יש המופץ אלה בצורה ברורה, תמציתי לחוקרים החדשה לשיטות אלו. מל...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dremel Micro	Dremel		https://www.dremel.com/en_US/products/-/show-product/tools/8050-micro
Diamond-tipped drill bit	Dremel		https://www.dremel.com/en_US/products/-/show-product/accessories/7122-diamond-wheel-point
1.5 mL micro-centrifuge tube	Sigma Aldrich		https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t2422?lang=de&region=DE&gclid=EAIaIQobChMI7pHRpauW2QIV77ftCh1p1wjhEAAYASAAEgKzkvD_BwE
Methanol			Linear Formula: CH3OH
Acetic Acid			Linear Formula: CH3CO2H
Dremel rig set-up (workstation)	Dremel		https://www.dremel.com/en_US/products/-/show-product/tools/220-01-workstation
Microcentrifuge	Thermo Scientific		http://www.thermofisher.com/order/catalog/product/75002401
Mini-centrifuge	Sprout		http://www.heathrowscientific.com/sprout-mini-centrifuge-4
Freeze drier	Zirbus Technology		http://www.zirbus.com